显微操作系统的使用
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• 演示显微注射法flash动画
1、目的DNA的准备
构建目的基因的表达载体：目的基因应包含完整的ORF(开放阅读 框)。顺式调控序列、加尾信号。 将环状载体线性化：线性DNA分子的准备
转基因载体的构建 DNA浓度：1显微操作技术
原理
• 采用显微操作系统（倒置显微镜/体视显微镜+显 微操作器）将供体物（基因、细胞核或细胞其他 成分）直接注入宿主细胞（去核卵母细胞、胚胎 细胞或体外培养的细胞）中，研究供体物的功能 或者获得转基因动物的技术。
显微操作系统的使用
植物转基因技术 动物转基因技术
• 显微注射法 • 病毒载体法 • 质粒载体法 • 基因枪法 • 化学刺激法 • 电击法
• 显微注射法 • 逆转录病毒法 • 胚胎干细胞法 • 精子载体法 • 体细胞移植法
（克隆羊）
显微注射法
• 在显微镜下将体外构建的外源目的基因， 用注射针注射到动物受精卵中，使之与动 物基因组整合，从而得到转基因动物的方 法
显 微 操 作 仪
四、显微注射操作过程
• 注射针内装液
（1）使用无菌的微量加样器从微注射针的后部加入待注射样品；
• 注射针安装和定位
（1）将装液后的针头的游离端安在连接器上，然后旋紧连接器以固定针 头，再将其固定到微操作仪的托针管上；
（2）把载有待注射样本的培养皿放在显微镜载物台上，用低倍物镜对准 细胞调焦；
（3）移动针头并在显微镜下调整微操作仪，直到针头的阴影在视野的中 心上方；
（4）使用工作用放大倍数，调准细胞焦距，找到针尖。
• 显微注射
（1）使针尖对准细胞的待注射部位（细胞与针尖在同一焦面上），旋转 推进旋钮，针刺入细胞内（卵膜、细胞膜、核膜）；
（2）旋转加样旋钮，将样本加入，并离开细胞。
1、目的DNA的准备
构建目的基因的表达载体：目的基因应包含完整的ORF(开放阅读 框)。顺式调控序列、加尾信号。 将环状载体线性化：线性DNA分子的准备
转基因载体的构建 DNA浓度：1显微操作技术
原理
• 采用显微操作系统（倒置显微镜/体视显微镜+显 微操作器）将供体物（基因、细胞核或细胞其他 成分）直接注入宿主细胞（去核卵母细胞、胚胎 细胞或体外培养的细胞）中，研究供体物的功能 或者获得转基因动物的技术。
显微操作系统的使用
植物转基因技术 动物转基因技术
• 显微注射法 • 病毒载体法 • 质粒载体法 • 基因枪法 • 化学刺激法 • 电击法
• 显微注射法 • 逆转录病毒法 • 胚胎干细胞法 • 精子载体法 • 体细胞移植法
（克隆羊）
显微注射法
• 在显微镜下将体外构建的外源目的基因， 用注射针注射到动物受精卵中，使之与动 物基因组整合，从而得到转基因动物的方 法
显 微 操 作 仪
四、显微注射操作过程
• 注射针内装液
（1）使用无菌的微量加样器从微注射针的后部加入待注射样品；
• 注射针安装和定位
（1）将装液后的针头的游离端安在连接器上，然后旋紧连接器以固定针 头，再将其固定到微操作仪的托针管上；
（2）把载有待注射样本的培养皿放在显微镜载物台上，用低倍物镜对准 细胞调焦；
（3）移动针头并在显微镜下调整微操作仪，直到针头的阴影在视野的中 心上方；
（4）使用工作用放大倍数，调准细胞焦距，找到针尖。
• 显微注射
（1）使针尖对准细胞的待注射部位（细胞与针尖在同一焦面上），旋转 推进旋钮，针刺入细胞内（卵膜、细胞膜、核膜）；
（2）旋转加样旋钮，将样本加入，并离开细胞。