微柱凝胶法和Coombs法检测孕妇IgG抗-A(B)效价结果分析

微柱凝胶法和Coombs法检测孕妇IgG抗-A(B)效价结果分析
[摘要]目的：比较不同检测方法对孕妇IgG抗-A(B)效价检测结果的影响。

方法：采用微柱凝胶法及抗人球蛋白法检测我院249例门诊和住院O型血待产孕妇IgG抗-A(B)效价。

观察结果，以达到2+的最高稀释度作为抗体效价。

结果：微柱凝胶法检测IgG抗-A平均效价51.37，lgG抗-B平均效价48.70；抗人球蛋白法检测IgC抗-A平均效价18.62，IgG抗-B平均效价15.85。

微柱凝胶法检测IgG抗-A(B)平均效价高于抗人球蛋白法，差异有统计学意义。

微柱凝胶法检测IgG抗-A(B)效价≥1：64的孕妇共117人，按目前临床常用阳性临界值1：64计算，总阳性率为46.99％。

其中IgG抗-A阳性率为51.24％，IgG抗-B阳性率为42.97％。

抗人球蛋白法检测结果为44人抗体效价≥1：64，总阳性率为17.67％，其中IgG抗-A阳性率19.83％，IgG抗-B效价阳性率15.63％。

微柱凝胶法检测孕妇IgG抗-A(B)阳性率高于抗人球蛋白法，差异有统计学意义。

结论：不同方法检测lgG抗-A(B)效价灵敏度不同，微柱凝胶法灵敏度高于抗人球蛋白法。

微柱凝胶法不适于采用传统抗人球蛋白法确定的阳性临界值，以免因对病情估计过高而进行过度治疗。

微柱凝胶法用于孕妇IgG抗-A(B)效价检测时，应该结合大量实验数据与临床资料重新界定阳性临界值。

[关键词]微柱凝胶法；抗人球蛋白法；IgG抗-A(B)
新生儿溶血病(hemolytic disease of the newbom，HDN)是由于母婴血型不合导致母亲对胎儿红细胞发生同种免疫反应而引起的溶血性疾病。

该病发病机制是胎儿红细胞从父亲那里继承了母亲缺乏的血型抗原，此种红细胞血型抗原在胎儿时期进入母体，刺激母体产生相应的IgG型抗体，血型抗体通过胎盘Fc受体进入胎儿体内，破坏胎儿红细胞从而引起新生儿溶血。

临床研究证实母婴ABO血型或Rh血型不符都能引起该病，其中以O型血孕妇孕育非O型血胎儿引起的新生儿溶血病较为常见。

研究表明，IgG抗-A(B)效价高低与新生儿溶血病发病率呈正相关，因此，定期检测O型血孕妇igG抗-A(B)效价对预防新生儿溶血病并及时进行产前治疗有积极作用。

近年来随着微柱凝胶技术在血型鉴定、抗体筛查等方面的广泛应用，该技术逐渐应用于IgG抗-A(B)效价的检测。

本研究同时采用微柱凝胶法及抗人球蛋白法(Coombs test)对249例O-A及O-B血型不合的O 型血孕妇IgG抗-A(B)效价进行检测，旨在比较两种检测方法的灵敏度，以期为临床新生儿溶血病的预防、产前诊断和治疗提供理论依据。

1.材料与方法
1.1标本来源
249例血清标本均来自我院门诊和住院待产O型血孕妇，其中丈夫血型A 型121例，B型128例。

1.2仪器与试剂
瑞士达亚美微柱凝胶检测系统(包括定速离心机、恒温孵育器、LISS／Coombs卡及其配套试剂等)、恒温水浴箱等。

0.2mol·L-1巯基乙醇(2-Me)由长春博得生物技术有限责任公司提供，0.8％标准A、B型红细胞悬液均由北京金豪制药有限责任公司提供，抗人球蛋白试剂由上海血液生物医药有限责任公司提供。

1.3检测方法
取孕妇血清0.4ml加入0.2mol·L-12-Me0.4ml，混和，置37℃水浴2h，将经2-Me处理的血清用生理盐水作倍比稀释，稀释度分别为1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256、1：512、1：1024、1：2048。

将50ul0.8％红细胞悬液(A或B型)加入微柱凝胶卡反应室，再加入倍比稀释后的血清各25ul，孵育15min，离心10min。

观察凝集情况，以达到2+的最高稀释度作为抗体效价。

抗人球蛋白法参考第3版《全国临床检验标准操作规程》进行。

1.4统计学处理
应用SPSS17进行卡方检验、抗体效价对数转换后进行t检验。

2.结果
检测249例O型血孕妇IgG抗-A(B)效价，其中IgG抗-A共121人，IgG抗-B共128人。

微柱凝胶法检测IgG抗-A平均效价51.37，IgG抗-B平均效价48.70；抗人球蛋白法检测IgG抗-A平均效价18.62，IgG抗-B平均效价15.85。

微柱凝胶法检测孕妇IgG抗-A(B)平均效价高于抗人球蛋白法，差异有统计学意义(t值分别为31.26和33.34，JP＜0.001)。

见表1、2。

微柱凝胶法检测249例孕妇IgG抗-A(B)效价，共117人效价≥1：64，以临床普遍采用的1：64作为孕妇血清IgG抗-A(B)阳性临界值，则总阳性率为46.99％。

其中59人IgG抗-A效价≤32，62人IgG抗-A效价≥64，IgG抗-A效价阳性率为51.24％。

73人IgG抗-B效价≤32，55人抗体效价≥64，IgG抗-B效价阳性率为42.97％。

抗人球蛋白法检测结果为44人抗体效价≥1：64，总阳性率为17.67％。

97人IgG抗-A效价≤32，24人IgG抗-A效价≥64，IgG抗-A效价阳性率为19.83％。

108人IgG抗-B效价≤32，20人IgG抗-B效价≥64，IgG抗-B效价阳性率为15.63％。

微柱凝胶法检测孕妇IgG抗-A效价阳性率高于抗人球蛋白法，差异有统计学意义(x2=26.05，P＜0.05)。

微柱凝胶法检测IgG抗-B效价阳性率高于抗人球蛋白法，差异有统计学意义(x2=23.10，p＜0.05)。

见表3。

3.讨论
研究表明A、B型人血清中的血型抗体主要为IgM，IgG抗体含量极少，然而O型个体血清中不仅含有IgM抗体，还有一定量的IgG抗体，IgG抗-A(B)能够通过胎盘破坏非O型血胎儿的红细胞引起新生儿溶血。

溶血引起的高胆红素血症比非溶血性高胆红素血症危害性更大，溶血产生的大量未结合胆红素透过血脑屏障沉积在基底神经节、脑干神经核从而产生神经系统症状，严重者甚至引起死亡，应积极防治。

因此，夫妻间ABO血型不合的O型血孕妇应定期进行产前IgG抗体效价检测，对抗体效价异常增高者应进行妊娠期干预治疗以减少新生儿溶血病的发生。

血清IgG抗体检测方法较多，包括传统的抗人球蛋白法、聚凝胺法以及微柱凝胶法等，其中传统的抗人球蛋白法为经典检测方法，微柱凝胶法为近年来逐渐应用于IgG抗-A(B)抗体效价检测的新型检测方法。

本研究同时采用微柱凝胶法及传统抗人球蛋白法进行IgG抗-A(B)效价检测，旨在比较两种检测方法的灵敏度，以便为临床新生儿溶血病的预防及产前诊断和治疗提供更准确的参考数据。

研究结果显示，微柱凝胶法检测IgG抗-A平均效价51.37，阳性率为51.24％，抗人球蛋白法检测IgG抗-A平均效价18.62，阳性率为19.83％，微柱凝胶法检测IgG抗-A平均效价及阳性率高于抗人球蛋白法，差异有统计学意义；微柱凝胶法检测IgG抗-B平均效价48.70，阳性率为42.97％，抗人球蛋白法检测IgG 抗-B平均效价15.85，阳性率为15.63％，微柱凝胶法检测IgG抗-B平均效价及阳性率高于抗人球蛋白法，差异有统计学意义。

以上结果表明微柱凝胶法较传统抗人球蛋白法更为敏感。

由于两种检测方法灵敏度存在差异，目前临床普遍应用的阳性临界值1：64(该值确立基础为传统抗人球蛋白法)不适于继续作为微柱凝胶法检测IgG抗-A(B)的参考值，避免由于检测方法敏感性提高而进行不必要的产前治疗。

陆少颜等应用传统抗人球蛋白法测得lgG抗-A(B)阳性率同样较低，分别为11.9％和18.89％，低于本研究中微柱凝胶法检测结果。

郭博等在研究微柱凝胶法检测孕妇血型抗体效价时也证实该方法较传统方法检测结果高2～3个梯度，并建议将微柱凝胶法的正常参考值定为1：256。

大量研究表明，微柱凝胶法检测IgG抗-A(B)的阳性I临界值有必要重新确定，因此，我们需要进行更大量深入的实验研究及临床观察。