赭曲霉毒素A量子点免疫荧光探针的制备研究
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◎ 彭煜珂，杨玉洁，张鑫海，马丹倪，雷佳文 （中南民族大学生命科学学院，湖北 武汉 430074） Peng Yuke, Yang Yujie, Zhang Xinhai, Ma Danni, Lei Jiawen (College of Life Sciences, South-Central University for Nationalities, Wuhan 430074, China)
XIANDAISHIPIN 现代食品 /201
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分析检测 Analysis and Testing
Байду номын сангаас
1 材料与方法
1.1 材料和仪器 氯化镉、碲粉、异丙醇、98% 硼氢化钠，购自国药
集团化学试剂有限公司；1-（3- 二甲氨基丙基）-3- 乙 基碳二亚胺盐酸盐（EDC）、N- 羟基琥珀酰亚胺（NHS）、 3- 巯基丙酸，购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司， 所 有 试 剂 均 为 分 析 纯。 琼 脂 糖、 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 （Tris），购自碧云天生物技术有限公司；OTA-BSA 购自 Sigma 公司，抗 OTA 抗体由中国农业科学院油 料作物研究所提供。
基 金 项 目： 中 南 民 族 大 学 教 研 项 目“ 基 于 体 验 式 教 学 方 法 的《 食 品 安 全 学》 课 程 改 革 研 究”（ 编 号： JYX18049）；湖北省自然科学基金项目“农产品中黄曲霉毒素环介导等温扩增免疫分析方法研究”（编号： 2018CFB135）。
作者简介：彭煜珂（1999—），女，本科在读；研究方向为食品质量与安全。 通信作者：雷佳文（1987—），男，博士，讲师；研究方向为食品质量与安全。
法具有特异性强、简便、快速、污染小等优点，被广 泛应用于农产品中 OTA 的快速定性与定量分析 [4]。量 子点（Quantum Dots，QDs）又称无机半导体纳米晶体， 是一种新型的纳米级荧光材料，具有良好的化学惰性、 生物相容性与荧光稳定性，是理想的荧光标记材料之 一，并且可以大幅提高免疫分析方法的信号值与灵敏 度 [5]。本研究利用水热法成功制备出了碲化镉量子点， 并将抗 OTA 特异性抗体与碲化镉量子点进行偶联，构 建了免疫荧光探针，旨在为 OTA 快速免疫检测方法的 建立提供理想材料。
SpectraMax M5 型 多 功 能 酶 标 仪，Molecular Devices 公司生产；100kD 超滤管，MILLIPORE 公司 生产；Centrifuge 5430R 型离心机，Eppendorf 公司生产。 1.2 量子点的合成与表征 1.2.1 量子点的合成
取 26.6 μL 3- 巯基丙酸（MPA）溶于 40 mL 超纯
水中，再加入 36.6 mg 的氯化镉搅拌溶解，将溶液的 pH 调整至 8.00，该过程可观察到溶液逐渐澄清；将调 好 pH 的溶液转移至 150 mL 的三颈烧瓶内，放入温度 为 100 ℃的油浴锅内，接通冷凝水，于剧烈搅拌条件 下反应。根据不同反应时长可得不同粒径的 3- 巯基丙 酸包覆的 CdTe 量子点，本次反应时长为 20 h，并定 时取样备用。 1.2.2 量子点荧光图谱
摘 要：本文利用水热合成法合成了由巯基丙酸包覆的 CdTe 量子点，以 EDC 为活化剂将 CdTe 量子点与赭曲 霉毒素 A（OTA）单克隆抗体偶联，制备了 OTA 荧光探针，通过紫外吸收光谱、荧光光谱及酶联免疫吸附试验对 偶联产物进行了鉴定，证明合成的荧光探针具有良好的生物活性和荧光特性，可用于 OTA 快速检测方法的建立。
关键词：赭曲霉毒素 A；量子点；荧光探针；酶联免疫吸附试验
Abstract： In this thesis, CdTe quantum dots coated with mercaptopropionic acid were synthesized by hydrothermal synthesis, and CdTe quantum dots were coupled with OTA monoclonal antibody using EDC as activator to prepare OTA fluorescent probes. The coupled products were identified by spectroscopy, and enzyme-linked immunosorbent assay. The synthesized fluorescent probes have good biological activity and fluorescence characteristics and can be used for the establishment of rapid detection methods for OTA.
doi:10.16736/41-1434/ts.2020.17.063
Analysis and Testing 分析检测
赭曲霉毒素 A 量子点免疫荧光探针的制备研究
Preparation of Ochratoxin A Quantum Dots Immunofluorescence Probe
Key words：Ochratoxin A; CdTe quantum dots; Fluorescent probe; ELISA
中图分类号：O657.3
赭曲霉毒素（Ochratoxin，OT）是由青霉属和曲 霉属产生的一种二级代谢毒性产物，具有毒性强、分 布广泛、产毒量高等特点，普遍污染花生、谷物等农 副产品 [1]，对我国食品安全造成严重威胁。赭曲霉毒 素有 7 种结构相似的化合物，其中对农作物污染最严 重、毒性最为剧烈的是赭曲霉毒素 A（Ochratoxin A， OTA），国际癌症研究机构将 OTA 定位为 2B 类致癌 物 [2]。因此，OTA 的检测、控制和脱毒研究受到高度 重视。OTA 的检测方法主要分为化学分析法、生物鉴 定法、仪器分析法及免疫分析法 [3]，其中免疫分析方
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1 材料与方法
1.1 材料和仪器 氯化镉、碲粉、异丙醇、98% 硼氢化钠，购自国药
集团化学试剂有限公司；1-（3- 二甲氨基丙基）-3- 乙 基碳二亚胺盐酸盐（EDC）、N- 羟基琥珀酰亚胺（NHS）、 3- 巯基丙酸，购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司， 所 有 试 剂 均 为 分 析 纯。 琼 脂 糖、 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 （Tris），购自碧云天生物技术有限公司；OTA-BSA 购自 Sigma 公司，抗 OTA 抗体由中国农业科学院油 料作物研究所提供。
基 金 项 目： 中 南 民 族 大 学 教 研 项 目“ 基 于 体 验 式 教 学 方 法 的《 食 品 安 全 学》 课 程 改 革 研 究”（ 编 号： JYX18049）；湖北省自然科学基金项目“农产品中黄曲霉毒素环介导等温扩增免疫分析方法研究”（编号： 2018CFB135）。
作者简介：彭煜珂（1999—），女，本科在读；研究方向为食品质量与安全。 通信作者：雷佳文（1987—），男，博士，讲师；研究方向为食品质量与安全。
法具有特异性强、简便、快速、污染小等优点，被广 泛应用于农产品中 OTA 的快速定性与定量分析 [4]。量 子点（Quantum Dots，QDs）又称无机半导体纳米晶体， 是一种新型的纳米级荧光材料，具有良好的化学惰性、 生物相容性与荧光稳定性，是理想的荧光标记材料之 一，并且可以大幅提高免疫分析方法的信号值与灵敏 度 [5]。本研究利用水热法成功制备出了碲化镉量子点， 并将抗 OTA 特异性抗体与碲化镉量子点进行偶联，构 建了免疫荧光探针，旨在为 OTA 快速免疫检测方法的 建立提供理想材料。
SpectraMax M5 型 多 功 能 酶 标 仪，Molecular Devices 公司生产；100kD 超滤管，MILLIPORE 公司 生产；Centrifuge 5430R 型离心机，Eppendorf 公司生产。 1.2 量子点的合成与表征 1.2.1 量子点的合成
取 26.6 μL 3- 巯基丙酸（MPA）溶于 40 mL 超纯
水中，再加入 36.6 mg 的氯化镉搅拌溶解，将溶液的 pH 调整至 8.00，该过程可观察到溶液逐渐澄清；将调 好 pH 的溶液转移至 150 mL 的三颈烧瓶内，放入温度 为 100 ℃的油浴锅内，接通冷凝水，于剧烈搅拌条件 下反应。根据不同反应时长可得不同粒径的 3- 巯基丙 酸包覆的 CdTe 量子点，本次反应时长为 20 h，并定 时取样备用。 1.2.2 量子点荧光图谱
摘 要：本文利用水热合成法合成了由巯基丙酸包覆的 CdTe 量子点，以 EDC 为活化剂将 CdTe 量子点与赭曲 霉毒素 A（OTA）单克隆抗体偶联，制备了 OTA 荧光探针，通过紫外吸收光谱、荧光光谱及酶联免疫吸附试验对 偶联产物进行了鉴定，证明合成的荧光探针具有良好的生物活性和荧光特性，可用于 OTA 快速检测方法的建立。
关键词：赭曲霉毒素 A；量子点；荧光探针；酶联免疫吸附试验
Abstract： In this thesis, CdTe quantum dots coated with mercaptopropionic acid were synthesized by hydrothermal synthesis, and CdTe quantum dots were coupled with OTA monoclonal antibody using EDC as activator to prepare OTA fluorescent probes. The coupled products were identified by spectroscopy, and enzyme-linked immunosorbent assay. The synthesized fluorescent probes have good biological activity and fluorescence characteristics and can be used for the establishment of rapid detection methods for OTA.
doi:10.16736/41-1434/ts.2020.17.063
Analysis and Testing 分析检测
赭曲霉毒素 A 量子点免疫荧光探针的制备研究
Preparation of Ochratoxin A Quantum Dots Immunofluorescence Probe
Key words：Ochratoxin A; CdTe quantum dots; Fluorescent probe; ELISA
中图分类号：O657.3
赭曲霉毒素（Ochratoxin，OT）是由青霉属和曲 霉属产生的一种二级代谢毒性产物，具有毒性强、分 布广泛、产毒量高等特点，普遍污染花生、谷物等农 副产品 [1]，对我国食品安全造成严重威胁。赭曲霉毒 素有 7 种结构相似的化合物，其中对农作物污染最严 重、毒性最为剧烈的是赭曲霉毒素 A（Ochratoxin A， OTA），国际癌症研究机构将 OTA 定位为 2B 类致癌 物 [2]。因此，OTA 的检测、控制和脱毒研究受到高度 重视。OTA 的检测方法主要分为化学分析法、生物鉴 定法、仪器分析法及免疫分析法 [3]，其中免疫分析方