手足口病病原体EV71的检测方法学比较
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FU Hui，AN Lina，and PENG Bibo． Institute of Disaster Medicine，General Hospital of Chinese People’s Armed Police Force， Beijing 100039，China
【Abstract】 Objective To compare the effects of four different methods in the detection of pathogen enterovirus type 71 （ EV71） of hand-foot and mouth disease （ HFMD） ，and to provide reference for clinical detection． Methods African green monkey cells （ Vero） were cultured until the logarithmic growth phase before they were infected with the EV71 strain． The cytopathic effect （ CPE） method，real-time polymerase chain reaction （ Ｒeal-Time PCＲ） ，Western blot and immunofluorescence were used respectively to detect the infection of EV71． The results of the four tests were compared． Ｒesults All the four methods were able to detect the infection of EV71． Among them，CPE was the most economical method，but its detection cycle was so long as to take at least 96 hours，and it required good vitality of the virus． The effect of detection of Western blot and immunofluorescence was similar，and the experiment could be completed in 72 hours，but their sensitivity was low and a relatively large amount of virus was required． Ｒeal-Time PCＲ detection was both quick and highly sensitive，and the experiment could be completed in 48 hours． Conclusions Each method has its own advantages and disadvantages． A method should be chosen according to different needs so as to make quick and accurate diagnosis of pathogens．
【Key words】 hand-foot and mouth disease； EV71； cytopathic effect； Ｒeal-Time PCＲ； immunofluorescence
近 30 年来，全球新发传染性疾病达 40 余种，中 国目前发现 20 多种［1］。传染病的暴发对人类的生 命健康会造成严重威胁，已成为灾害救援医学领域 的研究热点。其中，肠道病毒 71 型（ enterovirus type 71，EV71） 是人类肠道病毒之一，可通过粪口途径或 直接接 触 感 染 者 的 呼 吸 道 飞 沫 在 人 群 中 传 播［2］。 EV71 感染的临床表现通常为手足口病 （ hand-foot and mouth disease，HFMD） ，多感染 5 岁以下的儿童， 受影响儿童经常出现 3 ～ 4 d 发烧和手、脚、肘、膝和 颊黏膜等部位的疱疹［3］。在大多数情况下，这种疾
【关键词】 手足口病； 肠道病毒 71 型； 细胞病变效应； 实时荧光定量聚合酶链式反应； 免疫荧光 【中国图书分类号】 Ｒ725． 1 DOI:10.14010/ki.wjyx.2018.01.020
Comparison of detection methods of pathogen EV71 in hand-foot and mouth disease
Hale Waihona Puke 60武警医学 2018 年 1 月 第 29 卷 第 1 期 Med J Chin PAP，Vol. 29，No. 1，January，2018
手足口病病原体 EV71 的检测方法学比较
付 辉，安丽娜，彭碧波
【摘要】 目的 比较 4 种不同的方法对手足口病（ hand-foot and mouth disease，HFMD） 病原体肠病毒 71 型（ enterovirus type 71，EV71） 感染的检测效果。方法 非洲绿猴肾细胞（ Vero） 培养至对数生长期后，加入 EV71 病毒株感染。分别采用细胞 病变效应法（ cytopathic effect，CPE） 、实时荧光定量聚合酶链式反应（ real time polymerase chain reaction，Ｒeal-Time PCＲ） 、Western blot 和免疫荧光法检测病毒感染情况，并对 4 种检测结果进行比较。结果 4 种方法均可检测到 EV71 的感染，其中 CPE 最经济实惠，但是检测周期长，需要至少 96 h，并且对病毒活力要求高； Western blot 和免疫荧光检测相近，72 h 即可完成实验， 但灵敏度低，对病毒量有一定要求； Ｒeal-Time PCＲ 检测既快速灵敏性又高，48 h 即可完成实验。结论 不同的方法各有其优 缺点，需要根据不同的需要进行选择，达到快速准确诊断病原体的目的。
【Abstract】 Objective To compare the effects of four different methods in the detection of pathogen enterovirus type 71 （ EV71） of hand-foot and mouth disease （ HFMD） ，and to provide reference for clinical detection． Methods African green monkey cells （ Vero） were cultured until the logarithmic growth phase before they were infected with the EV71 strain． The cytopathic effect （ CPE） method，real-time polymerase chain reaction （ Ｒeal-Time PCＲ） ，Western blot and immunofluorescence were used respectively to detect the infection of EV71． The results of the four tests were compared． Ｒesults All the four methods were able to detect the infection of EV71． Among them，CPE was the most economical method，but its detection cycle was so long as to take at least 96 hours，and it required good vitality of the virus． The effect of detection of Western blot and immunofluorescence was similar，and the experiment could be completed in 72 hours，but their sensitivity was low and a relatively large amount of virus was required． Ｒeal-Time PCＲ detection was both quick and highly sensitive，and the experiment could be completed in 48 hours． Conclusions Each method has its own advantages and disadvantages． A method should be chosen according to different needs so as to make quick and accurate diagnosis of pathogens．
【Key words】 hand-foot and mouth disease； EV71； cytopathic effect； Ｒeal-Time PCＲ； immunofluorescence
近 30 年来，全球新发传染性疾病达 40 余种，中 国目前发现 20 多种［1］。传染病的暴发对人类的生 命健康会造成严重威胁，已成为灾害救援医学领域 的研究热点。其中，肠道病毒 71 型（ enterovirus type 71，EV71） 是人类肠道病毒之一，可通过粪口途径或 直接接 触 感 染 者 的 呼 吸 道 飞 沫 在 人 群 中 传 播［2］。 EV71 感染的临床表现通常为手足口病 （ hand-foot and mouth disease，HFMD） ，多感染 5 岁以下的儿童， 受影响儿童经常出现 3 ～ 4 d 发烧和手、脚、肘、膝和 颊黏膜等部位的疱疹［3］。在大多数情况下，这种疾
【关键词】 手足口病； 肠道病毒 71 型； 细胞病变效应； 实时荧光定量聚合酶链式反应； 免疫荧光 【中国图书分类号】 Ｒ725． 1 DOI:10.14010/ki.wjyx.2018.01.020
Comparison of detection methods of pathogen EV71 in hand-foot and mouth disease
Hale Waihona Puke 60武警医学 2018 年 1 月 第 29 卷 第 1 期 Med J Chin PAP，Vol. 29，No. 1，January，2018
手足口病病原体 EV71 的检测方法学比较
付 辉，安丽娜，彭碧波
【摘要】 目的 比较 4 种不同的方法对手足口病（ hand-foot and mouth disease，HFMD） 病原体肠病毒 71 型（ enterovirus type 71，EV71） 感染的检测效果。方法 非洲绿猴肾细胞（ Vero） 培养至对数生长期后，加入 EV71 病毒株感染。分别采用细胞 病变效应法（ cytopathic effect，CPE） 、实时荧光定量聚合酶链式反应（ real time polymerase chain reaction，Ｒeal-Time PCＲ） 、Western blot 和免疫荧光法检测病毒感染情况，并对 4 种检测结果进行比较。结果 4 种方法均可检测到 EV71 的感染，其中 CPE 最经济实惠，但是检测周期长，需要至少 96 h，并且对病毒活力要求高； Western blot 和免疫荧光检测相近，72 h 即可完成实验， 但灵敏度低，对病毒量有一定要求； Ｒeal-Time PCＲ 检测既快速灵敏性又高，48 h 即可完成实验。结论 不同的方法各有其优 缺点，需要根据不同的需要进行选择，达到快速准确诊断病原体的目的。