槐花米中芦丁的鉴定

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实验五 槐花米中芦丁的鉴定
一、实验目的
• 掌握硅胶薄层层析鉴定鼠李糖和葡 萄糖的方法。
• 掌握芦丁和槲皮素的化学检识方法。
二.实验原理
• 1.根据鼠李糖和葡萄糖在硅胶板上 的分配系数不同达到分离的目的。
• 2.根据芦丁和槲皮素的理化性质来 检识芦丁液的硅胶薄层层析 1. 硅胶板的活化;
• 2. 配制展开剂,正丁醇:醋酸:水= • 4:1: 5 • 3. 将展开剂倒入层析缸中,展开缸中展开
剂的高度4mm左右。 • 4. 画基线,基线距底边1.0~1.5cm;
(一)糖液的硅胶薄层层析
• 5. 点样(点样顺序为:糖液、鼠李糖、葡 萄糖),点样一般为圆点,点样直径一般 不大于2mm,点样时必须注意勿伤薄层表面。
• 6. 将硅胶板放入展开缸的展开剂中,浸入 展开剂的深度为距圆点5mm为宜,一般展距 为8cm,取出薄层板,晾干。
(一)糖液的硅胶薄层层析
7. 喷苯胺-邻苯二甲酸试剂,在105℃下 烘10min。 • 8. 实验结果见图1。
(二)芦丁、槲皮素及糖的化学检识
• 1. 浓硫酸和浓盐酸反应 • 取芦丁或槲皮素数毫克于比色瓷板上,
入少许镁粉,滴加数滴浓HCl,溶液由黄色渐变红 色者表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。
• 5.三氯化铝反应: • 取样品1mg溶于1ml乙醇中,加1%三氯化铁乙醇
液2-3滴,黄酮类呈鲜黄色。
6.醋酸镁反应
• 取样品乙醇液与醋酸镁试剂作纸上反映, 观察荧光。二氢黄酮,二氢黄酮醇类可显 天蓝色荧光,若有5-OH,色泽更明显。而 黄酮,黄酮醇和异黄酮类等显黄色—橙 色—褐色荧光。
分别加浓硫酸或浓盐酸1滴,注意呈色变化, 研磨后溶解成橙色溶液,加较多量的水稀 释后转为浅黄色,析出黄色沉淀。
2.酸性试验:
• 取小试管8支,每4支一组,第一组每管中加入 芦丁1mg,第二组每管中加入槲皮素1mg,每组试 管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠、5%碳酸钠水 溶液、1%氢氧化钠水溶液各2ml,振摇后观察各管 溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。再加浓盐酸滴 酸化,黄色褪去或变浅,并有沉淀析出或产生混 浊。
3.莫氏(molish)反应
• 取试样1mg置小试管中,加乙醇1ml溶解, 加α-萘酚1-2滴,摇匀,倾斜试管,沿管 壁徐徐注入浓H2SO4约1ml,静置。观察两 层溶液的界面变化,出现紫色环者为阳性, 表示样品分子中含有糖的结构(糖和苷类 均呈阳性反应)。比较芸香苷和槲皮素的 不同。
• 4.镁粉—盐酸试验: • 取芦丁1mg,加乙醇2ml在水浴上加热溶解,加
上次实验报告的修订
结论:因为Rfa= Rfd,说明收集液1是芦丁。
因为Rfb1= Rfd;Rfb2= Rfe,说明收集液2是 芦丁和槲皮素的混合物。
因为Rfc= Rfe;说明收集液3是槲皮素。 所以,用聚酰胺柱层析的方法分离芦丁和槲皮
素,用50%的乙醇, 90%的乙醇梯度洗脱时, 先从柱子流出的是芦丁,其次是槲皮素。
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