石蜡切片人乳头瘤病毒6／1l原位杂交的体会
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证试剂不 被蒸发干 ； 消化 和杂交 的时间过长 ， 或 温度和浓度
每一个人 的操作都 可能存在 差异 ， 因此 只有规 范操作 ， 并分 析实验结果成败 的原 因 ， 才能得 到准确 ， 客观 的实验 结果 ， 从 而给 临床病理诊断提供重要 的参考依据。
（ 收稿 日期 ： ２ ０ １ ２ — ０ ６ — ０ ７ ）
造成主次颠倒的后 果。 综上所述 ，原位杂交技术操作 的步骤是 固定不变的 ， 但
等关 系密切 。 消化的 目的是提 高组织 的渗透性和探针 的穿透 力， 便于探针和细胞 内的核酸杂交 ， 增强其 阳性信号 ， 降低背
景着色 ， 为杂交创造条件 。 笔者 的经验是经微波高温 １ ５ ｍｉ ｎ × ２次 ， 注意 中途添补液体 ， 以防干片造成非特异性结 合 ， 出现 假 阳性 ； 杂 交 的条件 最好控 制在 ９ ５℃ ， 变性 ５ ｍ ｉ ｎ ， 然 后 在 ３ ７℃环境 中孵 育 ４ ～ １ ６ ｈ 左右， 在杂交仪 中放人保 湿物 ， 以保 Nhomakorabea・
肖 息 ・
《 中国中西医结合皮肤性病学杂志》 第三届编 委会名单
名誉 主编 秦万 章 主 编 温 海 副 主 编 王 萍 刘维达 许爱娥 李铁男 陈达灿 段逸群 徐丽敏 徐 金华 顾 军 张理 涛 （ 常务 ） 编 委 刁庆春 乌 日娜 方 红 王 刚 王学 民 王宝 玺 王 萍 王
会是 阳性信号减弱 ，甚至消失 ； Ｄ Ａ Ｂ显色则是在 了解其原理 的基 础上 ， 凭着丰富 的实践经验 在显微镜 下观察控 制 ， 笔者 的经 验是在见到表皮 浅层 出现黄褐 色颗粒状 就立 即终 止显 色， 再 经流水冲洗 ， 最后 苏木素复染 ， １ ％盐酸 乙醇分化片刻 ， 切忌时间不宜过长 ，否则苏 木素会覆 盖黄褐色的 阳性信号 ，
冲洗 ， 再经 ２ ０ ０ 高温烤干 ， 然后涂 Ａ Ｐ Ｅ Ｓ 胶， 自然 风干后 待
出率。漂洗切片 的 Ｐ Ｂ Ｓ 缓 冲液的 ｐ Ｈ值应在 ７ ． ４ ７ ． ６ 之间， 温 度在 ４ ８ — ５ ５℃之 间最佳 ， 只有 在此环境 里操作 ， 才 能有效 地 降低背景着色 ， 提高反差效果 ， 这 是实 验成败 的关键 步骤 。 信号放大与显色 ：放大信号则是在 杂交 结合 的基础上 ，
刘卫兵 刘 晓 明 吴泰相 张理涛 李铁男 闵仲生 单士军 赵 广 聂振华 普雄明 蔡茂庆 王家璧 朱学骏 陈学荣 徐 昌泰
强 刘瓦利 刘 维达 宋 坪 张福仁 李淑杰 陆 洁 范卫新 席丽艳 袁定芬 曾凡钦
乐嘉豫 许德清 陈映玲 袁兆庄
经过一抗二 抗和 Ｈ Ｒ Ｐ聚合物 的共 同作用 下逐步形 成 的 ， 起
着定位定性 的关 键作用 ， 若作 用时 间和环境温 度过高 ， 则 易
造成非特异性染色 ， 可能造成假 阳性 ； 若时 间和温度过低 ， 则
用。 这样处理载玻片是因为原位杂交的每个 步骤 都离不开水 环境 ， 经过处理后 的载玻 片 ， 除 了防止组织脱 片外 ， 还可 以除 去玻 片表面的污渍 ， 提高玻 片透明度 ， 便 于光 的折射 ， 这些都 是做好原位杂交 的基础 。 消化 和杂交 ： 这些 步骤 主要 与反应 的时间 、 温度 和浓度
王官清 刘 巧 孙建芳 张广 中 张锡宝 李 斌 陆洪光 范瑞强 徐丽敏 郭红卫 温 海 特 约 编委 丁素先 冯 捷 何芳德 陈洪铎 高 进 （ 按姓氏笔画排序 ）
冉玉平 刘 全忠 朱红梅 张怀亮 张慧敏 李 福秋 陈达灿 郑志忠 徐金华 顾 军 程 波 马圣清 刘玉峰 吴志华 林熙然 黄 畋
观性 ， 因此在操作时 ， 应注意 以下几个方面 。 组 织和载玻 片的处理 ：组织 的固定最好 用 中性福 尔马 林， 其优 点在于除 了能保 持细胞 的原始形 态结构外 ， 还能最 大 限度 的保存 细胞 内的脱氧核糖 核酸 （ Ｄ Ｎ Ａ）和核糖核 酸 （ Ｒ Ｎ Ａ） 的水平 ， 使探针能最大限度地进入细胞 内且不 会与蛋 白质产生交叉 连接反应 ； 载玻片经 清洁液浸泡 ２ ４ ｈ后 ， 流水
艾儒棣 刘 栋 何 威 张春雷 李若瑜 杨 勤萍 陈 斌 施伟 民 秦万章 崔秀梅 赖 维 毛维翰 朱文元 张定国 徐文严 廖万清
乔树芳 刘爱 民 何 黎 张峻岭 李春阳 邹先彪 陈德宇 段逸群 耿 龙 彭振辉 雷铁池 毛舒和 朱光斗 杨希德 徐宜厚 蔡瑞康
中国中西医结合皮肤性 病学杂志 ２ ０ １ ３ 年第 １ ２ 卷第 １ 期
・
３ ５・
号放 大后 显色来进行定性定位 的， 从 组织固定到后期实验操 作， 必 须注重每个环 节 ， 每个步 骤都可能 影响实验结 果 的客
过高都会破坏组织细胞 的核酸的形态结构 ， 但 反之则会降低 探针对 细胞 的穿透力 ， 使 杂交受 阻 ， 减 弱低拷 贝数病 毒的检
卢桂玲 刘 玮 毕志刚 张学军 李邻峰 杨 志 波 陈 丽 郑 捷 涂 平 顾 恒 程爱 阳 方 丽 庄国康 吴绍熙 赵天恩 傅志宜
白彦萍 刘彦 群 许爱娥 张建 中 李 明 杨 森 陈晋广 郑 焱 涂彩霞 高兴华 谢志强 毛玲娥 庄逢康 张玉环 赵 辨 靳培英
每一个人 的操作都 可能存在 差异 ， 因此 只有规 范操作 ， 并分 析实验结果成败 的原 因 ， 才能得 到准确 ， 客观 的实验 结果 ， 从 而给 临床病理诊断提供重要 的参考依据。
（ 收稿 日期 ： ２ ０ １ ２ — ０ ６ — ０ ７ ）
造成主次颠倒的后 果。 综上所述 ，原位杂交技术操作 的步骤是 固定不变的 ， 但
等关 系密切 。 消化的 目的是提 高组织 的渗透性和探针 的穿透 力， 便于探针和细胞 内的核酸杂交 ， 增强其 阳性信号 ， 降低背
景着色 ， 为杂交创造条件 。 笔者 的经验是经微波高温 １ ５ ｍｉ ｎ × ２次 ， 注意 中途添补液体 ， 以防干片造成非特异性结 合 ， 出现 假 阳性 ； 杂 交 的条件 最好控 制在 ９ ５℃ ， 变性 ５ ｍ ｉ ｎ ， 然 后 在 ３ ７℃环境 中孵 育 ４ ～ １ ６ ｈ 左右， 在杂交仪 中放人保 湿物 ， 以保 Nhomakorabea・
肖 息 ・
《 中国中西医结合皮肤性病学杂志》 第三届编 委会名单
名誉 主编 秦万 章 主 编 温 海 副 主 编 王 萍 刘维达 许爱娥 李铁男 陈达灿 段逸群 徐丽敏 徐 金华 顾 军 张理 涛 （ 常务 ） 编 委 刁庆春 乌 日娜 方 红 王 刚 王学 民 王宝 玺 王 萍 王
会是 阳性信号减弱 ，甚至消失 ； Ｄ Ａ Ｂ显色则是在 了解其原理 的基 础上 ， 凭着丰富 的实践经验 在显微镜 下观察控 制 ， 笔者 的经 验是在见到表皮 浅层 出现黄褐 色颗粒状 就立 即终 止显 色， 再 经流水冲洗 ， 最后 苏木素复染 ， １ ％盐酸 乙醇分化片刻 ， 切忌时间不宜过长 ，否则苏 木素会覆 盖黄褐色的 阳性信号 ，
冲洗 ， 再经 ２ ０ ０ 高温烤干 ， 然后涂 Ａ Ｐ Ｅ Ｓ 胶， 自然 风干后 待
出率。漂洗切片 的 Ｐ Ｂ Ｓ 缓 冲液的 ｐ Ｈ值应在 ７ ． ４ ７ ． ６ 之间， 温 度在 ４ ８ — ５ ５℃之 间最佳 ， 只有 在此环境 里操作 ， 才 能有效 地 降低背景着色 ， 提高反差效果 ， 这 是实 验成败 的关键 步骤 。 信号放大与显色 ：放大信号则是在 杂交 结合 的基础上 ，
刘卫兵 刘 晓 明 吴泰相 张理涛 李铁男 闵仲生 单士军 赵 广 聂振华 普雄明 蔡茂庆 王家璧 朱学骏 陈学荣 徐 昌泰
强 刘瓦利 刘 维达 宋 坪 张福仁 李淑杰 陆 洁 范卫新 席丽艳 袁定芬 曾凡钦
乐嘉豫 许德清 陈映玲 袁兆庄
经过一抗二 抗和 Ｈ Ｒ Ｐ聚合物 的共 同作用 下逐步形 成 的 ， 起
着定位定性 的关 键作用 ， 若作 用时 间和环境温 度过高 ， 则 易
造成非特异性染色 ， 可能造成假 阳性 ； 若时 间和温度过低 ， 则
用。 这样处理载玻片是因为原位杂交的每个 步骤 都离不开水 环境 ， 经过处理后 的载玻 片 ， 除 了防止组织脱 片外 ， 还可 以除 去玻 片表面的污渍 ， 提高玻 片透明度 ， 便 于光 的折射 ， 这些都 是做好原位杂交 的基础 。 消化 和杂交 ： 这些 步骤 主要 与反应 的时间 、 温度 和浓度
王官清 刘 巧 孙建芳 张广 中 张锡宝 李 斌 陆洪光 范瑞强 徐丽敏 郭红卫 温 海 特 约 编委 丁素先 冯 捷 何芳德 陈洪铎 高 进 （ 按姓氏笔画排序 ）
冉玉平 刘 全忠 朱红梅 张怀亮 张慧敏 李 福秋 陈达灿 郑志忠 徐金华 顾 军 程 波 马圣清 刘玉峰 吴志华 林熙然 黄 畋
观性 ， 因此在操作时 ， 应注意 以下几个方面 。 组 织和载玻 片的处理 ：组织 的固定最好 用 中性福 尔马 林， 其优 点在于除 了能保 持细胞 的原始形 态结构外 ， 还能最 大 限度 的保存 细胞 内的脱氧核糖 核酸 （ Ｄ Ｎ Ａ）和核糖核 酸 （ Ｒ Ｎ Ａ） 的水平 ， 使探针能最大限度地进入细胞 内且不 会与蛋 白质产生交叉 连接反应 ； 载玻片经 清洁液浸泡 ２ ４ ｈ后 ， 流水
艾儒棣 刘 栋 何 威 张春雷 李若瑜 杨 勤萍 陈 斌 施伟 民 秦万章 崔秀梅 赖 维 毛维翰 朱文元 张定国 徐文严 廖万清
乔树芳 刘爱 民 何 黎 张峻岭 李春阳 邹先彪 陈德宇 段逸群 耿 龙 彭振辉 雷铁池 毛舒和 朱光斗 杨希德 徐宜厚 蔡瑞康
中国中西医结合皮肤性 病学杂志 ２ ０ １ ３ 年第 １ ２ 卷第 １ 期
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３ ５・
号放 大后 显色来进行定性定位 的， 从 组织固定到后期实验操 作， 必 须注重每个环 节 ， 每个步 骤都可能 影响实验结 果 的客
过高都会破坏组织细胞 的核酸的形态结构 ， 但 反之则会降低 探针对 细胞 的穿透力 ， 使 杂交受 阻 ， 减 弱低拷 贝数病 毒的检
卢桂玲 刘 玮 毕志刚 张学军 李邻峰 杨 志 波 陈 丽 郑 捷 涂 平 顾 恒 程爱 阳 方 丽 庄国康 吴绍熙 赵天恩 傅志宜
白彦萍 刘彦 群 许爱娥 张建 中 李 明 杨 森 陈晋广 郑 焱 涂彩霞 高兴华 谢志强 毛玲娥 庄逢康 张玉环 赵 辨 靳培英