ADSCs构建皮肤复合组织修复皮肤溃疡实验研究
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（１．福州 市皮肤 病 防治院 整形美 容外科 ，福建 福 州 ３５００２５； ２．福建 国际旅 行 卫生保 健 中心 ，福 建 福州 ３５０００１）
［摘 要 ］目的 探 索脂肪 来 源干 细胞 构建 皮肤 复合 组 织 的 方 法及修 复 皮肤 溃 疡 的 效果 。方 法 采 用从 人 类 包皮 中分 离 出表 皮 细胞 和成 纤维 细胞 进行体 外 培 养 与鉴 定 ，首 先把 成 纤维 细胞 接 种 于 牛胶 原凝 胶 中培 养 生长 构建 活性 真 皮替代 物 。在裸 鼠背部 制做 直径 １ｃｍ 全 层 皮肤 缺 损 ，将 培 养 ２周 的活性 真 皮替 代 物 移植 于 创 面，观 察 其愈合 情况 ；再接 种 表 皮细胞 于 该活性 真 皮替代 物 中，经 过 气 一液 界 面培养 ，表 皮细胞 成层 并向 基 底上层 分 化 形成表 皮／真 皮 复合 皮。 取 １０ ｍｌ成人 脂肪 抽 吸 物 ，分 离、培 养 和鉴 定 脂 肪 来 源 干 细 胞 （ＡＤ— ＳＣｓ）。将 ＡＤＳＣｓ作 为种 子细 胞接 种 于牛 胶原凝 胶 支架 并行 成 脂 诱 导 和扩 增 培养 构 建 类”脂 肪”组 织 ，再把 复 合 皮 与所构 建 的“脂肪”组织按 表 皮 、真 皮 、皮 下脂肪 的 结构 顺序 ”组合 ”培 养 以构建 出具 有 多层 结构 的皮肤 复 合 组 织。 在裸 鼠背部两侧 建 立直 径 为 １０ ｍｍ 的 圆形 皮肤 创 面模 型，右侧 （实验 侧 ）创面 缺损部 位 植 入 直径 为 １０ ｍｍ 的 多层 复 合组 织，左 侧 （对照 侧 ）进 行 简单 的创 面 包扎 修 复 ，观 察 两 侧 溃疡 愈 合 速度 和质 量 以及 通过 活检 组 织 病理 学检 查比较 各 自的 表皮 、真 皮、成 纤维 细 胞 、血 管 和脂肪 组 织再 生情 况 。结 果 成 纤维 细 胞接 种 于 Ｉ型 牛胶 原凝 胶共 同培 养所 构建 的活 性真 皮替 代 物 类似 真 皮 ，可修 复 皮肤 缺 损 。在 构 建 的 活性 真 皮替 代物 上 种植 表 皮细胞 ，经过 气 一液 界 面培 养 ，表 皮 细 胞 成层 分化 ，形 成复 合 皮 。从 脂肪 组 织 中 可分 离获 取 ＡＤＳＣｓ，它具有 多 向分化 潜 能。ＡＤＳＣｓ与 工型 牛胶 原凝胶 支 架在体 内、外均 可构 建 出脂肪 样组 织 ，复合 皮 与 类“脂肪 ”组 织参 照正 常 皮肤 结构 顺序“组合 ”培 养可 构建 出具 有 多层结 构 的皮肤 复合 组织 。 实验 侧 创 面愈 合 率 、肉芽组 织厚度 、真 皮层 厚度 以及 毛 细血 管 密度 显著 高于对 照侧 。结论 选 择 表 皮细胞 、成 纤维 细胞 、脂肪 来 源干 细胞 （ＡＤＳＣｓ）作 为组 织工 程种 子 细胞 ，以牛 胶原凝 胶 作 为支架 ，能 够构 建 出具 有 多层 结构 的 皮肤 复合 组 织，并可成 功 用于修 复裸 鼠背部 皮肤全 层 组 织缺损 ，具 有提 高愈 合速 度 、增 加愈 合 皮肤厚 度 的作 用。
内蒙古 医学杂 志 Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｍｅｄ Ｊ ２０１８年第 ５０卷第 １期
１
ＤＯＩ：１０．１６０９６／Ｊ．ｃｎｋｉ．ｎｍｇｙｘｚｚ．２０１８．５０．０１．００１
ＡＤＳＣｓ构 建 皮肤 复合 组 织修 复 皮肤 溃疡 实验研 究 ＊
陈 阳 ，宋 良萍 ，察鹏 飞 ，彭 铮 ，何 宇
ＣＨＥＮ Ｙａｎｇ ，ＳＯＮＧ Ｌｉａｎｇ—ｐｉｎｇ ，ＣＨＡ Ｐｅｎｇ—ｆｅｉ ，ＰＥＮＧ Ｚｈｅｎｇ ，ＨＥ Ｙｕ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏ ｆ Ｐｌａｓｔｉｃ ａｎｄ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ。Ｆｕｚｈｏｕ Ｄｅｒｍａｔｏｓｉｓ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｚｈｏｕ ３５００２５ Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｈｅ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｆｕｊｉａｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎ 口ｖｅｌ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｆｕｚｈｏｕ ３５０００１ Ｃｈｉｎａ）
［关组 织 ；修 复 ；皮肤 溃 疡
［中 图分 类号 】Ｒ６４１ ［文 献 标 识 码 ］Ａ ［论 文 编 号 ］１００４—０９５１（２０１８）０１～０００１—０７
Ｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔａ１ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ Ｓｋｉｎ Ｃｏｍ ｐｌｅｘ Ｔｉｓｓｕｅ ｂｙ Ａｄｉｐｏｓｅ——ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ｔｏ Ｒｅｐａｉｒ Ｓｋｉｎ Ｕ ｌｃｅｒｓ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔ ｆｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ ｓｋｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｔｉｓｓｕｅ ｔＯ ｒｅｐａｉｒ ｓｋｉｎ
ｕｌｃｅｒｓ ｗｉｔｈ ａｄｕｌｔ ａｄｉｐｏｓｅ— ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｆｏｒｅｓｋｉｎ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｗｅｒｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｆｉｒｓｔｌｙ ｉｎｔｏ ｂｏｖｉｎｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｇｅｌ ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｄｅｒｍ ａｌ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ．１ ｃｍ ｗｈｏｌｅ ｌａｙｅｒ ｄｅｆｅｃｔ ｗａｓ ｍａｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｂａｃｋ ｏｆ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ．Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｄｅｒ— ｍａｌ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ ｗｈｉｃｈ ｈａｄ ｂｅｅｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ２ ｗｅｅｋｓ ｗａｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｕｌｃｅｒｓ。ｏｂｓｅｒｖｉｎｇ ｔｈｅ ｈｅａｌｉｎｇ．Ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｒ ｍ ａｌ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｓｅｃｏｎｄｌｙ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｒｍａｌ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｒ ｍ ａ１ ｃｅｌｌｓ ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒ— ｅｎｔｉａｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｕｐｐｅｒ ｂａｓｅｍ ｅｎｔ ｔｏ ｂｕｉｌｄ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ａｎｄ ｄｅｒ ｍ ｉｓ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｓｋｉｎ ｂｙ ｇａｓ—ｌｉｑｕｉｄ ｉｎｔｅｒｆａｃｅ ｃｕｌｔｕｒｅ．
［摘 要 ］目的 探 索脂肪 来 源干 细胞 构建 皮肤 复合 组 织 的 方 法及修 复 皮肤 溃 疡 的 效果 。方 法 采 用从 人 类 包皮 中分 离 出表 皮 细胞 和成 纤维 细胞 进行体 外 培 养 与鉴 定 ，首 先把 成 纤维 细胞 接 种 于 牛胶 原凝 胶 中培 养 生长 构建 活性 真 皮替代 物 。在裸 鼠背部 制做 直径 １ｃｍ 全 层 皮肤 缺 损 ，将 培 养 ２周 的活性 真 皮替 代 物 移植 于 创 面，观 察 其愈合 情况 ；再接 种 表 皮细胞 于 该活性 真 皮替代 物 中，经 过 气 一液 界 面培养 ，表 皮细胞 成层 并向 基 底上层 分 化 形成表 皮／真 皮 复合 皮。 取 １０ ｍｌ成人 脂肪 抽 吸 物 ，分 离、培 养 和鉴 定 脂 肪 来 源 干 细 胞 （ＡＤ— ＳＣｓ）。将 ＡＤＳＣｓ作 为种 子细 胞接 种 于牛 胶原凝 胶 支架 并行 成 脂 诱 导 和扩 增 培养 构 建 类”脂 肪”组 织 ，再把 复 合 皮 与所构 建 的“脂肪”组织按 表 皮 、真 皮 、皮 下脂肪 的 结构 顺序 ”组合 ”培 养 以构建 出具 有 多层 结构 的皮肤 复 合 组 织。 在裸 鼠背部两侧 建 立直 径 为 １０ ｍｍ 的 圆形 皮肤 创 面模 型，右侧 （实验 侧 ）创面 缺损部 位 植 入 直径 为 １０ ｍｍ 的 多层 复 合组 织，左 侧 （对照 侧 ）进 行 简单 的创 面 包扎 修 复 ，观 察 两 侧 溃疡 愈 合 速度 和质 量 以及 通过 活检 组 织 病理 学检 查比较 各 自的 表皮 、真 皮、成 纤维 细 胞 、血 管 和脂肪 组 织再 生情 况 。结 果 成 纤维 细 胞接 种 于 Ｉ型 牛胶 原凝 胶共 同培 养所 构建 的活 性真 皮替 代 物 类似 真 皮 ，可修 复 皮肤 缺 损 。在 构 建 的 活性 真 皮替 代物 上 种植 表 皮细胞 ，经过 气 一液 界 面培 养 ，表 皮 细 胞 成层 分化 ，形 成复 合 皮 。从 脂肪 组 织 中 可分 离获 取 ＡＤＳＣｓ，它具有 多 向分化 潜 能。ＡＤＳＣｓ与 工型 牛胶 原凝胶 支 架在体 内、外均 可构 建 出脂肪 样组 织 ，复合 皮 与 类“脂肪 ”组 织参 照正 常 皮肤 结构 顺序“组合 ”培 养可 构建 出具 有 多层结 构 的皮肤 复合 组织 。 实验 侧 创 面愈 合 率 、肉芽组 织厚度 、真 皮层 厚度 以及 毛 细血 管 密度 显著 高于对 照侧 。结论 选 择 表 皮细胞 、成 纤维 细胞 、脂肪 来 源干 细胞 （ＡＤＳＣｓ）作 为组 织工 程种 子 细胞 ，以牛 胶原凝 胶 作 为支架 ，能 够构 建 出具 有 多层 结构 的 皮肤 复合 组 织，并可成 功 用于修 复裸 鼠背部 皮肤全 层 组 织缺损 ，具 有提 高愈 合速 度 、增 加愈 合 皮肤厚 度 的作 用。
内蒙古 医学杂 志 Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｍｅｄ Ｊ ２０１８年第 ５０卷第 １期
１
ＤＯＩ：１０．１６０９６／Ｊ．ｃｎｋｉ．ｎｍｇｙｘｚｚ．２０１８．５０．０１．００１
ＡＤＳＣｓ构 建 皮肤 复合 组 织修 复 皮肤 溃疡 实验研 究 ＊
陈 阳 ，宋 良萍 ，察鹏 飞 ，彭 铮 ，何 宇
ＣＨＥＮ Ｙａｎｇ ，ＳＯＮＧ Ｌｉａｎｇ—ｐｉｎｇ ，ＣＨＡ Ｐｅｎｇ—ｆｅｉ ，ＰＥＮＧ Ｚｈｅｎｇ ，ＨＥ Ｙｕ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏ ｆ Ｐｌａｓｔｉｃ ａｎｄ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ。Ｆｕｚｈｏｕ Ｄｅｒｍａｔｏｓｉｓ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｚｈｏｕ ３５００２５ Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｈｅ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｆｕｊｉａｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎ 口ｖｅｌ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｆｕｚｈｏｕ ３５０００１ Ｃｈｉｎａ）
［关组 织 ；修 复 ；皮肤 溃 疡
［中 图分 类号 】Ｒ６４１ ［文 献 标 识 码 ］Ａ ［论 文 编 号 ］１００４—０９５１（２０１８）０１～０００１—０７
Ｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔａ１ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ Ｓｋｉｎ Ｃｏｍ ｐｌｅｘ Ｔｉｓｓｕｅ ｂｙ Ａｄｉｐｏｓｅ——ｄｅｒｉｖｅｄ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ｔｏ Ｒｅｐａｉｒ Ｓｋｉｎ Ｕ ｌｃｅｒｓ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔ ｆｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ ｓｋｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｔｉｓｓｕｅ ｔＯ ｒｅｐａｉｒ ｓｋｉｎ
ｕｌｃｅｒｓ ｗｉｔｈ ａｄｕｌｔ ａｄｉｐｏｓｅ— ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｆｏｒｅｓｋｉｎ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｗｅｒｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｆｉｒｓｔｌｙ ｉｎｔｏ ｂｏｖｉｎｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｇｅｌ ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｄｅｒｍ ａｌ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ．１ ｃｍ ｗｈｏｌｅ ｌａｙｅｒ ｄｅｆｅｃｔ ｗａｓ ｍａｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｂａｃｋ ｏｆ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ．Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｄｅｒ— ｍａｌ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ ｗｈｉｃｈ ｈａｄ ｂｅｅｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ２ ｗｅｅｋｓ ｗａｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｕｌｃｅｒｓ。ｏｂｓｅｒｖｉｎｇ ｔｈｅ ｈｅａｌｉｎｇ．Ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｒ ｍ ａｌ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｓｅｃｏｎｄｌｙ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｒｍａｌ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｒ ｍ ａ１ ｃｅｌｌｓ ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒ— ｅｎｔｉａｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｕｐｐｅｒ ｂａｓｅｍ ｅｎｔ ｔｏ ｂｕｉｌｄ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ａｎｄ ｄｅｒ ｍ ｉｓ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｓｋｉｎ ｂｙ ｇａｓ—ｌｉｑｕｉｄ ｉｎｔｅｒｆａｃｅ ｃｕｌｔｕｒｅ．