解读iso15189关于免疫质控的相关问题

以下是本人总结江苏省某检验牛人对ISO15189免疫解读中关于免疫质控的内容，本人觉得非常经典，很有用，希望对大家有所帮助。

质控目的：为满足检测的目的而采取一定的程序和方法监控和维持检测方法学或试剂盒的性能指标稳定在一定范围内，这个范围由实验室依据行业标准、临床需求、制造商规定以及实验室的实际设置。

浓度宜2×CUT OFF 值左右，阴性质控物浓度宜0.5×CUT OFF 值左右）和位置（不能固定而应随机放置）、稳定性（宜选择生产者声明在一定保存条件下如2-8℃或-20℃以下有效期为6个月以上）、分析频率的选择需满足临床要求的分析范围的测定；用数值判定结果的项目如ELISA、发光技术等可使用Levey-Jennings 质控图。

质控图宜包括以下信息：分析仪器名称和唯一标识—方法学名称—检验项目名称—试剂和校准液批号—质控品名称、批号和有效期。

1. —横坐标（X轴）：每个点表明的是分析批或检测日期，当检测日有多个批次时都应标出。

分析批是指测试系统的准确性、精密度保持稳定的一个间隔,一般不超过24小时。

ELISA等板式试验应把每块板视为一个分析批；发光等均相免疫试验当一个质控失控，采取了纠偏措施后当天再次做的质控应视为另外的一个分析批，需在质控图上标出。

统计学要求至少20个数据才具统计意义，因此在点新的质控点时应保留以前至少19个点，才能观察和分析该点是否在控。

质控图横坐标不需要也不应该固化从每月的1日至31日，只要求每月统计s和cv判断是否满足实验室规定的质量目标和质控目的。

只有当质控物批号改变时才重新绘制新的质控图，而不能随试剂批号的改变
而制作新质控图。

2.纵坐标（Y轴）：用吸光度值或含量点图，不推荐用S/C.O点图。

至少要引出中心线[质控物靶（均）值]和上下失控限三条线。

中心线：靶值这个词特别容易造成歧义，实验室会误认为定值质控物提供的“靶值”就是绘制质控图中心线的靶值，用质控物均值来表示中心线更恰当。

失控限：临床免疫检验的质控目的就是保证检测结果阳性就是阳性、阴性就是阴性，但其方法和试剂由于免疫学的特性、原材料等生产工艺问题使其变异较大，一般批内cv超过15%，而且免疫反应的曲线是非线性的，Westgard质控规则并不完全适合。

偶然误差的失控规则不能简单地使用13s或武断地使用12s判断是否在控。

3.利用cut off验证值可以直接确定上下失控限。

系统误差的失控规则可以选用41s和/或10x。

阴、阳性质控物的测定值均应在质控图中标出：阳性重点是下限，阴性重点是上限，这样的单个超限判为失控；阴、阳性同时上限或同时下限超限判为失控；阳性上限超限而阴性未超或阴性下限超限而阳性未超，可以视为不失控。

根据滴度或稀释度判定阴阳性的技术，如凝集试验，使用弱阳性和阴性外对照质控，阳性质控结果在均值上下一个滴度或稀释度以及阴性质控结果为阴性即为在控，否则视为失控。

纯定性试验如金标试纸、斑点渗滤等，检测装置的内对照外，每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性外对照作为质控。

阴、阳性质控的检测结果分别为阴性和阳性即表明在控，相反失控。

4.质控物的选择
基质：应尽量选择人血清基质，工程菌或动物源性的基质由于人体内有大量的异嗜性抗体的存在引起非特异或中和反应造成假失控。

稀释液也应用人血清，冻干品复溶可以使用生理盐水，避免使用动物源性的小牛血清等。

稳定性：室内质控需要观察一段时间，一般选择生产者声明在一定保存条件下如2-8℃或-20℃以下有效期为6个月以上。

要特别注意开瓶有效期和冻干质控物复溶后分装瓶的有效期与原装瓶有效期的区别，通常前二者的有效期要短许多。

实验室应对这些有效期进行验证。

质控物数量、实验位置和频次：质控物数量应满足一个批号至少半年的实验量。

每分析批至少安排一个弱阳性和一个阴性质控，检测位置不能固定而应随机放置。

试剂盒所设的阴、阳性内对照是用来计算CUT OFF值或阈值的，也有相应的有效性判断标准，但只能在同批号试剂内使用，不能作为质控指标，质控必须是可以监控到不同批号试剂间的变化的外对照。

浓度范围：应围绕该CUT OFF值选择。

一般建议阳性质控物浓度为2×CUT OFF 值左右，阴性质控物浓度为0.5×CUT OFF 值左右。

高值或超高值阳性血清是用来监控“HOOK效应”的，应该在引进分析方法或试剂盒时评价，不需要长期监控，同时其测定值远高于CUT OFF 值对边缘结果的监控也无任何价值。

灭活：尽管所有的制造商或生产者均声明对已知的经血传播的病原体如乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等病原体进行了灭活处理，但应把质控物视为有传染性，因为可能存在灭活不完全以及其他未知的传染性，实际工作中应按生物安全防护的规定进行操作。

冰冻血清的融化和冻干品复溶：免疫活性的质控血清一般需在-20℃以下长期保存，从冰箱取出后建议室温自然融化，一次性使用可以37℃水浴或孵箱快速融化，轻柔地颠倒混匀5次以上；融化的血清置4-8℃保存，而不应该再次-20℃以下保存、反复冻融。

冻干质控品用生理盐水（非蒸馏水，除非有特殊说明）复溶，按规定的量准确（应保证每瓶操作的一致性）加入质控品容器中，盖盖后轻柔地颠倒10次以上，保证充分溶解和混匀；安琣瓶应先轻敲摇晃使顶部的冻干粉掉入底部，用砂轮划开颈部轻敲顶部使其掉落在锐器盒中，加样器加生理盐水后反复抽吸10次以上。

所有操作应避免气泡产生。

复溶后的质控品置4-8℃保存，也可分装小份置-20℃以下保存，只允许冻融一次。

融化、复溶、分装后的血清均在标签上标志操作日期、有效期和操作者。

自制质控品
大量的临床免疫项目无商品化的质控物供应，实验室需自制，其步骤为：–1 收集阳性血清(无明显溶血、黄胆、脂肪血和污染血清)到一定量（至少够本室使用6个月以上的量）；–2 传染性病原体需经56℃、10小时灭活后使用；
–3 0.2μm生物滤膜过滤，去除纤维沉淀物和细菌；–4 稀释，用正常人血清稀释；–5 测定值，与定值参考品进行对比、求值，无参考品时选择在2倍Cut Off值附近的阳性值；–6 分装小瓶（每日用量），加盖、贴签，-20℃冻存备用；–7 稳定性及瓶间差评价。

5.免疫失控限：临床免疫检验的质控目的就是保证检测结果阳性就是阳性、阴性是阴性，但其方法和试剂由于免疫学的特性、原材料等生产工艺问题使其变异较大，一般批内cv超过15%，而且免疫反应的曲线是非线性的，Westgard质控规则并不完全适合。

偶然误差的失控规则不能简单地使用13s或武断地使用12s判断是否在控。

利用cut off验证值可以直接确定上下失控限。

例如：某批号的ELISA 乙肝表面抗原试剂的cutoff值为0.105，其验证值为0.067，阳性质控物均值为0.215，则阳性失控上限为：0.215×[1+（0.105-0.067）/0.105]=0.292；阳性失控下限为：0.215×[1-（0.105-0.067）/0.105]=0.137。

在Y轴上的三个点为：0.292、0.215、0.137。

同样，阴性质控物的均值如为0.058，则应用阳性失控限公式得到的cut off 验证值比例为36%，计算得到阴性质控在Y轴上的三个点为：0.079、0.058、0.037。

? 系统误差的失控规则可以选用41s和/或10x，也就是要求质控图始终保留20个点以上的原因。

阴、阳性质控物的测定值均应在质控图中标出：–阳性重点是下限，–阴性重点是上限，这样的单个超限判为失控；–阴、阳性同时上限或同时下限超限判为失控；–阳性上限超限而阴性未超或阴性下限超限而阳性未超，可以视为不失控。