趋化因子CCL26的表达与结肠癌患者预后的相关性研究

趋化因子CCL26的表达与结肠癌患者预后的相关性研究胡立群;李宁红;谢尚奎
【摘要】目的探讨趋化因子CCL26的表达与结肠癌患者预后的相关性.方法 2008年2月至2010年10月选择160例结肠癌患者的癌组织及相应的癌旁正常结肠黏膜组织标本进行免疫组织化学分析,同时调查所有患者的临床病理资料,随访5年生存情况并进行分析.结果趋化因子CCL26在癌组织与癌旁正常组织的阳性表达率分别为76.3％和15.0％,对比差异有统计学意义(P＜0.05).在160例癌组织中,趋化因子CCL26的表达水平与年龄、性别、分化程度、TNM分期都无明显相关性(P ＞0.05),趋化因子CCL26的阳性表达率和淋巴结转移情况存在明显相关性(P＜0.05).Kaplan-Meier生存率分析显示趋化因子CCL26阳性表达的结肠癌患者5年生存率明显低于趋化因子CCL26阴性表达的结肠癌患者(P＜0.05).多元线性逐步回归分析显示淋巴结转移、CCL26阳性表达、临床分期、低分化为影响结肠癌患者5年死亡的主要独立危险因素(P＜0.05).结论趋化因子CCL26在结肠癌组织中呈现高表达状况,其阳性表达率和淋巴结转移情况存在明显相关性,且能明显影响患者的5年生存率,可作为结肠癌患者临床预后指标之一.
【期刊名称】《检验医学与临床》
【年(卷),期】2016(013)011
【总页数】3页(P1469-1471)
【关键词】趋化因子CCL26;结肠癌;淋巴结转移;5年生存率
【作者】胡立群;李宁红;谢尚奎
【作者单位】广东省深圳市第四人民医院肛肠分院 518000;广东省深圳市第四人
民医院肛肠分院 518000;中山大学附属第六医院肛肠外科,广州510655
【正文语种】中文
结肠癌是临床上的常见恶性肿瘤，位居消化道肿瘤的前3位。

结肠癌在世界许多
国家的5年总生存率在30.0%左右，严重威胁着人类的身心健康[1-2]。

从流行病学的观点看，结肠癌的发病和环境、饮食方式、生活习惯等多因素有关[3]。

分子
生物学的发展提示结肠癌的发生与发展是一个多基因、多步骤参与的遗传性疾病，特别是多种基因被检测到在结肠癌病变中过度表达[4]。

趋化因子是由白细胞分泌
的可溶性小分子蛋白，趋化因子与机体的炎性反应、肿瘤的发生与发展密切相关，趋化因子可通过帮助逃避机体的免疫监测，诱导血管的发生，在肿瘤进展中起着至关重要的作用[5-6]。

趋化因子CCL26是属于CC趋化因子家族中的一员，又称巨噬细胞炎性蛋白，能够介导肿瘤细胞的增殖等生理、病理过程[7-8]。

本文具体探
讨了趋化因子CCL26的表达与结肠癌患者预后的相关性，为研究结肠癌的发病、转移、判断预后提供新的参考资料。

1.1 一般资料160例结肠癌组织及相应的癌旁正常结肠黏膜组织(距离肿块组织5 cm以上)来自2008年2月至2010年10月在深圳市第四人民医院肛肠分院的
手术患者。

纳入标准：通过病理确诊；拥有完整的病史资料和随访结果；术前均未接受任何放疗或化疗；患者知情并签署字知情同意书。

研究得到了医院伦理委员会的批准；癌旁正常组织取样范围内不含肿瘤细胞。

患者男90例，女70例；年龄24～79岁，平均(54.33±4.25)岁，其中年龄<60岁者80例，≥60岁者80例；
分化类型：高分化30例，中分化100例，低分化30例；TNM分期(2009年AJCC分期)：Ⅰ期20例，Ⅱ期100例，Ⅲ 期40例；淋巴结转移者90例。

1.2 免疫组织化学分析采用卵白素-生物素-辣根过氧化氢酶(H2O2)复合物
(ABC)法进行免疫组织化学分析，DAB底物试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有
限公司，ABC试剂盒购自德国Vector Laboratories公司，小牛冻干血清蛋白(BSA)购自美国Sigma公司，兔抗人趋化因子CCL26多克隆抗体(Anti-Eotaxin 3抗体，ab115653)购自英国Abcam公司。

所有组织标本严格按照试剂盒说明书步骤操作：组织切片常规脱蜡至水，PBS冲洗3次(每次5 min)；3%H2O2 37 ℃温育20 min，PBS洗3次(每次5 min)；滴加正常羊血清，37 ℃温育20 min，封闭；加一抗，兔抗人趋化因子CCL26多克隆抗体(1∶100稀释)，4 ℃冰箱温育过夜，PBS洗3次(每次5 min)；滴加二抗(羊抗兔IgG-Biotin)，37 ℃温育45
min(1∶200，稀释)，PBS洗3次(每次5 min)；ABC 37 ℃温育60 min，PBS洗3次；滴加DAB显色剂(每次5 min)，H2O2 37 ℃温育2～10 min，苏木精复染；乙醇梯队脱水、二甲苯透明，中性树胶封片进行显微镜观察。

省略第一抗体作为空白对照，采用已知的阳性切片作为阳性对照。

1.3 观察指标阳性细胞标准为细胞胞质出现黄棕色染色颗粒，在显微镜(×200)下计数5个随机视野，按阳性细胞比例<5%为0分，5%～<25%为1分，25%～<50%为2分，50%～<75%为3分，≥75%为4分；着色强度为棕褐色为3分，棕黄色为2分，淡黄色为1分，无着色为0分。

最后两部分相乘得总分，总分
0～1分为阴性，≥2分为阳性。

同时记录与调查所有患者的临床与病理资料。

所
有患者随访5年，观察与记录预后5年的生存情况。

1.4 统计学处理采用SPSS14.00统计软件处理数据，计数数据以百分比表示，对比采用χ2检验，多因素分析采用多元线性逐步回归分析，采用Kaplan-Meier
法分析对比生存率，以P<0.05为差异有统计学意义。

2.1 趋化因子CCL26的表达情况经过检测，趋化因子CCL26在癌组织与癌旁
正常组织的阳性表达率分别为76.3%和15.0%，对比差异有统计学意义(P<0.05)。

见表1。

2.2 趋化因子CCL26与结肠癌临床病理参数的关系经过判断，在160例癌组
织中，趋化因子CCL26的表达水平与年龄、性别、分化程度、TNM分期都无明
显相关性(P>0.05)，趋化因子CCL26的阳性表达率与淋巴结转移情况存在明显相关性(P<0.05)。

见表2。

2.3 趋化因子CCL26与结肠癌预后5年生存率的关系所有患者随访5年，Kaplan-Meier生存率分析显示趋化因子CCL26阳性表达的结肠癌患者5年生存
率明显低于趋化因子CCL26阴性表达的结肠癌患者(P<0.05)。

见图1。

2.4 危险因素分析把结肠癌患者预后5年死亡作为应变量，把调查的内容与各
项检测数据作为自变量，多元线性逐步回归分析显示淋巴结转移、CCL26阳性表达、临床分期、低分化为影响结肠癌患者预后5年死亡的主要独立危险因素
(P<0.05)。

见表3。

结肠癌是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一，在我国的发病率也呈现明显增加的趋势[9]。

当前趋化因子的应用理论研究是目前生命研究的热点问题，其是一种能
够结合到靶细胞上的特异性G-蛋白-耦联受体的化学诱导因子，相对分子质量在
10×103左右，根据结合配体的不同可分为CXCR、CCR、XCR、CX3CR等[10]。

有研究发现趋化因子及其受体能够介导乳腺癌向某些特定器官的转移，趋化因子受体CXCR4 和CCR7在乳腺癌细胞呈现高表达状况，而其相应配体CXCL12和CCL21可高表达于淋巴结、肺和肝脏等常见的易发生乳腺癌转移的部位，CCL26
基因位于染色体7q11.2，是CC类趋化因子家族中的一员，受体为CCR3，已被
证明在恶性肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用[11-12]。

本研究显示趋化因子CCL26在癌组织与癌旁正常组织的阳性表达率分别为76.3%和15.0%，对比差异有统计学意义(P<0.05)，也说明趋化因子CCL26在结肠癌组织中呈现高表达状况。

恶性肿瘤的特点是侵袭转移，阻断转移途径是肿瘤患者治疗的一个重要方面。

有研究显示多种趋化因子都具有促进肿瘤增殖的作用，CCL20可促进表达CCR6 的结
肠癌细胞增殖，CXCL12可作用于过表达其配体CXCR4 的乳腺癌、卵巢癌等多种肿瘤细胞，并促进其增殖[13]；而阻断CCR5能够促进表达野生型p53基因的乳
腺癌细胞的增殖。

CCL26能够介导炎性细胞的趋化、肿瘤细胞的增殖等，对肿瘤
细胞的生长和转移能力也有调节作用[14]。

本研究显示在160例癌组织中，趋化
因子CCL26的表达水平与年龄、性别、分化程度、TNM分期都无明显相关性(P>0.05)，趋化因子CCL26的阳性表达率和淋巴结存在明显相关性(P<0.05)，也说明趋化因子CCL26在结肠癌的转移中发挥着重要的作用。

当前趋化因子受体的上调表达可能是肿瘤发展过程中的一个普遍特征，相关研究表明肿瘤生长排放大量趋化因子进入血液，可能使富含相应受体的白细胞发生“脱敏”反应，阻断人体内正常的免疫反应，减弱机体对肿瘤侵袭的免疫保护作用，对于恶性肿瘤预后有明显的影响[15-16]。

本研究Kaplan-Meier生存率分析显示趋化因
子CCL26阳性表达的结肠癌患者5年生存率明显低于趋化因子CCL26阴性表达
的结肠癌患者(P<0.05)；多元线性逐步回归分析显示淋巴结转移、CCL26阳性表达、临床分期、低分化为影响结肠癌患者预后5年死亡的主要独立危险因素
(P<0.05)，提示CCL26阳性表达的结肠癌可能具有更大的转移能力，而CCL26
阳性表达情况可能作为结肠癌患者临床预后指标之一。

不过在结肠癌细胞中，CCL26 的异常表达还受信号转导和转录激活因子的调控，这将在下一步研究中进
行深入分析。

总之，趋化因子CCL26在结肠癌组织中呈现高表达状况，其阳性表达率和淋巴结转移情况存在明显相关性，且能明显影响患者的5年生存率，可作为结肠癌患者
临床预后指标之一。

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