一株高效石油降解菌的紫外微波复合诱变改良
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
１ ． ４ 石 油 降 解 率 的 测 定
１ 实验
１ ． １ 材 料与仪 器
石油 ： 采 自新 疆 百 口 泉 井 区 ， 密度 ０ ． ７ ９ ２ ｇ・
ａ ｍ＿ 。 ， 粘度 １ ９ ２ ３ ．１ ４ ｍＰ ａ・ｓ （ ５ ０ ℃） ， 饱 和 烃 含 量
初始 石油 含量 据培 养基 添加 石油前 后 的质 量差获
６的 耐 高温 性 能 良好 ， 在 ５ ５℃的 高温 下仍 具有 ２ ７ ． ４ ２ 的石 油 降解 率 ， 其 最 高 石 油 降 解 率 出现 在 ４ ５℃ ， 达到 ４ ８ ． ７ ２ ， 较
ＫＯ ５ － ２ － １ １ 提高 ２ Ｏ ． ８ １ ， 改 良效 果 明 显 。
亿 亏 与 耋 物 互程 ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ Ｉ ． ３ ０ Ｎ ｏ ． ７
Ｃｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ＆ Ｂｉ ｏ ｅ ｎ ｇｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ
开 发应用困
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ２ －５ ４ ２ ５ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ７ ． ０ １ ９
为１ ０ ０ ｓ 、 微 波 诱 变 时 间为 ４ ５ ５ 。经 过 连 续 ４次 紫外 诱 变 ， 得 到 紫外 诱 变改 良茵 ＵＶ ２ ； 将 其 作 为微 波 诱 变 的 出发 菌株 ， 经２ 次微 波 诱 变 ， 最 终得 到遗 传稳 定 的 高效 耐 高温 石 油降 解 茵 ＵＭ２ — ６ 。比 较 Ｋ０５ — ２ — １ １和 ＵＭ２ — ６的 温 度 耐 受性 发 现 ， ＵＭ２ —
－－－－
７ ． ４。
１ ． ３ 方 法
温环 境下石 油 降解效 率 较 高 的 菌 株 ， 拟 为 高 温干 旱 地 区 的石油 污染 土壤修 复提供 技术 支 持 。
采用 平板 菌落 计数 法 ， 统计诱 变前 后菌落 数 ， 计算
致 死率 ， 绘 制致 死 率 曲 线 ， 据其 选 择 合 适 的诱 变 时间 。 先 将 ＫＯ５ — ２ 一 ｌ ｌ菌悬 液 进 行 紫 外 诱 变 ， 再 将 石油 降解 效果 最好 的紫 外 诱 变 菌 株 作 为 出发 菌株 进 行 微 波 诱 变， 筛选得 到 复合诱 变 的改 良菌 。
ＯＩ Ｌ － ５ １ Ｏ型全 自动 红 外 分 光 测 油 仪 ， 北 京 华 夏 科 创 仪 器技术 有 限 公 司 ； ＨＺ Ｑ － ＱＸ 型 全 温振 荡器 ， 哈 尔 滨 东联 电子 技 术 开 发 有 限公 司 ； Ｂ Ｃ Ｍ一 １ ０ ０ ０型 生 物 净
化 台。
采 用循环 水式 真空 泵将 萃取 液抽 入抽 滤瓶 中。为了保
７ １ ． １ ７ ％， 芳 香分 含量 １ ８ ． ４ ２ ， 胶 质含 量 ９ ． ８ ９ ， 沥青
质含量 ０ ． ５ ２ 。
得 。培养 后 培养基 中的石油 含量 采用 全 自动红外 分光
测 油仪测 定 。测定 参 照 ＧＢ ／Ｔ１ ６ ４ ８ ８ －１ ９ ９ ６ ￣ 水质 、 石 油类 和动 植物 油 的测 定 一红 外光 度 法 》 ， 并 稍 做改 进 ，
证脱 水效 果 ， 将 无水 Ｎａ 。 Ｓ Ｏ 的厚度 加Байду номын сангаас为 １ ５ ｍｍ［ 。
１ ． ２ 菌种 与培养 基
２ 结 果 与 讨 论
２ ． １ 紫外 诱变 改 良 ２ ． １ ． １ 紫 外诱 变剂 量 的确定
菌种 ： 从 克拉玛 依 石 油 污染 土壤 中筛 选 得 到 高 效 石 油 降 解 菌 ＫＯ５ － ２ － １ １ ， 红球 菌属 ， 最 适 生 长 温 度 为 ３ ０℃ ， 最 高耐受 温度 为 ５ Ｏ℃ 。
・ ｍＬ 的菌 悬 液 ５ ｍＩ ， 打开 紫外灯 ， 预热 ２ Ｏ ～３ ０
ｍｉ ｎ ， 在距 离 为 ８ Ｏ ａ ｍ、 功率 为 １ ５ ｗ 的 ２根紫外灯 下照
０ ． ０ １ ｇ ， Ｆ ｅ Ｓ （ ） ４ ０ ． Ｏ １ ｇ ， 酵母 粉 ０ ． ５ ｇ ， 蒸馏水 １ ０ ０ ０ ｍＬ，
者运 用高 效的 紫外 、 微 波 复 合 诱 变 技 术 对 现 有菌 种 进 行改 良， 提 高其 温度 耐受性 和最 适生 长 温度 ， 得到 在高
Ｌ Ｂ培养 基 （ ｇ・ Ｉ ． １ ） ： 胰 蛋 白胨 ｉ ０ ． ０ ， 酵母浸 出膏 ５ ． ０ ， Ｎａ Ｃ １ ５ ． ０ ， 琼脂 ２ Ｏ ． ０ （ 固体 培 养基 用 ） ， ｐ Ｈ值 ７ ． ２
关键词 ： 石 油降解茵； 耐高温 ； 紫 外微 波 复 合 诱 变 ； 改 良
中图分类号 ： Ｘ ５ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ —５ ４ ２ ５ （ ２ ０ １ ３ ） Ｏ ７ —０ ０ ７ １ －０ ３
新疆 地 区夏季高 温 干旱 ， 石 油 污染 土壤 日益严 重 ， 迫切 需要 高效 的耐高 温石 油降 解菌 进行 生 物修复 。作
一
株 高效 石 油 降解 菌 的紫 外微 波 复 合 诱 变 改 良
张云波 ， 刘海 涛 ， 赵 雅坤
（ 中国石 油 大学（ 华 东） 环 境与安 全 工程 系， 山东 青 岛 ２ ６ ６ ５ ８ ０ ）
摘 要： 运 用紫外、 微 波 复 合 诱 变技 术 ， 对 高效 石 油 降 解 菌 ＫＯ ５ － ２ － １ １ 进行 改良 ， 根 据 致 死 率 曲线 ， 选择 紫 外诱 变 时间
无机盐 培 养基 （ ＭＳ Ｍ） ［ １ ］ ： Ｎａ ２ ＨＰ Ｏ４ ０ ．６ ｇ ，
Ｋ Ｈ， ＰＯ４ ０ ． ２ ｇ， Ｎａ ＮＯ３ ４．０ ｇ， Ｍｇ ＳＯｔ ０ ．３ ｇ， Ｃａ Ｃ１ ２
向直 径 ９ ｃ ｍ 的 培养 皿 中加 入 浓 度 为 １ ×１ ０ 。ｃ ｆ ｕ
１ 实验
１ ． １ 材 料与仪 器
石油 ： 采 自新 疆 百 口 泉 井 区 ， 密度 ０ ． ７ ９ ２ ｇ・
ａ ｍ＿ 。 ， 粘度 １ ９ ２ ３ ．１ ４ ｍＰ ａ・ｓ （ ５ ０ ℃） ， 饱 和 烃 含 量
初始 石油 含量 据培 养基 添加 石油前 后 的质 量差获
６的 耐 高温 性 能 良好 ， 在 ５ ５℃的 高温 下仍 具有 ２ ７ ． ４ ２ 的石 油 降解 率 ， 其 最 高 石 油 降 解 率 出现 在 ４ ５℃ ， 达到 ４ ８ ． ７ ２ ， 较
ＫＯ ５ － ２ － １ １ 提高 ２ Ｏ ． ８ １ ， 改 良效 果 明 显 。
亿 亏 与 耋 物 互程 ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ Ｉ ． ３ ０ Ｎ ｏ ． ７
Ｃｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ＆ Ｂｉ ｏ ｅ ｎ ｇｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ
开 发应用困
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ２ －５ ４ ２ ５ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ７ ． ０ １ ９
为１ ０ ０ ｓ 、 微 波 诱 变 时 间为 ４ ５ ５ 。经 过 连 续 ４次 紫外 诱 变 ， 得 到 紫外 诱 变改 良茵 ＵＶ ２ ； 将 其 作 为微 波 诱 变 的 出发 菌株 ， 经２ 次微 波 诱 变 ， 最 终得 到遗 传稳 定 的 高效 耐 高温 石 油降 解 茵 ＵＭ２ — ６ 。比 较 Ｋ０５ — ２ — １ １和 ＵＭ２ — ６的 温 度 耐 受性 发 现 ， ＵＭ２ —
－－－－
７ ． ４。
１ ． ３ 方 法
温环 境下石 油 降解效 率 较 高 的 菌 株 ， 拟 为 高 温干 旱 地 区 的石油 污染 土壤修 复提供 技术 支 持 。
采用 平板 菌落 计数 法 ， 统计诱 变前 后菌落 数 ， 计算
致 死率 ， 绘 制致 死 率 曲 线 ， 据其 选 择 合 适 的诱 变 时间 。 先 将 ＫＯ５ — ２ 一 ｌ ｌ菌悬 液 进 行 紫 外 诱 变 ， 再 将 石油 降解 效果 最好 的紫 外 诱 变 菌 株 作 为 出发 菌株 进 行 微 波 诱 变， 筛选得 到 复合诱 变 的改 良菌 。
ＯＩ Ｌ － ５ １ Ｏ型全 自动 红 外 分 光 测 油 仪 ， 北 京 华 夏 科 创 仪 器技术 有 限 公 司 ； ＨＺ Ｑ － ＱＸ 型 全 温振 荡器 ， 哈 尔 滨 东联 电子 技 术 开 发 有 限公 司 ； Ｂ Ｃ Ｍ一 １ ０ ０ ０型 生 物 净
化 台。
采 用循环 水式 真空 泵将 萃取 液抽 入抽 滤瓶 中。为了保
７ １ ． １ ７ ％， 芳 香分 含量 １ ８ ． ４ ２ ， 胶 质含 量 ９ ． ８ ９ ， 沥青
质含量 ０ ． ５ ２ 。
得 。培养 后 培养基 中的石油 含量 采用 全 自动红外 分光
测 油仪测 定 。测定 参 照 ＧＢ ／Ｔ１ ６ ４ ８ ８ －１ ９ ９ ６ ￣ 水质 、 石 油类 和动 植物 油 的测 定 一红 外光 度 法 》 ， 并 稍 做改 进 ，
证脱 水效 果 ， 将 无水 Ｎａ 。 Ｓ Ｏ 的厚度 加Байду номын сангаас为 １ ５ ｍｍ［ 。
１ ． ２ 菌种 与培养 基
２ 结 果 与 讨 论
２ ． １ 紫外 诱变 改 良 ２ ． １ ． １ 紫 外诱 变剂 量 的确定
菌种 ： 从 克拉玛 依 石 油 污染 土壤 中筛 选 得 到 高 效 石 油 降 解 菌 ＫＯ５ － ２ － １ １ ， 红球 菌属 ， 最 适 生 长 温 度 为 ３ ０℃ ， 最 高耐受 温度 为 ５ Ｏ℃ 。
・ ｍＬ 的菌 悬 液 ５ ｍＩ ， 打开 紫外灯 ， 预热 ２ Ｏ ～３ ０
ｍｉ ｎ ， 在距 离 为 ８ Ｏ ａ ｍ、 功率 为 １ ５ ｗ 的 ２根紫外灯 下照
０ ． ０ １ ｇ ， Ｆ ｅ Ｓ （ ） ４ ０ ． Ｏ １ ｇ ， 酵母 粉 ０ ． ５ ｇ ， 蒸馏水 １ ０ ０ ０ ｍＬ，
者运 用高 效的 紫外 、 微 波 复 合 诱 变 技 术 对 现 有菌 种 进 行改 良， 提 高其 温度 耐受性 和最 适生 长 温度 ， 得到 在高
Ｌ Ｂ培养 基 （ ｇ・ Ｉ ． １ ） ： 胰 蛋 白胨 ｉ ０ ． ０ ， 酵母浸 出膏 ５ ． ０ ， Ｎａ Ｃ １ ５ ． ０ ， 琼脂 ２ Ｏ ． ０ （ 固体 培 养基 用 ） ， ｐ Ｈ值 ７ ． ２
关键词 ： 石 油降解茵； 耐高温 ； 紫 外微 波 复 合 诱 变 ； 改 良
中图分类号 ： Ｘ ５ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ —５ ４ ２ ５ （ ２ ０ １ ３ ） Ｏ ７ —０ ０ ７ １ －０ ３
新疆 地 区夏季高 温 干旱 ， 石 油 污染 土壤 日益严 重 ， 迫切 需要 高效 的耐高 温石 油降 解菌 进行 生 物修复 。作
一
株 高效 石 油 降解 菌 的紫 外微 波 复 合 诱 变 改 良
张云波 ， 刘海 涛 ， 赵 雅坤
（ 中国石 油 大学（ 华 东） 环 境与安 全 工程 系， 山东 青 岛 ２ ６ ６ ５ ８ ０ ）
摘 要： 运 用紫外、 微 波 复 合 诱 变技 术 ， 对 高效 石 油 降 解 菌 ＫＯ ５ － ２ － １ １ 进行 改良 ， 根 据 致 死 率 曲线 ， 选择 紫 外诱 变 时间
无机盐 培 养基 （ ＭＳ Ｍ） ［ １ ］ ： Ｎａ ２ ＨＰ Ｏ４ ０ ．６ ｇ ，
Ｋ Ｈ， ＰＯ４ ０ ． ２ ｇ， Ｎａ ＮＯ３ ４．０ ｇ， Ｍｇ ＳＯｔ ０ ．３ ｇ， Ｃａ Ｃ１ ２
向直 径 ９ ｃ ｍ 的 培养 皿 中加 入 浓 度 为 １ ×１ ０ 。ｃ ｆ ｕ