十二份柑橘种质对褐斑病的抗性评价
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第13卷第22期 Vol.13 No.22
南方农业 South China Agriculture
杨 蕾,洪 林,程昌凤,等.十二份柑橘种质对褐斑病的抗性评价[J].南方农业,2019,13(22):7-11.
十二份柑橘种质对褐斑病的抗性评价
杨 蕾，洪 林※，程昌凤，李勋兰，赵 倩，谭 平 （重庆市农业科学院果树研究所，重庆 401329）
收稿日期：2019-05-27 基金项目：重庆市社会事业与民生保障科技创新专项(c s t c2016s h m sztzx80002)；重庆市现代特色效益农业技术体系项目（2019-02-1）；重庆 市科委2018年绩效激励引导专项（cstc2018jxjl80019）。 作者简介：杨蕾（1985—），女，新疆巴楚人，博士，助理研究员，主要 从事果树栽培与有害生物综合治理研究。E-mail: leir8512@。 ※为通信作者，E-mail: 350971781@。
参考《柑橘种质资源描述规范和数据标准》中柑 橘疮痂病抗性标准[11]，对柑橘褐斑病抗性进行分级。 病情等级分级标准见表1。
表1 柑橘褐斑病病情等级分级标准
级别
病情
0 叶片上无肉眼可见症状
1
S≤15
2
16＜S≤30
S为病斑面积
级别 3 4 5
病情 31＜S≤45 46＜S≤60
S＞61
种质群体对柑橘褐斑病的抗性依病情指数分为6 级（见表2）。 1.2.2 病斑直径法
重庆三峡库区是国家农业部《全国柑橘优势区
域发展规划》长江中上游柑橘产业带的核心区。截至
2017年底，重庆市柑橘栽培面积达21.33万公顷，产量 超过300万吨，综合产值约300亿元。柑橘产业已成为 重庆地区打赢脱贫攻坚战、实现乡村振兴的支柱产业
之一。
柑 橘 褐 斑 病 是 由 交 链 格 孢 菌 （A l t e r n a r i a alternata ）引起的一种严重为害柑橘嫩叶、嫩梢和果 实的真菌性病害[1]。其主要病症表现为病斑中心呈褐
7
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杨 蕾，洪 林，程昌凤，李勋兰，赵 倩，谭 平：十二份柑橘种质对褐斑病的抗性评价
1 材料与方法
1.1 材料与处理 病原菌：柑橘褐斑病菌（Alternaria alternata ）由
西南大学橘研究所植保室分离纯化保存。菌种在 PDA培养基上25 ℃光照培养7 d以活化备用。
病严重的果园发病率达100%、病果率超过80%，严重 影响红橘的产量及品质[6]。Alternaria alternata 可以代谢 产生毒素ACT[7]，对活性氧（ROS）的高效解毒[8]成为 其侵染柑橘的必要条件，病原菌入侵后会影响柑橘防 御酶系统的变化[9]。
柑橘品种杂乱，对各品种间的生态适应性及品 质特征等缺乏统一评价标准，因此重庆市农业委员会 从2011年底开始在7个柑橘主产区县建立了市级柑橘 品种区域试验（简称区试）基地，并于2013年出台了 《柑橘品种区域试验管理办法》，目前区试基地已接 收到20余个参试柑橘品种[10]。经过3年的区试试验， 已确认一批生产性能良好、品质佳的优新柑橘品种， 而对于这些优新品种抗柑橘褐斑病的能力尚未做评 价。本文以重庆地区十二个柑橘优新品种为试验对 象，以交链格孢菌为指示菌株，通过3种不同的抗病 性测定方法，综合测评各品种抵抗柑橘褐斑病的能 力，以期为重庆市柑橘产业发展后续品种储备及良种 推广应用奠定基础。
2019年8月 Aug.2019
摘 要 柑橘褐斑病是一种为害严重的真菌性病害。为了探讨重庆地区优新柑橘种质对柑橘褐斑病菌 (Alternaria alternate )的敏感程度及抗性分级标准，本研究采用室内离体柑橘叶片刺伤接种观察不同柑 橘种质的感病情况，并根据系统聚类分析法、病斑平均直径法、病情指数法3种评价方法对其抗病性 进行分级。结果表明，十二份柑橘种质资源中含高抗品种4个、抗病品种3个、中抗品种2个、感病品 种2个、高感品种1个，未发现免疫种质。98-1长叶橙、津香橙、萨斯塔金、探戈为高抗品种。建议在 生产中可根据需求适当扩大种植面积；塔罗科血橙为高感品种，要对其加强褐斑病的检测与防控，同 时可用抗病新品种丽朵血橙进行替换。 关键词 柑橘种质；柑橘褐斑病菌；抗性 中图分类号：S436.661 文献标志码：A DOI：10.19415/ki.1673-890x.2019.22.003
供试柑橘种质十二份，均采自重庆市柑橘品种 区域试验平台江津区试点。供试品种为98-1长叶橙、 94-1长叶橙、青秋脐橙、塔罗科血橙、丽朵血橙、津 香橙、金块、萨斯塔金、泰浩金、探戈、优山美地金 和W·默科特等，是在近3年的重庆柑橘区域品比试验 中生产性能表现良好的优新柑橘品种。
柑橘叶片样品采集方法为：每个品种选择3株样树 采集叶片，每株树选东南西北4个方向新梢各3枝，每 枝上采5片新叶，每个品种共采集新叶180片。采用10 针刺伤接种法，每片离体新叶片接种１个直径4 mm致 病菌菌饼。接种后将叶片置于25 ℃、相对湿度60%的 恒温恒湿生化培养箱中进行光照黑暗交替培养，光照 12 h，黑暗12 h。每天观察接种叶片上的病斑发展状 况，在培养2 d后，将接种的病菌挑去，分别在4 d、 6 d、8 d、10 d测量计算病斑面积或直径及发病率。 1.2 抗病性评价方法 1.2.1 病情指数法
病斑平均直径法(以下简称AD法)： AD＝∑发病叶片病斑直径／调查叶片数。抗 性分级标准：免疫(I)为 AD＝0 mm；高抗(HR)为
表2 种质群体对柑橘褐斑病的抗性分级
级别 0 1 3 5 7 9
色或者黑褐色，边缘有淡黄色晕圈包围。该病最早于
1903年在澳大利亚柑橘品种“皇帝柑”上发现并报 道，此后在世界多个柑橘主产国的各种柑橘均发现受 到该病为害[2]。我国于2010年开始有相关报道[3]，随后 报道发生面积和为害程度不断扩增[4-5]。刘弘等调查了
2010年重庆万州地区红橘褐斑病的发生情况，发现发
南方农业 South China Agriculture
杨 蕾,洪 林,程昌凤,等.十二份柑橘种质对褐斑病的抗性评价[J].南方农业,2019,13(22):7-11.
十二份柑橘种质对褐斑病的抗性评价
杨 蕾，洪 林※，程昌凤，李勋兰，赵 倩，谭 平 （重庆市农业科学院果树研究所，重庆 401329）
收稿日期：2019-05-27 基金项目：重庆市社会事业与民生保障科技创新专项(c s t c2016s h m sztzx80002)；重庆市现代特色效益农业技术体系项目（2019-02-1）；重庆 市科委2018年绩效激励引导专项（cstc2018jxjl80019）。 作者简介：杨蕾（1985—），女，新疆巴楚人，博士，助理研究员，主要 从事果树栽培与有害生物综合治理研究。E-mail: leir8512@。 ※为通信作者，E-mail: 350971781@。
参考《柑橘种质资源描述规范和数据标准》中柑 橘疮痂病抗性标准[11]，对柑橘褐斑病抗性进行分级。 病情等级分级标准见表1。
表1 柑橘褐斑病病情等级分级标准
级别
病情
0 叶片上无肉眼可见症状
1
S≤15
2
16＜S≤30
S为病斑面积
级别 3 4 5
病情 31＜S≤45 46＜S≤60
S＞61
种质群体对柑橘褐斑病的抗性依病情指数分为6 级（见表2）。 1.2.2 病斑直径法
重庆三峡库区是国家农业部《全国柑橘优势区
域发展规划》长江中上游柑橘产业带的核心区。截至
2017年底，重庆市柑橘栽培面积达21.33万公顷，产量 超过300万吨，综合产值约300亿元。柑橘产业已成为 重庆地区打赢脱贫攻坚战、实现乡村振兴的支柱产业
之一。
柑 橘 褐 斑 病 是 由 交 链 格 孢 菌 （A l t e r n a r i a alternata ）引起的一种严重为害柑橘嫩叶、嫩梢和果 实的真菌性病害[1]。其主要病症表现为病斑中心呈褐
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Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
杨 蕾，洪 林，程昌凤，李勋兰，赵 倩，谭 平：十二份柑橘种质对褐斑病的抗性评价
1 材料与方法
1.1 材料与处理 病原菌：柑橘褐斑病菌（Alternaria alternata ）由
西南大学橘研究所植保室分离纯化保存。菌种在 PDA培养基上25 ℃光照培养7 d以活化备用。
病严重的果园发病率达100%、病果率超过80%，严重 影响红橘的产量及品质[6]。Alternaria alternata 可以代谢 产生毒素ACT[7]，对活性氧（ROS）的高效解毒[8]成为 其侵染柑橘的必要条件，病原菌入侵后会影响柑橘防 御酶系统的变化[9]。
柑橘品种杂乱，对各品种间的生态适应性及品 质特征等缺乏统一评价标准，因此重庆市农业委员会 从2011年底开始在7个柑橘主产区县建立了市级柑橘 品种区域试验（简称区试）基地，并于2013年出台了 《柑橘品种区域试验管理办法》，目前区试基地已接 收到20余个参试柑橘品种[10]。经过3年的区试试验， 已确认一批生产性能良好、品质佳的优新柑橘品种， 而对于这些优新品种抗柑橘褐斑病的能力尚未做评 价。本文以重庆地区十二个柑橘优新品种为试验对 象，以交链格孢菌为指示菌株，通过3种不同的抗病 性测定方法，综合测评各品种抵抗柑橘褐斑病的能 力，以期为重庆市柑橘产业发展后续品种储备及良种 推广应用奠定基础。
2019年8月 Aug.2019
摘 要 柑橘褐斑病是一种为害严重的真菌性病害。为了探讨重庆地区优新柑橘种质对柑橘褐斑病菌 (Alternaria alternate )的敏感程度及抗性分级标准，本研究采用室内离体柑橘叶片刺伤接种观察不同柑 橘种质的感病情况，并根据系统聚类分析法、病斑平均直径法、病情指数法3种评价方法对其抗病性 进行分级。结果表明，十二份柑橘种质资源中含高抗品种4个、抗病品种3个、中抗品种2个、感病品 种2个、高感品种1个，未发现免疫种质。98-1长叶橙、津香橙、萨斯塔金、探戈为高抗品种。建议在 生产中可根据需求适当扩大种植面积；塔罗科血橙为高感品种，要对其加强褐斑病的检测与防控，同 时可用抗病新品种丽朵血橙进行替换。 关键词 柑橘种质；柑橘褐斑病菌；抗性 中图分类号：S436.661 文献标志码：A DOI：10.19415/ki.1673-890x.2019.22.003
供试柑橘种质十二份，均采自重庆市柑橘品种 区域试验平台江津区试点。供试品种为98-1长叶橙、 94-1长叶橙、青秋脐橙、塔罗科血橙、丽朵血橙、津 香橙、金块、萨斯塔金、泰浩金、探戈、优山美地金 和W·默科特等，是在近3年的重庆柑橘区域品比试验 中生产性能表现良好的优新柑橘品种。
柑橘叶片样品采集方法为：每个品种选择3株样树 采集叶片，每株树选东南西北4个方向新梢各3枝，每 枝上采5片新叶，每个品种共采集新叶180片。采用10 针刺伤接种法，每片离体新叶片接种１个直径4 mm致 病菌菌饼。接种后将叶片置于25 ℃、相对湿度60%的 恒温恒湿生化培养箱中进行光照黑暗交替培养，光照 12 h，黑暗12 h。每天观察接种叶片上的病斑发展状 况，在培养2 d后，将接种的病菌挑去，分别在4 d、 6 d、8 d、10 d测量计算病斑面积或直径及发病率。 1.2 抗病性评价方法 1.2.1 病情指数法
病斑平均直径法(以下简称AD法)： AD＝∑发病叶片病斑直径／调查叶片数。抗 性分级标准：免疫(I)为 AD＝0 mm；高抗(HR)为
表2 种质群体对柑橘褐斑病的抗性分级
级别 0 1 3 5 7 9
色或者黑褐色，边缘有淡黄色晕圈包围。该病最早于
1903年在澳大利亚柑橘品种“皇帝柑”上发现并报 道，此后在世界多个柑橘主产国的各种柑橘均发现受 到该病为害[2]。我国于2010年开始有相关报道[3]，随后 报道发生面积和为害程度不断扩增[4-5]。刘弘等调查了
2010年重庆万州地区红橘褐斑病的发生情况，发现发