细胞培养发展历史

1856年，实现红豆杉细胞培养生产紫杉醇的突破。

1885年，Roux温生理盐水培育鸡胚组织；

1887年，培养皿（英文：Petri dish）由在德国生物学家罗伯特·科赫手下工作的细菌学家朱利斯·理查德·佩特里（Julius Richard Petri，1852－1921）于1887年设计，故也称为“佩特里皿”。是一种用于细胞培养的实验室器皿，由一个平面圆盘状的底和一个盖组成，一般用玻璃或塑料制成。

1902年，植物细胞培养是在植物组织培养技术基础上发展起来的。1902年Haberlandt 确定了植物的单个细胞内存在其生命体的全部能力(全能性)，使成为植物组织培养的开端。

其后，为了实现分裂组织的无限生长，对外植体的选择及培养基等方面进行了探索。

1906年，Beebe和Ewing用盖片悬滴培养法，以动物血清做培养基，培养狗淋巴细胞存活了72 小时。现代细胞培养是从Harrison(1907)和Carrel(1912)两人开始的。Harrison参考前人经验，创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法。

1907年，哈里森(Harrison)在无菌条件下用淋巴液作培养基，培养蛙胚神经组织存活数周，并观察到神经细胞突起的生长过程，由此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法，奠定了动物组织体外培养的基础。

1910-1912年，Carrel采用无菌操作、更新培养基、传代，完善了悬滴培养法；

1912年，Haberlandt的学生Kotte和美国的Robins在根尖培养中获得了组织培养的成功。Kotte采用了无机盐、葡萄糖、蛋白胨、天冬酰胺，及添加各种氨基酸的培养基。

1915年，昆虫细胞培养的鼻祖是德国人forhardBendict（1878—1958），发表了有关昆虫细胞培养的第一篇文章。

1923年，Carral设计创立了卡氏瓶培养法，用此法可根据需要随时更换培养液，既有利于组织不断生长，又可以运用不同种类的营养液培养不同的细胞，极大地推动了当时组织培养研究。

在培养基方面，Earle在1948年设计了含有碳酸氢钠等盐类的Earle氏盐溶液，Hank’s在1949年设计了Hank’s氏盐溶液。

Earle、Dulbecco等于1943年创建单层细胞培养法，首建长期传代的L-细胞系；1948年Sanford创建单细胞分离培养法，获L-细胞纯系。

1948年，体外细胞毒性试验细胞毒性实验它是利用体外细胞培养的方法，测定细胞溶解，抵制细胞生长的毒性作用来评价生物材料的潜在细胞毒性。

1948年，RosenBluth等首次报道利用鼠成纤维细胞培养来筛选聚合物，开始了细胞毒性试验评价生物材料的生物相容性的研究与应用工作。

1950年，Enders及其同事发表了第一篇关于在培养细胞中生长病毒的报告，开拓了以动物病毒为研究对象的新领域。作为大规模细胞培养，Copsik等人成功的进行了有关仓鼠肾细胞（BHK）的悬浮培养。

1951年，Dulbecco等采用胰蛋白酶消化组织培养法，获得了单层细胞培养，并开始应用人工合成培养液。随着抗生素的普遍应用，体外培养细胞已经是分离、鉴定和大量培养病毒的简便而又十分有效的工具。

1951年，Gey首建人肿瘤细胞——Hela细胞系。

1952年，水痘—带状疱疹是由一种DNA病毒即水痘—带状疱疹病毒（varicella-zoster virus，VZV）感染引起，该病毒1952年由Weller等首先通过细胞培养获得。

1954年，Peebles采自麻疹病人的材料进行人的肾脏细胞培养，从而成功地分离到病毒。乙醚易使病毒钝化。用人细胞、猴肾等作为第一代培养的细胞，再以FL．Hela细胞等的株细胞进一步增殖，并可在鸡胚的羊膜和绒毛尿囊膜上进行减毒增殖。

1955年，恩德斯（J．H．Enders）发表了用组织细胞培养分离麻疹病毒成功的报告。中国第一代医学病毒学家汤飞凡认为这是病毒方法学的一个突破，必须尽快掌握它。1955年，他就领导闻仲权开始建立了人胚和猴肾细胞的组织培养。

1956年，支原体是一种能营独立生活的最小微生物,它没有坚韧的细胞壁,故其形态有较大的可塑性, 容易通过细菌滤器,是动物细胞系长期培养中常见的污染源。1956年由

Robison['〕首次从体外细胞培养物中分离出支原体。

1957年，各种培养瓶、培养基孕育而生。1957年Dulbecco实验室采用胰蛋白酶消化处理，使成块的组织分散成单个细胞，进行悬液培养，从而开创了细胞培养技术。用单层细胞培养法可以建立很多细胞系(cell line)，通过单细胞分离培养法又可建立克隆细胞株(clone或cell strain)。

1958年，狂犬病毒适应于在细胞培养中增殖，随后利用该技术生产的细胞培养疫苗在安全性和效力上都日臻完善。

1958年，陈善明先生等老一辈科学家带领科研人员根据新疆地区的资源特点，首先开展了动物病毒学的研究，为新疆生物化学的研究开创了局。利用兔肾、牛肾、羊肾和鸡脾等原代单层细胞，进行口蹄疫病毒的研究。采用兔肾细胞培养出的A型III系口蹄疫苗，深受牧区广大牧民的欢迎。

1958年，日本科学家岗田用灭活的仙台病毒诱导人的腹水癌细胞融合成功。后来科学家们又成功地诱导了不同种动物的体细胞融合，并且能将杂种细胞培养成活。随着细胞融合技术的不断改进，现在这项技术已经广泛应用于细胞学、遗传学、免疫学、病毒学等多种学科的研究工作中。

1959年，美国M.Klein 等用牛肾细胞培养物最先分离到腺病毒(命名为“10”系腺病毒)，其抗原结构类似于人腺病毒。1960年

1960年，人的外周血淋巴细胞培养方法是1960年由Moorhead 提出来的。正常情况下，人外周血小淋巴细胞都处在G1期（或G0期），但在体外给予一定的条件，进行培养，经72 h就可获得大量的有丝分裂细胞。这种取材简易、用血量少的培养方法已被广泛采用。