酶转化在淫羊藿苷提取中的应用
微粉化对淫羊藿叶中淫羊藿苷提取效果的研究
Ｐ ００） 因情 志失调 ， 致脾 胃损 伤 ， 湿热 内生 ， 蕴结 于肠 腑 ， 反复发 作 。其 其 降 低 程 度 与拆 方 组 有 显 著 的 统 计 学 意 义 （ ＜ ．５ 。 这 说 明 能 Ｃ大 鼠模 型 血 清 中 Ｔ Ｆ Ｎ－ 病位在大肠 与脾 胃 ， 湿热贯穿于该病 的始终 。关于 Ｕ Ｃ的病因 辛 开 苦 降 合 法 之 半 夏 泻 心 汤 ， 够调 节 Ｕ Ｌ６的含量 ， 通过抑制 Ｔ Ｆ 的产生 ， Ｎ— 减少特异 性或非特异 尚不清 楚 ， 可能与免疫 因素 、 遗传 因素及精神 因素有关 。 目前关 及 Ｉ－ 于细胞 因子在 Ｕ Ｃ中的作 用 日益受到重视 ， 尤其是 Ｔ Ｆ 和 Ⅱ Ｎ－ 性炎症分子的释放 ， 缓解肠 道免疫 破坏作 用 ， 而减轻炎 性细胞 从 达到缓解 和治愈溃疡性结肠炎 的 目的。 在Ｕ Ｃ的发生和发展 中起重要作用 。有报道 Ｕ Ｃ血清和肠组织液 浸润和炎症反应 ，
维普资讯
ＬＳ ＩＨ ＮＭ ＤＣＮ Ｎ Ａ Ｅ Ｉ Ｅ ＩＡＲ ＳＡ Ｃ ０７ Ｏ ．８Ｎ ．２ ＩＨＺ Ｅ Ｅ ＩＩＥＡ ＤＭ Ｔ ＲＡＭ ＤＣ ＥＥ Ｒ Ｈ２０ Ｌ１ Ｏ １ Ｖ
时 珍 国 医 国药 ２０ ０ ７年 第 １ 第 １ ８卷 ２期
２０ ．６ ３ ：３ ０ １ １ （ ）２ ．
黄志欣 ， 劳绍贤 ， 崔琦珍 ， 等．溃结灵 颗粒 治疗活 动期溃疡性 结肠 炎 的 临床 与 实 验研 究 ［ ］ Ｊ ．中国 中西 医 结合 消 化杂 志 ，０ ３ ３ ２ ０ ，
（ １ １１ １ ）：４ ．
与 Ｕ 的发 病 和 病 变 活 动 有 关 。 Ｃ 【 Ｂ ａｇｅ Ｐ ｉ ｏｌ ， ｒｈＳ ｅ ａ． ｕ ｕ ｅｒｓ ｃｏ ａ ｈ ３ｊ ｒｅｇｒＣ ，Ｎｃ ｌＳＭｕｃ Ｈ，ｔ １ Ｔ ｍｏｒｎｃｏｉｆ ｔｒ ｌ ａ ｈ ｓａ ｐ Ｉ－ 一 种 作 用 广 泛 的 促 炎性 因 子 ， 系 列 研 究 发 现 溃 疡性 Ｌ６是 一 ｉ ｔ ｌ ｓ ａｋｒ ｆｎｅｔ ａ ｉｆ ｍ ｔ ｎ Ｊ ．Ｌ ｎｅ， ９ ２ ３９： ｎｓ ｏ ｒｅ ｉ ｓｎ ｌｎａ ｍａｉ ［ ］ ａｃｔ １９ ，３ ｏ ａ ａｍ ｏ ｔ ｉ ｌ ｏ 结肠炎患者血清 Ｉ－ Ｌ６浓度明显升 高。且与病 变范 围和 病变严重 ８ ． ９
β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ的工艺
高效液相色谱（HPLC）仪，包括 600 型泵、717 自动进样 器 、2996DAD 紫 外 检 测 器 、Empower 数 据 处 理 系 统（美 国
Δ 国家自然科学基金资助项目（30973944） ＊ 助 理 研 究 员 ，博 士 。 研 究 方 向 ：天 然 药 物 。 电 话 ：02585608672。E-mail：davidpharm@ # 通讯作者：研究员，博士研究生导师。研究方向：天然药物。电 话：025-85608672。E-mail：jxiaobin2005@
宝 藿 苷 Ⅰ 为 小 檗 科 淫 羊 藿 属 植 物 淫 羊 藿 Epimedium brevicornum Maxim.中的一种多羟基黄酮类单体成分，有较好 的抗肺癌细胞活性，明显优于淫羊藿中其他黄酮苷类化合物， 亦有文献报道其生物药剂学性质明显优于淫羊藿中其他黄酮 类多糖苷[1]。药理研究表明，宝藿苷Ⅰ具有抗肿瘤、抗骨质疏 松等作用[2～4]。有报道大鼠口服淫羊藿苷后在粪便和尿液中均 检出宝藿苷Ⅰ，推测大鼠肠菌酶可将淫羊藿苷转化为宝藿苷 Ⅰ，吸收入血的主要为宝藿苷Ⅰ[5]。宝藿苷Ⅰ在淫羊藿药材中 的含量较低，由于极性相当的成分很多，故分离纯化较困难。 酶解反应具有选择性高、反应条件温和、转化率高、分离纯化 容易、对环境无污染及成本低廉等优点[6，7]。β-葡萄糖水解淫羊 藿苷主要是 C-7 位去葡萄糖，能够选择性地切断淫羊藿 C-7 位 的β-D-葡萄糖，效果优于纤维素酶。本试验研究了β-葡萄糖苷 酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ的工艺，旨在为宝藿苷Ⅰ的工 业化生产提供参考。
Preparation Technology of Baohuoside Ⅰ by Enzymolysis of Icariin with β-glucosidase ZHANG Zhen-hai，CHEN Ling-ling，JIA Xiao-bin，HE Jun-jie，JIN Xin（Key Laboratory of New Drug Delivery System of Chinese Materia Medica，SACTM，Jiangsu Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine， Nanjing 210028，China）
酶改变中药成分的原理
酶改变中药成分的原理酶是一类生物催化剂，它们可以加速化学反应的速度。
酶的作用通常通过结合底物并改变其构象来实现。
酶在中药成分转化中起到了至关重要的作用，能够改变中药化学成分的结构和性质。
中药中的有机化合物通常具有复杂的结构，且往往含有多个官能团。
这些官能团可以通过酶的作用被修饰，从而改变中药的药理活性或药代动力学性质。
下面将以如何利用酶来改变中药成分为例，探讨酶改变中药成分的原理。
1. 酶催化加氧反应：酶可以通过加氧反应来改变中药成分的结构。
一些酶如单酚氧化酶、过氧化酶等可以将中药中的单酚类化合物氧化为对应的醌类化合物。
例如，酚酸类化合物（如丹参酸）可以被酶催化氧化为相应的醌类化合物（如丹酚酸），从而改变了中药的化学结构和性质。
2. 酶催化酯化反应：酯化反应是一种重要的化学反应，可以用于改变中药成分的水溶性和药代动力学性质。
一些酶如酯酶、糖酶等可以催化中草药中的酸类化合物与醇反应形成酯化产物。
例如，某些含有羟基的中药成分可以与某些有机酸反应，形成相应的酯类化合物，从而提高其水溶性，改善其生物利用度，同时也改变了中药的化学活性。
3. 酶催化酶解反应：酶解反应是一种常见的酶催化反应，可以用于改变中药成分的结构和药理活性。
中药中常含有一些多糖类化合物，如淀粉、纤维素等，通过酶解反应可以将这些多糖分解成单糖或低聚糖，从而改变其生物利用度和药理效果。
例如，一些具有降血糖作用的中药成分可以通过酶解反应将多糖分解成低聚糖，提高中药成分的抗糖尿病活性。
4. 酶催化合成反应：酶不仅可以催化反应，还可以在适宜的条件下逆转反应，从而完成反应的合成过程。
例如，一些酶如转酰基酶、戊糖转化酶等可以催化中药中的酮类化合物与适当的底物反应形成醇类或糖类化合物。
这种酶催化合成反应可以形成新的中药成分，改变中药的化学结构和性质。
总之，酶能够通过催化加氧反应、酯化反应、酶解反应以及酶催化合成反应等方式来改变中药成分的结构和性质。
这些改变不仅可以提高中药的药效、药代动力学性质，还可以形成新的中药成分。
酶法在中药提取中的应用和进展
华 东 理 工 大 学
中药现代化工程中心 韩 伟
酶法在中药提取中的应用和进 展
概 述 酶法提取的原理 酶法提取的优点 酶法提取的工艺 酶法在中药提取中的应用 酶法提取灵芝多糖的研究 展 望
一 概
述
中药所含的成分十分复杂，既有有效成分， 中药所含的成分十分复杂，既有有效成分，又有无效成 分和有毒成分。 分和有毒成分。 为了提高中药的治疗效果，降低毒副作用， 为了提高中药的治疗效果，降低毒副作用，选用合理的 提取工艺是非常重要的。传统提取方法( 如煎煮法、 提取工艺是非常重要的 。 传统提取方法 ( 如煎煮法 、 回 流法、浸渍法、渗漉法等) 在提取中药有效成分方面， 流法 、 浸渍法 、 渗漉法等 ) 在提取中药有效成分方面 ， 存在着损失大、周期长、工序多、提取率不高等缺点。 存在着损失大、周期长、工序多、提取率不高等缺点。 20世纪 年代中期以后 20世纪90年代中期以后，我国陆续有研究报道将酶用于 世纪90年代中期以后， 中药提取，并且取得较好的效果。酶法为中药提取提供 中药提取，并且取得较好的效果。酶法为中药提取提供 了一种新的途径，具有较大的应用前景。 了一种新的途径，具有较大的应用前景。
4.2 酶法提取的影响因素和优化
酶法提取的工艺条件及其优化： 酶法提取的工艺条件及其优化：
酶是一类生物催化剂 反应的pH值 温度、酶的浓度、 酶是一类生物催化剂，反应的pH值、温度、酶的浓度、 生物催化剂， 配比和作用时间、 配比和作用时间、 激活剂和抑制剂等都会对酶的活性 产生影响，从而影响整个提取过程。 产生影响，从而影响整个提取过程。 根据实验来对酶反应的工艺条件进行优化 根据实验来对酶反应的工艺条件进行优化 ， 确定各参 优化， 数的最佳值。 数的最佳值。
酶法在中草药各部分提取中的应用
摘要:介绍了提取新技术酶法的原理,以及酶处理技术在中草药各部分提取工艺的研究应用现状,并展望了酶处理技术的应用前景。
关键词:酶法，提取Abstract: The extraction of the principle of the new enzyme technology and processi ng technology of Chinese herbs in all parts of extraction process of application status and prospects of processing applications.Key words: enzymatic extraction[中图分类号] [文献标识码] A [文章编号]现代中药提取中越来越多的应用到纤维素酶，纤维素酶可以快速、温和的分解细胞壁，使中药有效成分析出。
恰当地利用纤维素酶处理中药材，可改变细胞壁的通透性，提高药效成分的提取率。
本文就酶法提取的原理以及酶法对于中草药不同部位的提取情况作一综述。
1.酶法提取的原理中药中植物药占90%，植物细胞由细胞壁及原生质体组成。
细胞壁是由纤维素、半纤维素、果胶质，木质素等物质构成的致密结构，一般分为3层，即胞间层、初生壁和次生壁。
胞间层的主要成分为果胶质。
初生壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成。
初生壁的结构甚为复杂，由纤维素分子组成的微纤丝构成了其基本骨架，在微纤丝之间的空隙中，填着果胶质和半纤维素的胶体状物质。
和初生壁一样，次生壁的骨架也是由纤维素分子组成的微纤丝构成[1]。
在中药提取过程中，细胞原生质体中的有效成分向提取介质扩散时，必须克服细胞壁及细胞间质的双重阻力。
通过选用一些恰当的酶类，如纤维素酶、半纤维索酶、果胶酶等作用于药用植物细胞，使细胞壁及细胞间质中的纤维素、半纤维素、果胶等物质降解，破坏细胞壁的致密结构，引起细胞壁及细胞间质结构产生局部疏松、膨胀、崩溃等变化，减小细胞壁、细胞间质等传质屏障对有效成分从胞内向提取介质扩散的传质阻力，从传质角度促使有效成分提取率提高[2]。
酶法在中药提取中的研究进展
(文献综述(收稿日期:2005209226; 修订日期:2006203210基金项目:东华理工学院硕博基金资助项目(No .DH s0510)作者简介:刘富梁(19812),男(汉族),湖北洪湖人,现任东华理工学院讲师,硕士学位,主要从事天然产物研究工作.酶法在中药提取中的研究进展刘富梁,金卫根,梁华正,刘成佐(东华理工学院,江西抚州 344000)摘要:对酶法在中药提取中应用进行综述,纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶等酶能够破坏植物细胞壁,使有效成分易于浸出,在中药提取中得到了广泛的应用。
关键词:酶法; 提取中图分类号:R284.2 文献标识码:B 文章编号:100820805(2006)0721152201Advances on Appli ca ti on of Enzym e to Extracti on of Ch i n ese Na ti ve M ed i c i n eL I U F u 2liang,J I N W ei 2gen,L I A NG H ua 2zheng,L I U C heng 2zuo(D epart m en t of B iology,East China College of Science and Technology,Fuzhou,J iangxi 344000,China )Abstract:This paper su mmarized advances on app licati on of enzy me t o extracti on of Chinese herbal medicine .Cellulase,pect o 2lase,papayin and s o on can destr oy the p lant cell wall,s o effective component is easy t o leach out .Enzy me obtained the wide 2s p read app licati on in the Chinese native medicine extracti on .Key words:Enzy me; Extracti on 酶法早已广泛地应用于食品、饲料工业以及天然产物的提取,20世纪90年代中期以后我国也陆续有研究报道将用于中药的提取制备中,取得了一定的效果。
酶法提取淫羊藿多糖工艺条件的研究
Ｋｅ ｒ ：ｃ ｌｕ ｏ ｅ； ｐ ｍｅ ｉ ； ｌ ｓ ｃ ｈ ｒｄ ｅ ｔａ ｔｏ ｙ ｗｏ ｄｓ ｅｌ ｌ ｓ ｅ ｉ ｄ ｕｍ ｐｏｙ ａ ｃ ａ ｉ ｅ； ｘ ｒ ｃ ｉ ｎ
本 文选 用纤 维素 酶 法提 取 淫 羊藿 多 糖 ， 以酶加
量 的纤 维 素酶 于 ５ ０℃条 件下 反应 一定 时 间 ， 然后 于
入量 、Ｈ 温度和提取时间为可变 因素 ， ｐ、 研究各因素 对多糖提取率 的影响 ， 并在此基础上通过正交试验
对 提 取 条 件进 行 优 化 ， 以期 为 淫 羊 藿多 糖 的进一 步
开发 利用 提供 理论 参 考 。
沸 水 浴 中灭 酶 １ ｎ 离 心 过 滤 ， 酚 一 酸 法 … ０ｍｉ， 苯 硫 测
公 司） ；水 浴 恒 温振 荡 器 （ 海 跃进 医疗 器 械 厂 ） 上 ；
３ 结果 与分析
３１ 多糖 含量 测定 的标 准 曲线 ．
根据苯 酚— 硫酸法测得 葡萄糖浓度 与 吸光值 的关 系， 绘制标准 曲线 回归方程为 Ａ 。４ ２ Ｃ ０１５ ， 伽 ：． ５ ＋． ０ ５ ８ ２
Ｒ ０．９９ ０。 ＝ ９
ＰＳ２ ｈ 一 ５型 ｐ Ｈ计 （ 上海精 科 雷磁 有 限公 司 ）Ｔ ；６新世 纪紫 外 一 可见 分 光 光度 计 （ 京 普 析通 用 仪 器 有 限 北
公司）
３２ 单 因 素 实 验 ．
３２１ ｐ －． Ｈ对 多糖提 取 率 的影 响
在 固 液 比 １３ 、 取 温度 ５ ： 提 ０ ０℃的条件 下 ， 别 分
调样 品液 ｐ 为 ３５ ４ ４５ ５ ５５和 ６ Ｈ ． 、 、 ．、 、． ，纤 维 素酶 添
２ 实验方法
一种基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法[发明专利]
![一种基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d2a5f62bb6360b4c2e3f5727a5e9856a561226d5.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010996521.2(22)申请日 2020.09.21(71)申请人 浙大宁波理工学院地址 315100 浙江省宁波市钱湖南路1号(72)发明人 吴志革 金志华 金庆超 杨郁 李龙飞 戚旺涛 徐宝萍 方瑶瑶 (74)专利代理机构 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224代理人 韩聪(51)Int.Cl.C12P 19/60(2006.01)C12P 19/14(2006.01)(54)发明名称一种基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法(57)摘要本发明公开了一种基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法，属于生物技术领域。
所述方法包括以下步骤：(1)构建表达氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示的纤维二糖水解酶的重组工程菌，诱导表达获得纤维二糖水解酶；(2)以纤维二糖水解酶为催化剂，以淫羊藿苷为底物进行转化反应，反应结束后将反应液分离纯化，制得淫羊藿次苷Ⅱ。
本发明提供的生物法制备淫羊藿次苷Ⅱ，具有成本低、操作步骤简单、反应条件温和等特点，转化率达到98％以上，为淫羊藿次苷Ⅱ的大规模工业生产奠定了基础。
权利要求书1页 说明书4页序列表3页 附图2页CN 112080538 A 2020.12.15C N 112080538A1.一种基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建表达氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的纤维二糖水解酶的重组工程菌，诱导表达获得纤维二糖水解酶；(2)以纤维二糖水解酶为催化剂，以淫羊藿苷为底物进行转化反应，反应结束后将反应液分离纯化，制得淫羊藿次苷Ⅱ。
2.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法，其特征在于，所述重组工程菌的宿主细胞为大肠杆菌细胞。
3.如权利要求2所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法，其特征在于，所述纤维二糖水解酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
生物酶法制备淫羊藿素工艺条件的研究
文章编号：2096-0387（2020）01-0062-04
Vol.6 No.1 Feb. 2020
生物酶法制备淫羊藿素工艺条件的研究
李慧灵，陈宏基，林育成，叶德晓，周金林 *
（广东金骏康生物技术有限公司，广东佛山 528000）
摘 要：利用 β- 葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷、得淫羊藿素，通过对温度，pH，缓冲液倍数，底物与酶比，酶解时间 5 个因素设
HT-110X30 水浴摇床，上海赫田科学仪器有限 公司，安捷伦 1100 液相色谱仪，安捷伦科技（中国） 有限公司。 １．２ 液相检测条件
色 谱 柱：C18 柱 ODS，250×4.6 mm；流 动 相： 乙 腈（流 动 相 A），0.5% 醋 酸 水 溶 液（为 流 动 相） B；流 速 1 mL/min，波 长 281 nm，柱 温 30 ℃，进 样 量 10μL；洗 脱 程 序 中 流 动 相 A 与 B 的 比 例 按 照 30 ∶ 70（0~10 min）、50 ∶ 50（10~20 min）、 85 ∶ 15（20~25 min）、30 ∶ 70（25~30 min）的 洗 脱条件设置。 １．３ 数据分析
·63·
此，通过单因素实验和正交实验优化此种酶的酶解工 艺，以提高淫羊藿素的转化率。
1 材料与方法
１．１ 药剂与仪器 98% 淫羊藿苷（西安天本生物工程有限公司），
β- 葡 萄 糖 苷 酶（本 公 司 自 产），淫 羊 藿 苷 标 准 品 （≥ 98%）、淫羊藿素标准品（≥ 98%）均购自 sigma 公司，一水柠檬酸（≥ 99.5%）、十二水合磷酸氢二钠 （≥ 99%）购自广东光华科技股份有限公司。
苷转化淫羊藿素常用的方法是酶酸结合法，即先用酸 解将淫羊藿苷元 3 位上的鼠李糖水解掉，再用纤维素 酶或 β- 葡聚糖将 7 位上的葡萄糖水解掉。此方法 用到了酸，对环境造成一定危害，且收率较低，只有 62.5%[4-5]。另外，也有采用酶水解的，如柚苷酶 [6]、纤 维素酶和葡萄糖苷酶水解等，其中柚苷酶的水解产物 是淫羊藿素，但反应时间长达 11 d；其他酶的水解产 物是淫羊藿次苷Ⅱ，酸水解的产物是淫羊藿次苷Ⅰ和 β 去水淫羊藿素。本研究从土壤中筛选出一株产 β葡萄糖苷酶，可以将淫羊藿苷转化为淫羊藿素。基于
采用柚苷酶从淫羊藿苷获得淫羊藿苷元的方法[发明专利]
![采用柚苷酶从淫羊藿苷获得淫羊藿苷元的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/5bf32223bb4cf7ec4bfed0ad.png)
专利名称：采用柚苷酶从淫羊藿苷获得淫羊藿苷元的方法专利类型：发明专利
发明人：许明淑,陆波,卢珊
申请号：CN201410274823.3
申请日：20140619
公开号：CN104561178A
公开日：
20150429
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种利用生物酶反应将淫羊藿苷转变为淫羊藿苷元以提高其生物活性的方法。
在柚苷酶的作用下，浓度为30％-70％的乙醇水溶液中进行反应。
所述反应温度为40-70℃，反应时间为1-30小时。
淫羊藿苷羟基上的糖基被切下来，转为具更高药理活性的淫羊藿苷元。
本发明还提高了淫羊藿苷的可加工性，同时可扩大其实际应用范围。
申请人：山东大学(威海)
地址：264209 山东省威海市高区文化西路180号山东大学(威海)海洋学院
国籍：CN
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酶水解淫羊藿提取物制备宝藿苷Ⅰ的研究
酶水解淫羊藿提取物制备宝藿苷Ⅰ的研究目录摘要........................................................................................................................... . (I)ABSTRACT........................................................................................................... ...........................III 前言.. (1)第一部分用淫羊藿提取物制备宝藿苷Ⅰ的酶水解工艺研究 (5)1引言 (5)2实验部分 (5)2.1仪器、材料与试药 (5)2.1.1仪器 (5)2.1.2材料 (6)2.1.3试药 (6)2.2淫羊藿苷与宝藿苷Ⅰ在HPLC中摩尔吸收校正因子的测定 (7)2.2.1对照品溶液的制备 (7)2.2.2校正因子的测定 (7)2.2.3淫羊藿苷转化率的测定 (7)2.3预实验 (7)2.3.1静态与动态酶水解反应的比较试验 (7)2.3.2采用不同厂家纤维素酶进行酶水解反应的比较试验 (8)2.4纤维素酶水解淫羊藿提取物（淫羊藿苷含量≥90%）的工艺研究 (9)2.4.1单因素试验 (9)2.4.1.1酶用量的考察 (9)2.4.1.2缓冲液pH的考察 (10)2.4.1.3底物质量浓度的考察 (10)2.4.1.4反应时间的考察 (11)2.4.1.5反应温度的考察 (12)2.4.1.6结论 (12)2.4.2Plackett-Burman试验设计（P-B试验设计） (12)2.4.2.1因素及水平范围 (12)2.4.2.2P-B实验设计与结果 (13)2.4.2.3结论 (13)2.4.3CCD响应面法优化工艺 (13)2.4.3.1CCD因素、水平及结果 (13)2.4.3.2回归分析 (15)2.4.3.4纤维素酶水解淫羊藿提取物工艺实验验证 (16)2.5纤维素酶水解淫羊藿提取物（淫羊藿苷含量≥30%）的工艺研究 (17)2.5.1单因素试验 (17)2.5.1.1酶用量的考察 (17)2.5.1.2底物质量浓度的考察 (18)2.5.1.3反应时间的考察 (18)2.5.1.4结论 (19)2.5.2CCD响应面法优化工艺 (19)2.5.2.1CCD因素、水平及结果 (19)2.5.2.2回归分析 (20)2.5.2.4纤维素酶水解淫羊藿提取物工艺实验验证 (22)2.6不同浓度的淫羊藿提取物对工艺适应性的验证研究 (23)2.6.1采用淫羊藿提取物（淫羊藿苷含量≥98%）验证工艺研究(23)2.6.1.1淫羊藿提取物（淫羊藿苷含量≥98%）的酶水解反应 (23)2.6.1.2淫羊藿提取物（淫羊藿苷含量≥98%）转化率的测定 (23)2.6.2采用淫羊藿提取物（淫羊藿苷含量≥20%）验证工艺研究(24)2.6.2.1淫羊藿提取物（淫羊藿苷含量≥20%）的酶水解反应 (24)2.6.2.2淫羊藿提取物（淫羊藿苷含量≥20%）转化率的测定 (24)第二部分从酶水解液中分离、纯化宝藿苷Ⅰ (25)1引言 (25)2实验部分 (25)2.1仪器、材料与试药 (25)2.1.1仪器 (26)2.1.2材料 (26)2.1.3试药 (26)2.2宝藿苷Ⅰ含量测定方法的建立 (27)2.2.1宝藿苷Ⅰ含量测定方法的确定 (27)2.2.1.1色谱条件 (27)2.2.1.2对照品的制备 (27)2.2.1.3供试品溶液的制备 (28)2.2.1.4检测波长的选择 (28)2.2.2耐用性考察 (28)2.2.2.1流速考察 (28)2.2.2.2流动相比例考察 (29)2.2.2.3流动相pH值的考察 (30)2.2.2.4柱温考察 (31)2.2.2.5色谱柱考察 (32)2.2.2.6检测波长的考察 (33)2.2.2.7结论 (34)2.2.3方法学考察 (34)2.2.3.1色谱条件与专属性试验 (34)2.2.3.2线性范围考察 (35)2.2.3.3精密度试验 (36)2.2.3.5重复性试验 (36)2.2.3.6加样回收试验 (37)2.3从酶水解反应产物中分离宝藿苷Ⅰ的研究 (37) 2.3.1水洗酶水解产物过程中水温的考察 (37) 2.3.2水洗酶水解产物过程中水用量的考察 (39) 2.3.3结论 (39)2.4宝藿苷Ⅰ纯化方法的研究 (40)2.4.1重结晶法 (40)2.4.1.1单一溶剂的选择 (40)2.4.1.2用单一溶剂对宝藿苷Ⅰ进行重结晶 (41)2.4.1.4乙醇回流对宝藿苷Ⅰ重结晶的影响 (42)2.4.1.5结论 (42)2.4.2大孔树脂吸附法 (42)2.4.2.1树脂的预处理 (42)2.4.2.2宝藿苷Ⅰ的纯化 (43)2.4.3萃取法 (43)2.4.4聚酰胺树脂吸附法 (43)2.4.4.1拌样 (43)2.4.4.2上样与检测 (44)2.4.5小结与讨论 (44)2.5最终样品含量测定 (45)2.6小结 (45)结论与展望 (46)结论 (46)展望 (47)参考文献 (48)第三部分综述生物酶水解技术在淫羊藿中的应用现状和展望 (51)参考文献 (58)附图一：HPLC图 (61)附图二：薄层色谱图 (66)致谢 (70)在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果 (71)声明及授权书 (72)摘要宝藿苷Ⅰ（BaohuosideⅠ）为小檗科淫羊藿属植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.中的一种多羟基黄酮类单体化合物，也是淫羊藿药材中的一种有效成分，国内外文献报道其抗肺癌细胞活性和生物药剂学性质明显优于淫羊藿中其他黄酮苷类化合物。
淫羊藿苷转化产物的制备及活性研究
淫羊藿苷转化产物的制备及活性研究南敏伦;于淼;赵昱玮;司学玲;吕娜;赫玉芳【摘要】目的：旨在分析淫羊藿苷及转化产物抑制α-葡萄糖苷酶活性研究。
方法对淫羊藿苷进行酶水解、酸水解、酶水解与酸水解相结合的方式进行结构转化，采用薄层色谱法、理化方法、核磁共振波谱法对转化产物进行结构鉴定，分别得到淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ、水合淫羊藿素、环淫羊藿素及脱水淫羊藿素。
采用pNPG法建立α-葡萄糖苷酶筛选模型，对淫羊藿苷及其产物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选。
结果体外活性试验果表明，脱水淫羊藿素、淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ体外活性较淫羊藿苷好，其中脱水淫羊藿素（IC50=0.102 mg/mL）的活性最好，与拜糖平（IC50=0.850 mg/mL）相比抑制活性更强。
结论淫羊藿苷转化产物可作为继续进行结构修饰的先导化合物，具有深入研究和开发的前景。
【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2017(015)001【总页数】2页(P19-20)【关键词】淫羊藿苷;转化产物;α-葡萄糖苷酶;活性【作者】南敏伦;于淼;赵昱玮;司学玲;吕娜;赫玉芳【作者单位】吉林省中医药科学院，吉林长春130012;长春三德天晟科技有限公司，吉林长春130012;吉林省中医药科学院，吉林长春130012;修正药业长春高新制药有限公司，吉林长春130012;吉林农业大学，吉林长春130118;吉林省中医药科学院，吉林长春130012【正文语种】中文【中图分类】R282.710.3α-葡萄糖苷酶主要分布于小肠的上皮绒毛膜刷状上，对糖的分解及代谢具有十分重要作用。
当α-葡萄糖苷酶的活性受到抑制后，食物中多糖、双糖向单糖的转化速率就降低，从而有效的延缓糖的吸收，改善糖耐量，有效的控制并降低血糖的作用，同时可以提高糖耐量，具有预防和治疗糖尿病及并发症的特点[1]。
淫羊藿（Epimedii Folium）为小檗科淫羊藿属植物，又名三枝九叶草、仙灵脾等。
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合黄酮 ， 经 Ａｓ ｐ ． ｙ ３ ９茵酶转化 ， 又得 到 １ ６ ． 的淫羊藿苷 ４ ７ ． １ ｇ ； 淫羊藿苷 的提取率 由
传统 的 ２ ０ ． ３ ％提 高到 ３ １ ． ４ ％； 相 比于传统方 法， 淫羊 藿苷的提取 率提 高 了 ５ ０ ％ 以上。本文 为节约 淫羊藿 资源提供 了
定 Ａ、 Ｂ 、 ｃ等黄酮转化成淫羊藿苷的 Ａ ． ｓ ｐ ． ｙ ３ ９茵酶 ， 将其应用于 以淫羊藿提取 物为原料制备 淫羊藿苷的工 艺。将 １ ５ ０ ｇ 西安岳达 淫羊藿提取物 ， 溶解于 ６ ０ ％ 乙醇、 经Ｄ 一 ２ ８ ０脱 色柱脱 色、 结晶得到 ３ ０ ． ５ ｇ淫羊藿苷 ； 其废 渣朝 藿定 Ａ、 Ｂ 、 ｃ混
生 物 三 程
Ｖ ｏ １ ． ３８ ， ＡＣ ｏ ． ０８ ， ２０１７
酶 转 化 在 淫 羊 藿 苷提 取 中 的应 用
富盈昕 ， 刘春 莹 ， 郭美 娟 ， 赵 耀， 金凤燮， 鱼 红 闪
（ 大连 工业 大 学生物 工程 学 院 ， 辽 宁 大连 １ １ ６ ０ ３ ４ ）
摘 要： 目前生产淫羊藿苷的过 程 中， 其副产物朝藿定 Ａ、 Ｂ 、 Ｃ等 黄酮未被利 用好。 筛选 出了将 淫羊藿苷废 渣 中朝 藿
１ ５ ０ ｇ ｏ ｆ ｅ ｐ ｉ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｂ ｙ ａ ｂ ｏ ｖ ｅ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ． ｔ ｈ ｅ ｙ ｉ ｅ ｌ ｄ ｏ ｆ ｉ ｃ ａ ｒ ｉ ｉ ｎ ｗ ａ ｓ ｒ ｉ ｓ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ２ ０ － ３ ％ ｔ ｏ ３ １ ． ４ ％． Ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ， ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ ｉ ｃ ａ ｒ ｉ ｉ ｎ ｗ ａ ｓ ｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｄ ｂ ｙ ｍｏ ｒ ｅ ｔ ｈ ａ ｎ ５ ０ ％ ， ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｄ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ｂ ａ ｓ ｉ ｓ
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依据 。
关键词 ： 淫羊藿提 取物， 淫羊藿黄酮苷 酶， 淫羊藿苷 ， 朝藿定 Ａ、 Ｂ 、 ｃ
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