蜂毒素对人肝癌细胞生长的抑制作用及其机制探讨
蜂毒素对人肝癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其部分机制
肝细胞癌恶性度高 ， 术后易复发 ， 是全球发病率
较 高 的恶性 肿瘤 之一 。在 我 国 癌症 病 死 率 中 ， 细 肝 胞癌 占第 二 位 ， 在全 球 占第 三 位 … 。蜂 毒 素是 蜂 毒 的 主要 活性 成 分 ， 有 多种 生 物 学 活性 。文 献 － Ｊ 具 ２
报道 ， 蜂毒素具有抗病毒 、 菌、 抗 抗肿瘤等生物学效 应 。体外 研究 表 明蜂 毒素 对 多种肿 瘤 细 胞具 有
凋亡试剂盒 由罗氏公司提供。
１ ３ 方 法 ．
蜂毒 肽 ； 肝肿瘤 ， 实验性
Ｈ ｐ － ｅＧ ２
１３ １ 人 肝癌 裸 鼠皮 下 移植 瘤 的建 立 “ 取 对 数 ．． 。
中图分类 号 Ｒ ７ ５ ７ Ｒ ９５ １ ３ ． ； ６ ．
文 献 标 识 码 Ａ 文 章 编 号 １０ ０ ０—１９ （ ０ １ ０ ０ ０ —０ ４ ２ ２ １ ） ９— ９ ５ ５
安徽 医科 大学学报 Ａ ｔ ｎｖｒｔｔ ｄｃ ａｉＡ ｈ ｉ ０ １Ｓ ｐ４ （ ） ｃ Ｕ ｉ ｓａｉＭｅｉｎ ｌ ｎ ｕ ａ ｅｉ ｓ ｉ ｓ ２ １ ｅ ；６ ９
・０ ・ ９５
蜂 毒素对人肝癌细 胞裸 鼠移植 瘤生长的影响及其部 分机制
王朋 景 ， 李
摘要 目的
俊， 黄
结果
蜂 毒 素 （ 、 、 ｋ ） 的抑 瘤率 分 别 为 ４ ． ％ 、 １２４ｍ ｇ 组 １２
６ ． ％ 、１０ ， ０ ９ ７ ． ％ 蜂毒素各剂量组肿瘤体 积显著小 于模型组 ， 而血清 Ｉ－ Ｔ Ｆ 水平显著 高于模型组 ， Ｌ１和 Ｎ ． 与模 型组 比较 ， 蜂毒 素 （ 、 ｇ ｋ ） 肿瘤 组织 细胞 的凋亡 指数 显著升 高 ２４ｍ ／ｇ 组 （ ００ ， ００ ） Ｐ＜ ． ５ Ｐ＜ ， １ 。结论 蜂 毒素 能 明显 抑 制人 肝癌 细 胞 Ｈｐ一 ｅＧ ２细胞 裸 鼠移植 瘤 的生长 ， 作用机 制可能与增 强 其
《现代肿瘤医学》16卷(2008)总目录
ｓ ｔ ｉ 基 因的 Ｒ Ａ干涉抑制人 白血病 Ｋ ６ ｔｈ ｎ ａｍ Ｎ ５２细胞 体外增殖 的作用 ………………… 吴 冰 Ｉ Ｊ 抗原在卵巢上皮性肿瘤中的表达及 意义 ………………………………… ………… 刁 斌 ｅ
白 海 王存邦 等 （２ ） ３ ９ 黄金双 林 蓓
Ｒｏ ｈ Ａ小干扰 Ｒ Ａ对 胃癌 Ａ Ｓ细胞基因表达谱的影响 ………………… ……………… 张 思源 张祥海 Ｎ Ｇ
光 动力作用对人乳腺癌细胞 Ｂｘ Ｂｌ ２ 白表达的实验研 究 ……………………… 叶青青 ａ 和 ｃ一 蛋
田基黄对人鼻咽癌细胞株 Ｃ Ｅ一 Ｎ ２细胞生长抑制 的体外实验 ………………………… 肖大江 蜂毒素对人脐静脉内皮细胞 Ｅ Ｖ ０ Ｃ ３４生长 的影响及其机制探讨 ……………………… 宋长城 内皮抑素抑制卵巢癌细胞生长的初 步研究 ………… …… ……………………………… 刘梅梅 微环境乏氧对胰腺癌 Ｐ ２细胞生长及 形态的影 响 …………………………………… 高 Ｃ一
Ｓｒｉ ｎ反义 Ｒ Ａ Ｈ Ｐ ０双基 因转 染对 Ｈ ｐ ２细胞 的影 响 …………… …………… 新 ｕｖ ｉ ｖ Ｎ ／ ＳＴ ｅＧ 燕
鑫 周 薇 涛 杨 辉 周 小娟 刘
Ｒ Ａ 介导 的 ｓｒ ｖ Ｎｉ ｕｖ ｉ ｉ ｎ基因沉默对 Ｐ ３细胞裸 鼠体 内成 瘤能力 的影 响 …………… 沈建军 刘家云 缪应业 Ｃ一 Ｂ一榄香烯联合三苯氧胺抑制乳腺癌 ＭＣ Ｆ一７细胞生长的实验研究 ……………………… 马海琳 反义脱氧寡核苷酸抑制人 卵巢 癌 Ｈ Ｏ一８ １ ９０细胞株 中 ＩＫ基 因的表达 ……………… 李 Ｌ 化坚拔毒膜对内脏疼 痛模 型大 鼠的镇痛作用及其机理探讨 …………………………… 贾英杰 张 奇 裴俊瑞 李佩玲
蜂毒素对人肝癌细胞中HMGB1及VEGF-C表达的影响
Ｅｆｅ ｔｏ ｌ ｔｎ ｏ ｉ ｈ ｏ ｉｉｙ ｇ ｏ ｘ Ｉａ ａ ｃ ｌ ｒ ｅ ｄｏ ｈｅｉ ｌｇｒ ｗｔ ａ ｔ ｒ ｆ ｃ ｆ ｍｅｉ ｉ ｎ ｈ ｇ ｍ ｂ ｌｔ ｒ ｕｐ ｂｏ ｎｄ ｖ ｓ ｕ ａ ｎ ｔ ｌ ｏ ｈ ｆ ｃ ｏ ｓＣ ｔ ａ
ＨＭ Ｂ Ｇ １的表达 ， 且呈浓度依赖性 ， 但对 Ｖ Ｇ — Ｅ ＦＣ的蛋 白表达无 明显影 响 ；Ｒ —Ｃ ｑ ＴＰ Ｒ结 果显 示 ， 毒素 在 蜂
ｍ Ｎ Ｒ Ａ水 平均具有抑制 Ｈ Ｇ １Ｖ Ｇ — 表达 的作用 。结论 蜂 毒素可降低肝癌细胞 的增 殖活性 ， Ｍ Ｂ 、Ｅ ＦＣ 并可
ｐ ｏｉ ｒ ｔ ｎ ｉ ｉ ｏ Ｗ ｅ ｔｒ — ｌｔ ｎ ｕ ｃ ｍｅｓ ｏ ｅ ｈ ｔ ｌ ｔ ｏ ｌ ｏ —ｅ ｕ ａｅ ｔ ｅｐ ｏｅｎ ｏ ｒ ｌ ｅ ａｉ ｖｔ ． ｓｅ ｎ ｂｏ ｔ ｇ ｏ ｔｏ ｈ ｗ ｄ ｔ ａ ｉ ｉ ｃ ｕ ｄ ｄ ｗｎ ｒ ｇ ｌ ｔ ｈ ｒｔ ｉ ｆＨＭＧＢ ｆ ｏ ｎ ｒ ｉ ｍｅ ｔ ｎ １，
能通过 Ｈ Ｂ 、 Ｅ ＦＣ的表达发挥抗肝癌作用 。 ＭＧ １ Ｖ Ｇ — ［ 关键词 ］ 蜂毒素 ； 肝细胞癌 ； 高迁移率族蛋 白 Ｂ ； １血管 内皮生 长因子 Ｃ
［ 中图分类号 ］ Ｒ ３ ． ７５ ７
［ 文献标志码 ］ Ａ
［ 文章编号 ］ １７ —７ Ｘ（０ ２ ０ －１ １ ４ ６ ２２ １ ２ １ ）２０ ０ － ０
［ ｂ ｔａｔ ０ｂｅｔ ｅ ｏｏｓｒｅｔｅ ｆ ｃ ｏ ｅｉｉ ｏ ｅｅｐｅｓ ｎ ｆ ｉ ｏ ｉｔ ｇｏｐｂｘ１ Ａ ｓｒｃ］ ｊｃ ｖ Ｔ ｂｅ ｆ ｔ ｆ ｌｔ ｎｔ ｘｒｓｉ ｓ ｇ ｍ ｂｌｙ ｒｕ ｏ ｉ ｖ ｈ ｅ ｅ ｍ ｔｎ ｈ ｏ ｏｈ ｈ ｉ
蜂毒肽抗肿瘤机制及临床应用进展
蜂毒肽抗肿瘤机制及临床应用进展作者：李迎涛，姜宝华，闫路娜，邱丹，王莉来源：《教育教学论坛》2014年第29期摘要：蜂毒肽（Melittin，MLT）是蜂毒的主要成分，在蜂毒中含量最高，大约为蜂毒干重的50%，是蜂毒生物活性的主要载体。
蜂毒肽作为一种重要的抗菌肽具有抗菌消炎、镇痛、抗辐射、抑制血小板凝集、抗艾滋病病毒等多种药理学作用。
目前，蜂毒肽已成为抗肿瘤新药中的研究热点。
本文综述了最新的蜂毒肽抗肿瘤机制及其应用，若将各种蜂毒制剂联合化疗，具有减毒增效的作用，在临床上具有很好的疗效，其潜在的药用价值日益引起人们的重视。
关键词：肿瘤；蜂毒肽；凋亡；调控机制中图分类号：R979.1 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2014）29-0140-03蜂毒是一种成分复杂的混合物，主要含蛋白质、肽类、生物胺和其他小分子有机物。
蛋白质类主要有透明质酸酶（hyaluronidase）和磷脂酶A2（phospholipase，PLA2）；肽类主要有蜂毒溶血肽（又称蜂毒肽，melittin）、蜂毒明肽（apamin）和肥大细胞脱粒肽（mast cell degranulating peptide，MCD肽）；生物胺主要有组胺、多巴胺、去甲肾上腺素和氨基丁酸；小分子有机物主要有糖类、磷脂类、氨基酸类、胆碱、甘油和挥发性化合物（一种信息素）。
蜂毒溶血肽（Melittin，MLT）占蜂毒的40%以上，是蜂毒发挥药理作用和生物活性的主要成分。
其作为一种重要的抗菌肽具有抗菌消炎、镇痛、抗辐射、抑制血小板凝集、抗艾滋病病毒等多种药理学作用。
国外类似的制剂有英国BVV药厂的Melittin，苏联的Aplite。
这些制剂已除去了蜂毒中引起过敏的高分子量组份——透明质酸酶及磷醋酶A2。
蜂毒肽具有很强的表面活性，直接破坏细菌的细胞膜，造成细胞的裂解致死。
所以理论上讲蜂毒肽具有广谱性和速效性杀菌的优良特性。
与抗生素相比，蜂毒抗菌肽具有抗菌谱广、低浓度下也可发挥作用、不易使微生物产生耐药性以及可以合成不同于天然肽的类似物等优势。
蜂毒素抗肿瘤作用机制文献综述
参考文献
[1]李玉梅,陈永强,顾伟.蜂毒及其主要成分蜂毒素抗肿瘤机制研究进展[J].中国中医药信息杂志,2008,15（1）：96-97.
[2]刘岭,凌昌全,黄雪强.蜂毒素的纯化方法及体外抗肿瘤作用研究[J].中国生化药物杂志,2003,24（4）：163-166.
[3]凌昌全,黄雪强,刘岭.蜂毒素体外抑瘤作用的实验研究[J].第二军医大学学报,2001,22（7）：612-614.
微血管密度（microvessel density，MVD）是目前公认的衡量肿瘤血管生成的定量指标，研究发现多种肿瘤的预后都与其相关。秦刚等实验发现与阴性对照组比较，蜂毒素各浓度组瘤体内MVD、SDF-1（基质细胞源性因子1，stromal cell-derived factor 1）及CXCR4（基质衍生因子受体4，chemokine receptor 4）均减少（P＜0.05），认为蜂毒素能减少荷骨肉瘤裸鼠瘤体微血管生成，抑制骨肉瘤的生长，其作用机制可能与蜂毒素能降低SDF-1及CXCR4蛋白表达有关[11]。
Bcl-2家族蛋白中的Bax与线粒体途径关系密切，通常Bax与Bcl-2形成异源二聚体，此时细胞不易凋亡，而当Bax增多时，则以Bax本身形成的同源二聚体为主，在凋亡信号刺激下，Bax会从细胞质转移到线粒体膜上形成同源二聚体，通过线粒体通透性改变、破坏氧化磷酸化和ATP的合成功能，使线粒体释放AIF、Smac和细胞色素C，进一步激活Caspase-3诱导细胞发生凋亡[22]；研究表明，野生型p53有放大线粒体凋亡途径的作用，是典型的抑癌基因。王怡苹等通过流式细胞仪分析、DNA凝胶电泳、透射电镜下形态学观察等方法检测发现，蜂毒素具有诱导SGC-7901细胞发生凋亡的作用，进一步研究发现，蜂毒素作用SGC-7901细胞48h后Bcl-2蛋白和Bcl-2mRNA的表达明显降低，Bax蛋白、Bax mRNA和p53的表达明显增高，并随蜂毒素浓度增加而加强，推断蜂毒素诱导人胃SGC-7901细胞凋亡的作用机制可能与调控Bcl-2、Bax、p53基因表达有关[23]。候毅等观察发现蜂毒素处理人膀胱癌T24细胞后，细胞出现典型的凋亡形态学改变，凋亡率随剂量升高以及Bax的表达升高而Bcl-2表达下降[24]。
中药抗肝癌作用机制的研究进展
９１０ ｐｍｏｌ／Ｌ苦参碱和２２７ Ｉｍａｏｌ／Ｌ盐酸川芎嗪），结
传统中药参与肝癌的综合治疗对改善患者症状
性肿瘤细胞，而是诱导其分化为正常或接近正常的
细胞。郭霞等口１以人肝癌ＢＥＬ．７４０２细胞为研究对
象，探讨黄芩苷对细胞分化的影响，结果显示，经 黄芩苷作用后该细胞趋于成熟分化。与对照组相比，
涉及凋亡基因的大量表达，核转录因子（ＮＦ）一心表
达下调，端粒酶活性抑制及Ｃａｓｐａｓｅ途径的激活。 １．４抑制肿瘤血管生成 肿瘤新生血管生成与肿瘤的生长及其转移密切 相关。肝癌是典型的富血管性恶性肿瘤，阻断肿瘤 血供有望成为肝癌治疗的突破１：３［１４】。樊讯等ｎ列观 察麝黄消瘤方对肝癌Ｈ２：模型小鼠肝癌细胞侵袭和
黄芩苷组的丫＿谷氨酰转移酶（）＇－ＧＴ）比活力、胎盘
型碱性磷酸酶（ＰＡＬＰ）活性及甲胎蛋白（ＡＦＰ）分泌 量明显较低，碱性磷酸酶（ＡＬＰ）比活力、白蛋白分 泌及细胞内环磷腺苷（ｃＡＭＰ）含量明显较高。同时， 研究还显示，随着黄芩苷浓度的增加和作用时间的 延长，ＢＥＬ．７４０２细胞Ｇ。／Ｇ。期比例逐步增高，Ｓ期 细胞减少。这些生化指标的变化均提示黄芩苷能诱 导肝癌细胞分化，且与细胞周期调节密切相关。王
肝癌细胞的凋亡，且效果明显，如吡霜（三氧化二
砷，Ａｓ２０，）能够显著抑制人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２的 增生，并诱导其凋亡。Ａｓ：Ｏ，诱导的肝癌细胞凋亡
通过Ｃａｓｐａｓｅ一３途径实现，伴随着Ｃａｓｐａｓｅ．３和聚腺
间和剂量依赖性。郭昱等Ｈ１应用ＭＴＴ比色法观察
蜂毒及其抗肿瘤功效
体量不断增加，到一定程度时，抗原和抗体相结
合就产生过敏反应。
3.2 蜂针点瘙痒的表现
• 一般在初期蜂针后的几天就可出现，所有蜂针点
均可出现，程度因人而异，3～4次蜂针后局部可
有瘙痒的感觉，夜晚及温暖时严重，越抓越痒、 越肿。一般半个月后瘙痒程度可减轻。
• 4. 淋巴结肿大 • 4. 1 原理 • 蜂毒可刺激淋巴细胞增生，引起淋巴结肿 大；
• 透明质酸酶含量约占干蜂毒的2%～3%，可 以溶解组织间隙和突出椎间盘内的透明质 酸，不仅可以促使蜂毒的体内扩散。
3. 生物胺类
• 多巴胺、组织胺、五羟色胺等。
4. 酸类
• 磷酸、蚁酸、氨基酸、脂肪酸等。
5. 其他
• 挥发油、甘油、胆碱、多种矿物质等，其 治疗风寒湿痹的主要成分之一。
中挥发油是引起烧灼痛感，也是温经通络、
• 细胞脱落与聚合、黏附与去黏附贯穿 在肿瘤细胞转移过程的始终。 • 蜂毒素基因转染可以改变肿瘤细胞的 生物学行为，降低其恶性程度和转移。
• 抑制肿瘤血管生成。
• 蜂针疗法与西药联合应用， • 止痛起效时间、缓解程度、持续时间 都比单用西药止痛效果要好， • 并能够减轻西药的毒副作用。
蜂针治疗可隔日1次，
• 蜂毒进入淋巴系统，蜂毒量多时淋巴系统 不能及时输送和解毒，引起淋巴结肿大。
4. 2 表现
• 常见于下颌部、颈部、腋窝、腹股沟、腘
窝等部位，呈圆形或椭圆形，边界清楚，
与皮肤无粘连，有压痛。
• 二、全身反应
• 1. 发热、恶寒
• 发热、恶寒也与过敏反应有关，是蜂针最为常见 的反应，发生频率约为95%，第2～7次蜂针是发 热、恶寒的高发期，下午或夜间多发，持续 0.5～2天，一般不超过38.5度，多数可自行消退。
蜂毒素对胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖抑制作用及机制
Ｄ Ａ条带 ； Ｎ 流式细胞仪法检测细胞 凋亡 和细胞周期 ； 免疫 组
化观察 Ｂ ｌ ｃ－ 因和 Ｂ ｘ 因表达情况 ； ＴＰ Ｒ检测 Ｂ ｌ 、 ２基 ａ基 Ｒ —Ｃ ｃ一 ２ Ｂ ｘ ｐ３ｍ Ｎ ａ 、５ Ｒ Ａ的表达。结果 蜂毒素 对 胃癌 Ｓ Ｃ７ ０ Ｇ 一 １细 ９
１ １１ 细胞 及 细胞培 养 ． ．
人 胃癌 细胞 株 Ｓ Ｃ７ ０ Ｇ ．９ １
购 自中科 院上 海 生 命 科 学 研 究 院 细 胞 资 源 中 心 。
胞 的生长抑制作用随着其作 用时 间的延长 和浓度 的增加 而 明显增强 ， 作用 ４ ， Ｉ 为 ２ ４ ｇ ｍ ； ８ｈ后 其 ｃ。 ．３ ／ ｌ透射 电镜 观察
ｔ １和药 物处 理组 （ ｒ） ｏ 加蜂 毒素 ） 。 １１２ 主要试 剂 与材 料 ．． 蜂 毒 素 由安 徽 省 百 春制
药 厂提供 （ 号 ：０ ６ ２ ６ ， Ｄ Ｏ溶 解 并 配 制 批 ２ ０ １ １ ） 用 ＭＳ
成 ２０ ｇｍ 的贮存 溶 液 ， ２ ￣避 光保存 ； 验前 ０ ／ ｌ 一 ０Ｃ 实
王怡苹 ， 吕雄 文 ， 赵
摘要 目的
斌， 黄
艳， 吴宝 明 ， 王朋 景 ， 李
俊
研究蜂毒素影 响人 胃癌细胞 Ｓ Ｃ７０ Ｇ －９ １增殖及 使用不 同浓度 （ … 、６ ３ ｇ ｍ ） １２４ ８ １ 、２ ／ １
胞 Ｓ Ｃ７０ Ｇ －９ １增 殖 及 凋 亡 的作 用 及 机 制 ， 旨在 为 蜂 毒 素应用 于 胃癌 的临床 治疗 提供新 的理 论依 据 。
安 徽 医科 大 学 学报
Ａ ｔ Ｕ ｉ ｒｔｔ ｄｃ ａｉＡ ｈ ｉ ２ １ ｕ ；５ ４ ｃ ｎ ｅ ｉ ｉＭｅｉｎ ｌ ｎ ｕ ０ ０Ａ ｇ４ （ ） ａ ｖ ｓａ ｓ ｉ ｓ
2021-2022年高三上学期周周清(16)生物试题 含答案
2021-2022年高三上学期周周清（16）生物试题含答案一、选择题(本题共小题，每小题分，共分)1.关于细胞的叙述，正确的是( )A.所有的细胞均含有溶酶体B.大肠杆菌的转录和翻译可同时进行C.胆固醇是构成植物细胞膜的重要成分D.原核细胞不含叶绿体，不能进行光合作用2.下列有关物质运输的叙述，正确的是( )A.小分子物质不可能通过胞吐的方式运输到细胞外B.细胞中蛋白质的运输必须经过内质网C.RNA聚合酶和DNA聚合酶都可经核孔运输D.葡萄糖只能从高浓度一侧向低浓度一侧运输3.下列关于细胞代谢的描述，正确的是( )A.破伤风杆菌有氧呼吸的产物是二氧化碳和水B.原核生物主要在拟核区转录形成信使RNAC.细胞凋亡和细胞坏死是基因选择性表达的结果D.细胞体积越大物质运输速率越高，代谢速率越快4.如图为细胞膜结构图，其中a和b分别代表不同分子或离子进出细胞的方式。
据图分析下列叙述正确的是( )A.不同膜结构③的排列方式不同B.神经细胞受到刺激产生兴奋是Na离子通过②进入细胞，此过程不消耗ATPC.b可表示组织细胞从组织液中吸收氧气D.将③分子制成微球体用来包裹大分子药物，送入到相应的细胞中，该过程体现了细胞膜的功能特点5.下列有关酶的叙述，正确的是( )A.所有酶水解的产物都是氨基酸B.酶为生化反应提供了活化能C.不同的细胞可能含有同一种酶D.酶只能在细胞内起催化作用6.下列有关酶和ATP的叙述不正确的是( )A.酶和ATP的化学成分中都含有氮元素B.分化程度不同的活细胞中酶和ATP的含量都不同C.细胞中基因的表达过程都需要酶和ATP的参与D.酶的合成和分解分别与ATP的合成和分解相联系7.下列有关绿叶中色素的提取和分离实验的叙述中，正确的是( )A.叶绿素的提取需要加入层析液作为提取液B.过滤时应使用单层尼龙布，并用棉塞塞住试管口C.分离色素时应将滤液细线置于层析液中D.选材不同，四条色素带在滤纸条上的排列顺序不同8.下列与癌变相关的叙述不正确的是( )A.癌症的发生并不是单一基因突变的结果B.免疫系统能监控并清除人体内的癌变细胞C.原癌基因或抑癌基因突变可导致癌症，因此癌症可遗传D.癌变前后，细胞形态和结构有明显差别9.科学家利用“同位素标记法”弄清了许多化学反应的详细过程。
蜂毒素诱导人Bel
蜂毒素诱导人Bel【摘要】目的观察蜂毒素处理人bel-7402细胞株后对其恶性表达行为的影响。
方法浓度为2μg/ml和4μg/ml两个实验组，以全反式维甲酸作为阳性对照，从细胞增殖的抑制、cona凝集及克隆形成能力、甲胎蛋白含量、c-myc基因表达等方面进行观察。
结果 2μg/ml和4μg/ml蜂毒素均能抑制bel-7402细胞株的增殖；蜂毒素处理后的细胞凝集及克隆集落形成能力降低；甲胎蛋白含量下降； c-myc基因表达显著降低。
结论低剂量蜂毒素能有效诱导人bel-7402细胞株恶性细胞生物学行为的转化。
【关键词】蜂毒素；人bel-7402细胞株；恶性表型；逆转；诱导【中图分类号】r2-031 【文献标识码】a 【文章编号】1004-4949（2013）06-39-03恶性肿瘤是危害人类健康的严重疾病之一，普遍观点认为，肿瘤细胞是从正常细胞转化成的不受控制地无限增殖的细胞[1]。
正常细胞的分化是有序、有限和有选择的基因表达，而肿瘤细胞出现分化缺失、阻断和异常，可以说，肿瘤就是一种细胞增殖和分化异常的疾病[2]。
通过物理、化学或分子生物学的方法，“诱导分化”和/或”诱导逆转”逐渐成为肿瘤研究领域的热点。
蜂毒素（melittin）是蜜蜂毒的主要成分，为26个氨基酸组成的碱性多肽，生物活性高，对多种肿瘤细胞有杀伤作用[3-4]。
本研究拟观察低剂量蜂毒素处理人肝癌细胞后对细胞恶性表型的影响，初步探讨其抑制肿瘤细胞作用可能的发生环节。
1 材料1.1 试剂与药品：蜂毒素为本科实验室采用凝胶色谱法纯化制备（纯度97%）；全反式维甲酸（atra）、四甲基偶氮唑蓝（mtt）为美国sigma公司产品； rpmi-1640培养基为美国gibco公司产品；刀豆蛋白（cona）为上海华舜生物公司提供；甲胎蛋白单克隆抗体酶免检测试剂盒为瑞典canag公司产品；c-myc基因一抗为santa cruz公司产品。
1.2 细胞株：人肝癌bel-7402细胞株引自中国科学院上海细胞研究所，由长海医院中医科保存，常规接种于含100ml/l小牛血清的rpmi-1640完全培养基中，在37℃，50 ml/l co2饱和湿度条件下培养，取生长期细胞进行实验。
蜂毒肽抗肿瘤作用机制研究进展
文章编号:１６７３￣２９９５(２０１８)０６￣０４６２￣０３综㊀述蜂毒肽抗肿瘤作用机制研究进展王智传ꎬ陈㊀琪ꎬ刘㊀欣ꎬ谢相红ꎬ姜小凡ꎬ朱文赫∗㊀(吉林医药学院ꎬ吉林吉林㊀１３２０１３)摘㊀要:蜂毒肽是蜂毒的主要功能物质ꎬ是一种水溶性阳离子两亲性多肽ꎬ具有很高的生物活性ꎮ蜂毒肽具有多种药理作用ꎬ比如抗炎㊁镇痛㊁抗菌㊁抗病毒㊁抗肿瘤等ꎬ具有很大的潜在药用价值ꎮ近年来ꎬ蜂毒肽在抗肿瘤方面作用一直是研究热点ꎮ本文主要对蜂毒肽的抗肿瘤作用的机制做了如下总结ꎮ关㊀键㊀词:蜂毒肽ꎻ抗肿瘤ꎻ凋亡ꎻ免疫调节中图分类号:Ｒ２８５㊀㊀㊀文献标识码:Ａ㊀㊀蜂毒是一种由工蜂毒腺和副腺分泌的毒液ꎬ主要含有蛋白质多肽类㊁酶类㊁生物胺类和其他物质ꎮ蜂毒肽是蜂毒中的主要功能物质ꎬ约占蜂毒干重的５０％ꎬ是一种水溶性阳离子两亲多肽ꎮ蜂毒肽是由２６个氨基酸残基组成的多肽ꎬ分子量为２８４０ꎮ蜂毒肽具有多种药理作用ꎬ比如蜂毒肽具有抗炎㊁镇痛作用ꎬ可以有效地治疗类风湿关节炎ꎬ对关节起保护作用[１]ꎮ蜂毒肽也具有抗菌作用ꎬ在体外ꎬ蜂毒肽对ＭＲＳＡ菌株的作用比对其他革兰阳性菌更为显著ꎬ更利于增强ＭＲＳＡ诱导的伤口的愈合[２]ꎮ蜂毒肽还具有抗病毒作用ꎬ其对艾滋病病毒具有杀伤作用等[３]ꎮ此外ꎬ其对肿瘤细胞的毒性作用更是引起了学者的注意ꎬ本文将蜂毒肽抗肿瘤作用的机制做了一个大致的总结ꎮ１㊀直接杀伤肿瘤细胞蜂毒肽作为单体在中性水溶液中是以随机的卷曲结构存在的ꎬ而随着ｐＨ值以及离子强度的增高ꎬ蜂毒肽自我交联ꎬ形成螺旋的四聚体结构[４]ꎮ有研究发现在不同的溶液中蜂毒肽的螺旋结构区域及螺旋间的角度是不同的ꎮ螺旋结构中螺旋的表面是前２１个极性的氨基酸ꎬ螺旋的另一面是非极性氨基酸ꎮ这个两亲性是膜结合肽和膜蛋白跨膜螺旋的特征ꎮ这个特征决定了蜂毒肽容易融入和破坏天然的和合成的磷脂双分子层ꎬ从而抑制细胞生长发育ꎬ对肿瘤细胞有强烈的细胞毒素作用ꎮ因为蜂毒肽是破坏细基金项目:吉林省教育厅 十三五 科学技术项目(ＪＪＫＨ２０１７０４１９ＫＪ)ꎻ２０１６年国家级大学生创新创业训练计划项目(２０１６１３７０６０１８).作者简介:王智传(１９９７ )ꎬ男(汉族)ꎬ本科生.通讯作者:朱文赫(１９８４ )ꎬ男(汉族)ꎬ副教授ꎬ博士.胞膜而导致细胞的死亡ꎬ所以它不用进入细胞ꎬ在细胞外即可显示出其破坏肿瘤细胞毒性ꎮ郭炬等[５]学者在研究蜂毒肽对ＬＮｃａｐ细胞的抑制作用中ꎬ发现蜂毒肽对ＬＮｃａｐ细胞有很强的抑制作用ꎬ且蜂毒肽的浓度越高对癌细胞的抑制率越高ꎮ２㊀诱导肿瘤细胞凋亡细胞凋亡是一个细胞自杀程序ꎬ包含一系列形态学和生物化学的变化ꎬ绝大多数疾病的发病机理与细胞凋亡有关ꎮ诱导细胞凋亡的途径主要有内质网途径(如Ｃａ２＋通道的影响)ꎬ线粒体凋亡途径ꎬ死亡受体途径和其他因素(如肿瘤细胞的放射敏感性)ꎮ２.１㊀Ｃａ２＋通道的影响当Ｃａ２＋从内质网中被释放进入细胞质后会激活内质网附近的ｃａｌｐａｉｎꎬ然后作用于胱天蛋白酶１２(ｃａｓｐａｓｅｓ￣１２)使之活化并释放入细胞质ꎬ从而诱导细胞凋亡ꎮ蜂毒肽能够增加细胞膜对离子的渗透能力ꎬ尤其是Ｎａ＋和Ｃａ２＋ꎮＣａ２＋可以携带信号激活细胞来执行其程序功能ꎮＳＡＲＩＳ[６]研究发现钙超载可以诱导细胞凋亡ꎬ并且是由多种细胞建立起来的ꎮＣＨＵ等[７]研究发现蜂毒素在人骨瘤细胞ＭＧ６３中能够通过Ｌ型Ｃａ２＋通道诱导Ｃａ２＋内流ꎬ使细胞内Ｃａ２＋浓度升高ꎬ导致细胞裂解从而引起ＭＧ６３细胞凋亡ꎬ而且Ｃａ２＋内流不依赖于蛋白激酶Ｃ和磷脂酶Ａ２的活性ꎮ２.２㊀线粒体凋亡途径细胞凋亡调控的活动中心是线粒体ꎬ线粒体在凋亡因子的刺激下释放出细胞色素Ｃ等促凋亡因子ꎬ促凋亡因子再激活细胞内凋亡蛋白酶ｃａｓｐａｓｅｓꎬ活化后的ｃａｓｐａｓｅｓ又反过来作用于线粒体ꎬ促进其释放细胞色素Ｃ[８]ꎮＢｃｌ￣２家族蛋白可以调节线粒体通透性转换孔ꎬ进而调节细胞色素Ｃ从线粒体释放到胞浆ꎬ２６４ 第３９卷㊀第６期２０１８年１２月㊀㊀吉㊀林㊀医㊀药㊀学㊀院㊀学㊀报Ｊｏｕｒｎａｌ㊀ｏｆ㊀Ｊｉｌｉｎ㊀Ｍｅｄｉｃａｌ㊀Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ㊀㊀Ｖｏｌ.３９㊀Ｎｏ.６Ｄｅｃ.２０１８㊀㊀并且在细胞凋亡调控中起关键作用ꎮ李玉梅[９]等研究发现ꎬ蜂毒素能够诱导Ｕ２ＯＳ细胞凋亡ꎬ并且可以促使Ｕ２ＯＳ细胞抗凋亡蛋白Ｂｃｌ￣２及Ｂａｘ蛋白表达发生变化ꎬＢａｘ/Ｂｃｌ￣２比率变化ꎬ先激活ｃａｓｐａｓｅｓ￣９ꎬ再激活ｃａｓｐａｓｅｓ￣３ꎬ最后诱导细胞发生凋亡ꎮ张晨[１０]用不同浓度的蜂毒素处理ＢＥＬ￣７４０２细胞后ꎬ细胞线粒体膜蛋白７Ａ６表达率均有所上升ꎬ且表达率随着蜂毒素浓度的升高而升高ꎬ对肝癌细胞凋亡具有促进作用ꎮ２.３㊀死亡受体途径死亡受体介导细胞凋亡的途径主要是通过跨膜受体将信号从胞外传到胞内ꎬ衔接蛋白和受体结合后ꎬ执行蛋白再与衔接蛋白结合ꎬ从而诱导细胞凋亡ꎮ其途径主要包括活化诱导的肿瘤坏死因子受体㊁肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(ＴＮＦ￣ｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ￣ｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄꎬＴＲＡＩＬ)和ＦＡＳ/ＦＡＳＬꎮ张晨[１０]用蜂毒素处理ＢＥＬ￣７４０２细胞后ꎬ根据ＲＴ￣ＰＣＲ扩增结果发现蜂毒素对细胞凋亡相关的Ｆａｓ蛋白产生影响ꎬ初步认为蜂毒素对ＢＥＬ￣７４０２细胞的诱导凋亡与Ｆａｓ蛋白表达有关ꎮ汪晨[１１]等学者通过构建小鼠荷瘤模型发现蜂毒素可以促进人肝癌细胞对ＴＲＡＩＬ的敏感性ꎬ能够通过增强激活钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ￣转化生长因子β活化激酶１￣促分裂原活化的蛋白激酶激酶￣ＪＮＫ/ｐ３８信号通路并抑制核因子κＢ抑制蛋白激酶￣核因子κＢ信号通路的方式协同ＴＲＡＩＬ诱导人肝癌细胞的凋亡ꎮ２.４㊀提高肿瘤细胞的放射敏感性放射治疗和化疗是治疗肿瘤的重要手段ꎮ一般来说ꎬ肿瘤放射性治疗的效果和放射敏感性有关ꎬ即放射敏感性强的治疗效果好ꎬ放射性敏感差的治疗效果差ꎮ国外学者[１２]研究发现蜂毒肽可以增强食管癌的放射敏感性ꎬ导致其在体外和体内的凋亡作用增强ꎮ学者认为蜂毒肽和辐射诱导的细胞凋亡可能是通过Ｂａｘ/Ｂｃｌ￣２途径激活ꎬ因而得出蜂毒肽介导的放射增敏作用可能部分是由于Ｂｃｌ￣２蛋白的调节ꎮ杨曦[１３]对鼻咽癌ＣＮＥ￣２细胞接受不同剂量的Ｘ线放射后ꎬ发现联用蜂毒肽后的常氧组和乏氧组较之前的细胞存活分数值均有显著降低ꎮ蜂毒肽在ＣＮＥ￣２常氧和乏氧细胞中的增敏比分别为１.０７和１.１３ꎬ并且蜂毒肽能够增加常氧和乏氧ＣＮＥ￣２细胞照射后的细胞总凋亡率ꎮ因此ꎬ蜂毒肽可以有效地提高肿瘤细胞的放射敏感性ꎬ促进肿瘤细胞的诱导凋亡ꎮ３㊀抑制肿瘤细胞的侵袭和转移血管是肿瘤细胞侵袭和转移的重要渠道之一ꎬ肿瘤细胞可以通过血管流向全身各处ꎮ因此ꎬ我们可以通过抑制肿瘤相关血管的生成来抑制肿瘤细胞的侵袭和转移ꎮ国外学者[１４]研究发现蜂毒肽能够抑制血管内皮生长因子Ａ诱导Ｌｅｗｉｓ肺癌体内肿瘤的生长和肿瘤相关血管的生成ꎬ而且这种抑制血管内皮生长因子Ａ诱导增殖和毛细分化没有细胞毒性ꎬ与血管内皮生长因子２和环氧化酶￣２通过促分裂原活化的蛋白激酶信号通路有关ꎮ侵袭和转移的生物学过程中需要破坏细胞外基质ꎮ因此ꎬ细胞外基质降解化酶如基质金属蛋白酶成为了肿瘤侵袭转移调控的重要药物靶标ꎮＰＡＲＫ[１５]研究表明蜂毒肽可以通过抑制基质金属蛋白酶￣９表达来抑制佛波酯刺激的癌细胞侵袭ꎬ而基质金属蛋白酶￣９表达的抑制是由于蜂毒肽抑制磷酸化细胞外调节蛋白激酶(ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｒｅｇ￣ｕｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅꎬＥＲＫ)和磷酸化Ｊｕｎ水平导致影响了ＡＰ￣１和核因子κＢꎮ从而表明ꎬ蜂毒肽可以通过防止细胞外基质的降解来抑制癌细胞的侵袭和转移ꎮＬＩＵ[１６]研究表明Ｒａｃ１是体内和体外肝癌细胞转移的关键调节剂ꎮＪｕｎ通路是Ｒａｃ１依赖通路之一ꎬ而蜂毒素可以通过抑制Ｊｕｎ通路很大程度上抑制细胞的运动ꎬ从而防止体内肝癌细胞的转移ꎮ４㊀免疫调节作用Ｔ细胞调节是人体内细胞免疫调节的重要部分ꎬ在Ｔ细胞调节中存在一个重要的平衡即辅助性Ｔ细胞１(ｈｅｌｐｅｒＴｃｅｌｌꎬＴｈ１)/Ｔｈ２平衡ꎬＴｈ１细胞分泌的γ￣干扰素具有抗肿瘤作用ꎬ而Ｔｈ２细胞分泌的白细胞介素￣４(ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎꎬＩＬ￣４)具有促进炎症作用ꎮ如果使Ｔｈ１/Ｔｈ２平衡向Ｔｈ１倾斜ꎬ就可以提高Ｔ细胞的抗肿瘤作用ꎮＮＡＭ[１７]等研究发现蜂毒可以通过上调Ｔ￣ｂｅｔ选择性的诱导Ｔｈ１细胞谱系的发展ꎬ增加Ｔｈ１细胞的特异性细胞因子γ￣干扰素的表达ꎮ而且这种作用是通过直接影响ＣＤ４＋Ｔ细胞介导的ꎬ不依赖于任何抗原呈递细胞ꎮ王秋波[１８]在对志愿者的蜂疗后发现机体的ＩＬ￣２含量明显升高ꎬＩＬ￣４含量降低ꎬ导致Ｔｈ１细胞功能的增强ꎬ对机体细胞免疫功能起正向调节的作用ꎮ熊浪平[１９]等学者通过小鼠实验发现蜂毒肽在免疫细胞激活的状态下可以上调Ｔｈ１比例和γ￣干扰素浓度ꎬ下调ＩＬ￣４浓度对免疫细胞产生影响ꎬ从而可以提高抗肿瘤作用ꎮ３６４第６期㊀王智传ꎬ等.蜂毒肽抗肿瘤作用机制研究进展５㊀展㊀望近年来ꎬ蜂毒肽在抗肿瘤方面取得了很多进展ꎬ但是蜂毒肽本身也存在着很多问题ꎮ比如蜂毒肽的来源及分离纯化较困难ꎬ蜂毒肽自身的溶血性问题和非特异性作用等ꎬ这些问题严重阻碍了蜂毒肽在抗肿瘤方面的进一步发展和临床上的应用ꎮ黄川[２０]等学者利用仿高密度脂蛋白多肽脂质纳米颗粒作为蜂毒肽的运载体ꎬ通过将蜂毒肽隐藏在单层磷脂分子层内ꎬ有效地解决了蜂毒肽自身的溶血性问题和非特异性作用ꎮ国外学者[２１]研究出了一种新型融合蛋白ｍｅｌｉｔｔｉｎ￣ｍｈｉｌ￣２ꎬ其与人类白细胞介素突变基因和蜂毒肽有关ꎮ它可以直接抑制人卵巢癌ＳＫＯＶ３体内和体外肿瘤的生长ꎬ相比于原先的蜂毒肽ꎬ增强了其抗肿瘤活性ꎮ总之ꎬ随着学者对蜂毒肽越来越多的重视和研究ꎬ蜂毒肽本身存在的问题及缺点终会得到良好的解决ꎬ蜂毒肽将被广泛地应用于临床ꎬ成为更加有效的抗肿瘤药物ꎮ参考文献:[１]㊀李晶华ꎬ王晓华ꎬ王宗仁ꎬ等.蜂毒肽大鼠足三里微量注射的抗炎㊁镇痛作用研究[Ｊ].陕西中医学院学报ꎬ２０１２ꎬ３５(４):７４￣７６.[２]㊀ＣＨＯＩＪＨꎬＪＡＮＧＡＹꎬＬＩＮＳꎬｅｔａｌ.Ｍｅｌｉｔｔｉｎꎬａｈｏｎｅｙｂｅｅｖｅｎｏｍ￣ｄｅｒｉｖｅｄａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｅｐｔｉｄｅꎬｍａｙｔａｒｇｅｔｍｅｔｈｉｃｉｌｉｌ￣ｌｉｎ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ[Ｊ].ＭｏｌＭｅｄＲｅｐꎬ２０１５ꎬ１２(５):６４８３￣６４９０.[３]㊀ＨＯＯＤＪＬꎬＪＡＬＬＯＵＫＡＰꎬＣＡＭＰＢＥＬＬＮꎬｅｔａｌ.ＣｙｔｏｌｙｔｉｃｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓａｔｔｅｎｕａｔｅＨＩＶ￣１ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ[Ｊ].ＡｎｔｉｖｉｒＴｈｅｒꎬ２０１３ꎬ１８(１):９５￣１０３.[４]㊀ＧＬＡＴＴＬＩＡꎬＣＨＡＮＤＲＡＳＥＫＨＡＲＩꎬＧＵＮＳＴＥＲＥＮＷＦ.Ａｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｙｎａｍｉｃｓｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｂｅｅｖｅｎｏｍｍｅｌｉｔｔｉｎｉｎａ￣ｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｔｉｏｎꎬｉｎｍｅｔｈａｎｏｌꎬａｎｄｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎａｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｂｉｌａｙｅｒ[Ｊ].ＥｕｒＢｉｏｐｈｙｓＪꎬ２００６ꎬ３５(３):２５５￣２６７. [５]㊀郭炬ꎬ曹润福ꎬ余兴维ꎬ等.重组蜂毒肽对前列腺癌细胞的抑制实验研究[Ｊ].临床医药文献电子杂志ꎬ２０１４ꎬ１(８):１２９６￣１２９７.[６]㊀ＳＡＲＩＳＮＥꎬＣＡＲＡＦＯＬＩＥ.Ａｈｉｓｔｏｒｉｃａｌｒｅｖｉｅｗｏｆｃｅｌｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍｈａｎｄｌｉｎｇꎬｗｉｔｈｅｍｐｈａｓｉｓｏｎｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ[Ｊ].Ｂｉｏ￣ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ(Ｍｏｓｃ)ꎬ２００５ꎬ７０(２):１８７￣１９４. [７]㊀ＣＨＵＳＴꎬＣＨＥＮＧＨＨꎬＨＵＡＮＧＣＪꎬｅｔａｌ.ＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２￣ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔＣａ２＋ｅｎｔｒｙａｎｄｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎ￣ｄｕｃｅｄｂｙｍｅｌｉｔｔｉｎｉｎｈｕｍａｎＭＧ６３ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＬｉｆｅＳｃｉꎬ２００７ꎬ８０(４):３６４￣３６９.[８]㊀朱玉山ꎬ陈俭.线粒体与细胞凋亡调控[Ｊ].生命科学ꎬ２００８ꎬ２０(４):５０６￣５１３.[９]㊀李玉梅ꎬ顾伟ꎬ高启龙ꎬ等.蜂毒素对人成骨肉瘤细胞体外增殖抑制作用的机制探讨[Ｊ].江苏中医药ꎬ２００８ꎬ４０(３):８５￣８７.[１０]㊀张晨ꎬ李柏ꎬ吕书勤ꎬ等.蜂毒素对人肝癌细胞线粒体膜蛋白７Ａ６和凋亡相关基因产物Ｆａｓ及其配体ＦａｓＬ表达的影响[Ｊ].中西医结合学报ꎬ２００７ꎬ５(５):５５９￣５６３. [１１]㊀汪晨.蜂毒素协同ＴＲＡＩＬ诱导人肝细胞癌细胞凋亡的实验研究[Ｄ].上海:第二军医大学ꎬ２００９.[１２]㊀ＺＨＵＨＣꎬＹＡＮＧＸꎬＬＩＵＪꎬｅｔａｌ.Ｍｅｌｉｔｔｉｎｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｗｉｔｈｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｐ￣ｏｐｔｏｓｉｓｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏ[Ｊ].ＴｕｍｏｒＢｉｏｌꎬ２０１４ꎬ３５(９):８６９９￣８７０５.[１３]㊀杨曦.乏氧诱导因子￣１α抑制剂盐酸小檗碱和蜂毒肽对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响及机制研究[Ｄ].南京:南京医科大学ꎬ２０１６.[１４]㊀ＨＵＨＪＥꎬＫＡＮＧＪＷꎬＮＡＭＤꎬｅｔａｌ.ＭｅｌｉｔｔｉｎｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓＶＥＧＦ￣Ａ￣ｉｎｄｕｃｅｄｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈｂｙｂｌｏｃｋｉｎｇＶＥＧＦ￣２ａｎｄｔｈｅＣＯＸ￣２￣ｍｅｄｉａｔｅｄＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＪＮａｔＰｒｏｄꎬ２０１２ꎬ７５(１１):１９２２￣１９２９.[１５]㊀ＰＡＲＫＪＨꎬＪＥＯＮＧＹＪꎬＰＡＲＫＫＫꎬｅｔａｌ.Ｍｅｌｉｔｔｉｎｓｕｐ￣ｐｒｅｓｓｅｓＰＭＡ￣ｉｎｄｕｃｅｄｔｕｍｏｒｃｅｌｌｉｎｖａｓｉｏｎｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇＮＦ￣ｋａｐｐａＢａｎｄＡＰ￣１￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＭＭＰ￣９ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ[Ｊ].ＭｏｌＣｅｌｌｓꎬ２０１０ꎬ２９(２):２０９￣２１５.[１６]㊀ＬＩＵＳＪꎬＹＵＭꎬＨＥＹꎬｅｔａｌ.ＭｅｌｉｔｔｉｎｐｒｅｖｅｎｔｓｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｍｅｔａｓｔａｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅＲａｃ１￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙꎬ２００８ꎬ４７(６):１９６４￣１９７３. [１７]㊀ＮＡＭＳꎬＫＯＥꎬＰＡＲＫＳＫꎬｅｔａｌ.ＢｅｅｖｅｎｏｍｍｏｄｕｌａｔｅｓｍｕｒｉｎｅＴｈ１/Ｔｈ２ｌｉｎｅａｇｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[Ｊ].ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐ￣ｈａｒｍａｃｏｌꎬ２００５ꎬ５(９):１４０６￣１４１１.[１８]㊀王秋波ꎬ鲁迎年ꎬ臧云娟ꎬ等.蜂毒的免疫调节机制研究[Ｊ].中国免疫学杂志ꎬ２０００ꎬ１６(１０):５４２￣５４４. 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蜂疗抗癌的原理
蜂疗抗癌的原理问：蜂针疗法的抗癌原理是什么？李万瑶博士：蜂毒的抗肿瘤成分主要是Melittin（蜂毒肽）和PLA2（磷脂酶A2）。
通常认为两者使肿瘤细胞线粒体膜溶解，使细胞的正常呼吸受到抑制，因而肿瘤组织氧化磷酸化的过程受到抑蔼，氧化功能被破坏，导致肿瘤组织生长抑制。
国内有人实验，：将不周组分的3组蜂毒（透明质酸酶、PLA2、Melittin）加到肝癌细胞株H74O2，观察其癌细胞的杀伤活性。
结果表明：透明质酸酶在2—200mglL终末浓度无杀瘤活性；PLA2在2-200mg/L可将癌细胞全部杀死；Melittin在2、20、200mglL终末浓度时杀瘤活性分别达到61%、69%、100%。
又有人研究，用胡蜂毒对小鼠肿瘤模型进行肿瘤杀伤和治疗，结果显示蜂毒有直接杀伤肿瘤细胞的作用，且melittin对腹膜有轻度刺激。
有人研究蜂毒肽对叶绿体光化学反应时指出，蜂毒肽是叶绿体光化学反应的一种抑制剂。
其抑制作用是对膜的脂质双层结构起作用，可能与脂质中碳氢链相作用，而改变双层结构。
以此可考虑是蜂毒对瘤细胞破坏的机制之一。
还有实验证明蜂毒能使肿瘤细胞的增殖受到明显抑制；可抑制肿瘤组织的氧化磷酸化过程，抑制组织代谢，从而有抑制肿瘤作用。
目前使用蜂毒素抗肿瘤的方式有：直接使用蜂毒素作用于肿瘤细胞。
主要是研究其分子机制。
Saini发现蜂毒素裂解人单核细胞性白血病细胞U937是通过激活内源性磷脂酶D而致。
Arora 证明蜂毒素激活磷脂酶A2，解除肝癌细胞对缺氧的抵抗。
Kubo发现蜂毒素可杀伤K562和HL-60细胞，蜂毒素插入K562细胞的胞膜中形成孔道，引起Caz+内流。
胞内Ca2+浓度升高，细胞裂解。
蜂毒素可诱导大鼠神经角质瘤的细胞基因表达，参与抗肿瘤T细胞应答，有望成为抗肿瘤T细胞免疫疗法的靶分子等。
蜂毒素的作用也受细胞组织学来源的影响，蜂毒素在1mol/L浓度时阻止肿瘤细胞的增生，而不抑制正常细胞的生长和克隆率。
蜜蜂毒的功效与作用
蜜蜂毒的功效与作用蜜蜂毒的功效和作用引言:毒蜂向人类释放的毒液是一种独特的物质，拥有多种作用和功效。
从古至今，人们就一直在探索毒蜂的毒液是否能够被用于治疗各种疾病，并且有众多研究表明，毒蜂毒液具有许多医学上的应用和健康益处。
本文将介绍蜜蜂毒的成分和作用机制，以及它在治疗关节炎、哮喘、癌症以及促进皮肤健康方面的功效。
一、蜜蜂毒的成分及作用机制:1.1 毒蜂的分类及毒液组成:蜜蜂主要分为蜜蜂科和马蜂科，目前被广泛研究的主要是蜜蜂属的欧洲蜜蜂(Apis mellifera)。
蜜蜂的蜇刺主要由毒针和毒囊组成，蜇刺的刺入会导致毒囊里的毒液被注入到被蜇者体内。
蜜蜂毒液主要由多种生物活性成分组成，其中包括肽类、蛋白酶、磷酸酯酶、氨基酸、多肽、神经递质和酪氨酸激酶等。
这些成分通过协同作用，产生了多种不同的作用机制。
1.2 蜜蜂毒的作用机制:蜜蜂毒液的作用机制主要包括抗炎、抗氧化、免疫调节、止痛、抗肿瘤和皮肤保健等多种作用。
首先，蜜蜂毒液中的肽类和蛋白酶具有抗炎作用。
它们可以抑制炎症反应，减少炎症介质的释放，从而减轻疼痛和刺激。
此外，蜜蜂毒液中的磷酸酯酶和氨基酸等成分也具有抗炎作用，能够调节免疫系统的功能，减轻疾病引起的炎症反应。
其次，蜜蜂毒液中的多肽和神经递质等成分具有止痛作用。
这些成分可以通过干扰疼痛传导和释放疼痛介质等方式，减轻疼痛感受。
同时，它们还能够增加内啡肽和内源性吗啡等天然止痛物质的释放，提高人体自身的疼痛耐受性。
此外，蜜蜂毒液中的多肽和酪氨酸激酶等成分还具有抗肿瘤作用。
它们可以通过抑制肿瘤细胞的生长和复制，促进肿瘤细胞的凋亡，并增强人体免疫力，达到抗癌的效果。
最后，蜜蜂毒液中的多肽和氨基酸等成分还具有保护皮肤健康的作用。
它们可以刺激胶原蛋白的合成，促进皮肤的再生和修复，预防和减少皮肤老化。
此外，蜜蜂毒液中的肽类还具有抗菌和抗氧化作用，有助于抑制细菌滋生和净化皮肤。
二、蜜蜂毒在疾病治疗中的应用:2.1 蜜蜂毒在关节炎治疗中的应用:关节炎是一种常见的炎症性关节病，如类风湿性关节炎和骨关节炎等。
蜂毒的主要成分及药理作用研究进展
５０APICULTURE OF CHINA蜂毒的主要成分及药理作用研究进展王欣雨1 赵磊磊2 耿明阳3 车苗苗2 张铭2（1 中国农业科学院蜜蜂研究所，北京 100093；2 沁水县畜牧兽医服务中心，沁水 048026；3 伊犁哈萨克自治州畜牧总站，伊犁 835000）蜂毒是由蜜蜂工蜂分泌的一种具有芳香气味的透明液体，储存在其腹部毒囊中。
蜂毒pH 值为4.5~5.5，成分极为复杂，含有多种多肽类、酶类、胺类、酸类、氨基酸及微量元素等，具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗菌、降血压等多方面作用。
本文重点综述了近年有关蜂毒的主要成分及其在医药方面的研究进展。
1 蜂毒主要成分1.1 多肽类多肽类是蜂毒中主要成分之一，其中蜂毒肽（Melittin）、蜂毒明肽（Apamin）、脱颗粒肥大细胞多肽（Mast cell degranulating peptide）等3种肽是蜂毒中主要活性肽。
蜂毒肽约占蜂毒干重的40%~60%，由26个氨基酸残基组成，强碱性（pH=10）。
蜂毒肽的羧基端是亲水的，而氨基端是疏水的。
因此，它同时具有亲水性和疏水性。
蜂毒肽的两亲性是膜结合肽和膜蛋白跨膜螺旋的基础，这个特性决定它既可以溶于水，又可以与膜自然结合，进而溶解细胞。
除此之外，它还具有显著的抗菌、抗肿瘤和抗病毒活性。
蜂毒明肽占蜂毒干重的2%~3%，由18个氨基酸组成，含有2个二硫键。
蜂毒明肽是一种很强的神经毒素，其第13~14位上的精氨酸是神经毒性所必需的组成部分，主要作用于神经系统，可以穿过血脑屏障，直接作用于中枢神经系统，有研究证明其在改善神经系统疾病方面具有潜在益处[1, 2]。
肥大脱粒肽占蜂毒干物质的2%~3%，由22个氨基酸组成，与蜂毒明肽具有相似的化学组成和结构，分子中也含有2个二硫键，但二者的活性截然不同[3]。
肥大脱粒肽能使肥大细胞脱粒沉降，释放组织胺和5-羟色胺，具有抗炎作用。
1.2 酶类蜂毒中含有55种以上酶类，主要有透明质酸酶（Hyaluronidase）、蜂毒磷酯酶A 2（Bee venom phospholipase A 2）等。
蜂蜜的抗癌潜力和抗肿瘤作用
蜂蜜的抗癌潜力和抗肿瘤作用蜂蜜是一种常见且受欢迎的天然食品，具有抗氧化、抗菌、抗炎等多种保健功效。
近年来的研究表明，蜂蜜还具有抗癌潜力和抗肿瘤作用。
本文将探讨蜂蜜的抗癌机制以及其在肿瘤治疗中的应用。
一、蜂蜜的抗癌机制1.1 氧化应激损伤的防护作用氧化应激是癌症发生和发展的重要因素之一。
蜂蜜富含多种抗氧化物质，如多酚、酚类化合物和维生素C等，可以中和自由基，减轻细胞氧化应激损伤。
这些抗氧化物质可以提高细胞抗氧化能力，减少DNA损伤和突变，从而抑制肿瘤的形成。
1.2 细胞凋亡的调控作用细胞凋亡是机体清除异常细胞的重要手段，它在维持细胞动态平衡和防止肿瘤发生中起到关键作用。
研究发现，蜂蜜能够通过调节多个细胞凋亡通路的活性，促进肿瘤细胞的自噬和凋亡。
蜂蜜中的活性成分可抑制肿瘤细胞生长，诱导细胞周期停滞和DNA损伤，从而促使恶性肿瘤发生逆转。
1.3 免疫调节作用免疫系统在抵御肿瘤的发生和发展中起到重要作用。
蜂蜜含有丰富的多糖类物质，这些物质能够调节免疫细胞的活性，增强免疫细胞的功能。
蜂蜜还可促进自然杀伤细胞的活性，增加巨噬细胞的吞噬能力，进而提高机体的抗肿瘤免疫应答。
二、蜂蜜在肿瘤治疗中的应用2.1 辅助化疗和放疗蜂蜜作为一种天然食品，与化疗、放疗等治疗方法相互作用，可以帮助减轻治疗过程中的副作用。
蜂蜜中的多糖类物质能够增强机体的耐受性，减少消化系统不适和免疫系统的负担。
此外，蜂蜜中的抗氧化物质可以减弱化疗和放疗引起的自由基损伤，保护正常细胞。
2.2 抗肿瘤药物载体蜂蜜中的多孔结构和粘性特性使其成为一种理想的药物载体。
研究发现，将抗肿瘤药物与蜂蜜结合，可以提高药物的稳定性和溶解度，增强药物的靶向性，减少副作用。
蜂蜜不仅可以延长抗肿瘤药物在体内的停留时间，还可以促进药物的释放，提高抗肿瘤效果。
2.3 直接应用于肿瘤表面近年来的研究表明，将蜂蜜直接应用于肿瘤表面，可以通过形成黏稠的膜层阻断肿瘤的营养供应，抑制肿瘤的生长和扩散。
蜂毒素对人肝癌细胞中HMGB1及VEGF-C表达的影响
蜂毒素对人肝癌细胞中HMGB1及VEGF-C表达的影响曹清心;汪晨;刘宇;赵丹;凌昌全【期刊名称】《东南国防医药》【年(卷),期】2012(14)2【摘要】目的观察蜂毒素对人肝癌细胞株HepG2中高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)及血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factors C,VEGF-C)表达的影响,探讨其抑制肝癌细胞的作用机制.方法肝癌细胞HepG2体外培养,经蜂毒素处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法了解蜂毒素对肝癌细胞增殖的影响,用Western-blotting、qRT-PCR方法检测HMGB1、VEGF-C的表达.结果蜂毒素在体外能够抑制肝癌细胞的增殖活性;Westem-blotting结果显示,蜂毒素可抑制 HMGB1的表达,且呈浓度依赖性,但对VEGF-C 的蛋白表达无明显影响;qRT-PCR结果显示,蜂毒素在mRNA水平均具有抑制HMGB1、VEGF-C表达的作用.结论蜂毒素可降低肝癌细胞的增殖活性,并可能通过HMGB1、VEGF-C的表达发挥抗肝癌作用.%Objective To observe the effect of melittin on the expressions of high mobility group box 1 (HMGB1) and vascular endothelial growth factors C( VEGF-C) in hepatocarcinoma cells in vitro and to study the mechanisms of melittin in hepatocarcinoma cells. Methods HepG2 cell line was treated with melittin in vitro. The inhibition of proliferation was delected by MTT assay. The expressions of HMGB1 and VEGF-C were detected by western-blotting and real-time quantitative PCR{ qRT-PCR) assay. Results Melittin inhibited cell proliferation in vitro. Western-blotting outcome showed that melitlin could down-regulate theprotein of HMGB1, while VEGF-C expression did not change. qRT-PCR results showed that HMGBI and VEGF-C mRNA expressions were down-regulate by melittin. Conclusion It is suggested that melittin can inhibit hepatocarcinoma cells proliferation. The effect of melittin in inducing anti-hepatocarcinoma may be related with down-regulation of HMGBI and VEGF-C.【总页数】4页(P101-104)【作者】曹清心;汪晨;刘宇;赵丹;凌昌全【作者单位】200433上海,第二军医大学长海医院中医科;200052上海,解放军455医院;200433上海,第二军医大学长海医院中医科;200433上海,第二军医大学长海医院心血管内科;200433上海,第二军医大学长海医院呼吸内科;200433上海,第二军医大学长海医院中医科【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.蜂毒素对人肝癌 BEL-7402细胞增殖和VEGF、bFGF表达的影响 [J], 宋长城;吕祥;程彬彬;李柏;凌昌全2.VEGF-C siRNA载体构建及其对转染食管癌细胞中VEGF-C表达的影响 [J], 张红新;宋一民;高冬玲;陈奎生;赵国强;张云汉3.低氧对人肺动脉平滑肌和人肺动脉内皮细胞中HMGB1及相关炎症因子表达的影响 [J], 卜宝英; 徐喜媛; 韩俊萍; 杨敬平4.HMGB1对人胆管癌QBC939细胞VEGF-C表达的影响 [J], 伍国顺;王桂良5.蜂毒素对人肝癌细胞线粒体膜蛋白7A6和凋亡相关基因产物Fas及其配体FasL 表达的影响 [J], 张晨;李柏;吕书勤;李勇;苏永华;凌昌全因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用
蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用张晨;李柏;黄雪强;张亚妮;苏永华;凌昌全【期刊名称】《浙江中医药大学学报》【年(卷),期】2007(31)5【摘要】[目的]观察蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用.[方法]肝癌细胞BEL-7402体外培养,采用MTT法检测蜂毒素对其增殖抑制作用,流式细胞术测定蜂毒素对细胞增殖核抗原表达和细胞周期的影响.[结果]蜂毒素体外能够抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖活性;并抑制细胞增殖核抗原的表达,呈剂量依赖性;干扰细胞周期,使S期细胞增加,G2/M期细胞减少.[结论]蜂毒素具有抑制BEL-7402肝癌细胞增殖的作用,机制可能与抑制细胞增殖核抗原表达和干扰细胞周期有关.【总页数】3页(P560-561,564)【作者】张晨;李柏;黄雪强;张亚妮;苏永华;凌昌全【作者单位】第二军医大学附属长海医院,上海,200433;第二军医大学附属长海医院,上海,200433;第二军医大学附属长海医院,上海,200433;第二军医大学附属长海医院,上海,200433;第二军医大学附属长海医院,上海,200433;第二军医大学附属长海医院,上海,200433【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.油樟叶提取物对人肝癌BEL-7402细胞增殖的抑制作用 [J], 杜永华;叶奎川;周黎军;张萍;魏琴;殷中琼2.海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用及其机制 [J], 姜艳霞;纪朋艳;朱文赫;张巍;徐俊杰;李妍;雷钧涛3.microRNA-149-5p过表达对肝癌细胞HepG2和Bel-7402增殖及迁移的抑制作用 [J], 耿亚军;李树栋;刘申政;任建军;张彤4.蜂毒素对人肝癌 BEL-7402细胞增殖和VEGF、bFGF表达的影响 [J], 宋长城;吕祥;程彬彬;李柏;凌昌全5.蜂毒素基因重组腺病毒对人肝癌Hep3B细胞增殖抑制作用 [J], 李柏;张晨;李绍祥;顾伟;万旭英;凌昌全因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蜂毒素抗肿瘤作用的研究进展
蜂毒素抗肿瘤作用的研究进展
崔金刚;张腾
【期刊名称】《中医药信息》
【年(卷),期】2012(29)5
【摘要】蜂毒素是蜜蜂螫针排出的毒液的主要活性成分,具有良好的临床疗效.近年来研究表明,蜂毒素具有确切的抗肿瘤活性,现从蜂毒素抑制肿瘤血管生成抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤的凋亡、促进肿瘤细胞周期阻滞作用等方面进行综述,探讨其抗肿瘤作用的机制,为进一步开发蜂毒素提供参考.
【总页数】3页(P111-113)
【作者】崔金刚;张腾
【作者单位】上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院/上海市中医药研究院中西医结合临床研究所,上海200437;上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院/上海市中医药研究院中西医结合临床研究所,上海200437
【正文语种】中文
【中图分类】R285
【相关文献】
1.蜂毒素抗肿瘤作用的研究进展
2.蜂毒素治疗肝癌的机制及相关制剂研究进展
3.蜂毒素的纯化方法及体外抗肿瘤作用研究
4.蜂毒素抑制消化道肿瘤生长的研究进展
5.蜂毒素抗肿瘤作用研究进展
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辽宁省沈阳市第一二〇2021~2022学年高三第一次质量检测生物试题
单选题1. 科学家为了探究影响细胞衰老的年龄因素，进行了如下实验。
实验一：在相同条件下分别单独培养胎儿、中年人、老年人的肺成纤维细胞，增殖代数分比为50、20、2-4。
实验二：将年轻人的肺成纤维细胞去核后与老年人的细胞核融合，细胞几乎不分裂；将老年人的肺成纤维细胞去核后与年轻人的细胞核融合，细胞分裂旺盛。
下列叙述，错误的是（ ）。
A. 老年人的细胞增殖能力会受细胞核染色质收缩的影响B. 细胞增殖能力与个体的年龄和细胞分裂次数密切相关C. 老年人肺成纤维细胞代谢速率减慢与酶活性降低有关D. 由上述实验可推测肺成纤维细胞的分裂与细胞质无关2. HIV侵入人体后只与T细胞相结合，是因为只有T细胞表面含有CCR5的特殊蛋白质（由CCR5基因编码）。
某医疗团队从一名天生具有HIV抵抗力、且CCR5基因异常的捐赠者（甲）身上取得骨髓，并将其移植到一名患有白血病、并患有HIV（感染HIV十多年）的患者身上。
结果不但治愈了白血病，而且彻底清除了患者身上的所有HIV。
下列说法正确的是（ ）。
A. 造血干细胞只通过增殖就能产生各种血细胞B. 艾滋病患者肿瘤的发病率大大上升，主要是由于免疫系统的防卫功能下降C. 艾滋病患者的HIV不侵染B细胞，是因为B细胞没有编码CCR5的基因D. 捐赠者（甲）感染HIV后，能够发生体液免疫，不能发生细胞免疫3. 下列关于细胞中无机物的叙述，正确的是（ ）。
A. 线粒体、叶绿体和核糖体既产生水也消耗水B. 缺铁会使红细胞中的血红蛋白运输氧气能力下降C. 植物秸秆充分晒干后其体内剩余的物质主要是无机盐D. 能被细胞吸收用来合成DNA和RNA等物质4. 下列有关同位素标记（示踪）实验的说法，正确的有几项？（ ）①科学家把用放射性元素标记的蛋白质注入细胞中，发现放射性依次出现于：附有核糖体的内质网、分泌小泡、高尔基体、小囊泡、细胞膜②卡尔文通过向小球藻提供标记的，并追踪检测其放射性的方法，搞清楚了光合作用的全过程③赫尔希和蔡斯利用和标记噬菌体侵染细菌的实验中，采用了搅拌和离心等手段将和蛋白质分开再分别检测其放射性④要证明通过半保留的方式进行复制，可以将标记的细菌放在的培养基中培养一代后，再检测后代放射性的强弱A. 0项B. 1项C. 2项D. 3项5. 下列有关生物体化合物或结构的叙述正确的是（ ）。
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蜂 毒 素是 蜂毒 的主要 活性 成分 之一 ， 具 有抗 菌 、
抗病毒、 抗 辐射 以及 强 大 的抗 炎 镇痛 作 用 并 可 通 过 不 同的细 胞死 亡机 制在 不 同类型 的肿 瘤细 胞 中发挥 细胞 毒性 。Ｉ Ａ 型磷脂 酰肌 醇 ３ ． 激酶（ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ｉ － ｄ ｙ ｌ ｉ ｎ ｏ ｓ ｉ ｔ ｏ ｌ ３ － ｋ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ， Ｐ Ｉ ３ Ｋ ｓ ） 及 其下 游分 子丝 氨 酸／ 苏 氨 酸蛋 白激 酶 Ｂ （ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｋ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ Ｂ， Ａ Ｋ Ｔ ） 所 组成 的信 号通 路在 广泛 的人类 肿 瘤 谱 中失 调 ， 调 节 肿 瘤 细胞 的增 殖 、 存活 与侵 袭 转 移 行 为 Ｊ 。癌 症 的 发 生 也是
人ｍ ｉ ｒ 一 ２ ０ ３ ｍ ｉ ｍ ｉ ｃ ｓ 过 表 达 ｍｉ ｒ 一 ２ ０ ３后 应 用 实 时 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ 和
达的影响鲜有研 究。该实验 采用蜂毒素体外 干预 法， 观察蜂毒素对 Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２、 Ｓ ＭＭＣ － ７ ７ ２ １细 胞体 外 增
殖 的抑制 作用 并探讨 其 与 ｍ ｉ Ｒ 一 ２ ０ ３及 其 目标 靶基 因 Ｐ Ｉ ３ Ｋ Ｃ Ａ 以及 Ｐ Ｉ ３ Ｋ ／ ＡＫ Ｔ信号 通路 的关 系 ， 为临床 肝 细 胞癌 的治疗 提供 依据 。
・
Hale Waihona Puke ９ ８ ２・ 安徽 医科 大学学报
Ａ ｃ ｔ ａ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｓ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ ｉ ｓ Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ ２ ０ １ ５ Ｊ ｕ ｌ ； ５ ０ （ ７ ）
蜂毒 素对人肝癌 细胞生长的抑制作 用及其 机制 探讨
杨 莹莹 ， 赵 斌， 孟晓明， 黄 成， 李 俊
Ｒ ９ ６ ２ ． １
１ ． １ ． １ 细胞 株
人肝 癌 细胞株 （ Ｈｅ ｐ Ｇ ２ 、 Ｓ ＭＭＣ －
７ ７ ２ １ ） 购 自中国科 学 院上海 细胞 库 。 １ ． １ ． ２ 试 剂 蜂 毒 素 （ 安徽省百 春制药厂 ） ； 胎 牛 血清 （ 杭州 四季 青 公 司 ） ； Ｄ ＭＥ Ｍ 高糖 培养 基 （ 美 国 Ｈ ｙ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ公 司 ） ； 胰 酶 细胞 消化 液 （ 上 海 碧 云 天 生 物
京博 奥 森 生 物 技 术 有 限 公 司 ） ； Ｒ Ｉ Ｓ Ｏ Ｒ Ｎ Ａ Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
Ｒ ｅ ａ ｇ ｅ ｎ ｔ 、Ｅ ｚ Ｏ ｍ ｉ ｃ ｓ Ｔ Ｍ Ｏ ｎ ｅ － ｓ ｔ ｅ ｐ Ｑ ｐ ｃ ｒ Ｋ ｉ ｔ 、Ｅ ｚ Ｏ ｍ ｉ ｃ ｓ Ｔ Ｍ
ｃ ｒ ｏ Ｒ Ｎ Ａ 一 ２ ０ ３ ； Ｐ Ｉ ３ Ｋ ／ Ａ Ｋ Ｔ信号通路
中 图分 类 号 文 献 标 志码 Ａ 文 章 编 号 １ ０ ０ ０—１ ４ ９ ２ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ７—０ ９ ８ ２— ０ ６
公司） ； 兔抗 Ｐ Ｉ ３ Ｋ、 磷酸化 Ａ Ｋ Ｔ（ Ｐ — Ａ Ｋ Ｔ） 、 Ａ Ｋ Ｔ（ 北
１ 材料 与方 法
１ ． １ 主要材 料
Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ检 测 ｍ ｉ ｒ 一 ２ ０ ３对 Ｐ Ｉ ３ Ｋ ／ Ａ Ｋ Ｔ信 号 通 路 的 作 用。
结果
与正 常组 比较 ， 蜂 毒素 处理 组细 胞增 殖 明显 受 到抑
制， 并 呈浓度依赖性 ； 实时定量 Ｐ Ｃ Ｒ结果 显示蜂 毒素 （ １ 、 ２ 、 ４ ｍｇ ／ Ｌ ） 可 以明显升高 ｍ ｉ ｒ 一 ２ ０ ３的表达 ， Ｐ Ｉ Ｋ ３ Ｃ Ａ ｍ Ｒ Ｎ Ａ的表达 无 明显 改变 ； Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 法 结果显 示蜂毒 素 （ １ 、 ２ 、 ４ ｍ ｇ ／ Ｌ ） 可以降低 Ｐ Ｉ ３ Ｋ 以及 Ｐ — Ａ Ｋ Ｔ 蛋 白 的 表 达 。在 Ｈｅ ｐ Ｇ ２和 Ｓ ＭＭＣ － ７ ７ ２ １ 细胞 中过表达 ｍｉ ｒ － ２ ０ ３后 ， 与正 常组及转 染 阴性 对照组 比较 ， Ｐ Ｉ Ｋ ３ Ｃ Ａ ｍ Ｒ Ｎ Ａ的表达无明显改变但 Ｐ Ｉ ３ Ｋ以及 Ｐ — Ａ Ｋ Ｔ的蛋 白表达 降低 。结论 蜂 毒 素 能 抑制 Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２和 Ｓ ＭＭＣ 一 ７ ７ ２ １ 细胞 的增殖 ， 其机制可 能是通 过上调 ｍ ｉ ｒ 一 ２ ０ ３的 表达 ， 进 而在 转录后水平靶 向抑 制 Ｐ Ｉ ３ Ｋ的表达 ， 抑制 Ｐ Ｉ ３ Ｋ ／ Ａ Ｋ Ｔ信号通路 的活化 。 关键词 蜂 毒素 ； 人 肝 癌 细胞 ； 增 殖 抑制 ； 表观 遗 传学 ； ｍ ｉ —
摘 要 目的 研 究 蜂 毒 素 对 人 肝 癌 细 胞 （ Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 、 Ｓ ＭＭＣ 一
能 够在 转 录后水 平抑 制靶 基 因 的表 达与 恶性 肿瘤 的
７ ７ ２ １ ） 生长 的抑制作 用及其 机制 。方 法
采用 Ｍ Ｔ Ｔ法检测
发 病 机制相 关 Ｊ 。 目前 ， 蜂 毒 素对于 ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ Ｒ Ｎ Ａ表
蜂 毒素对 Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２和 Ｓ ＭＭＣ － ７ ７ ２ １细胞增殖 的抑制 作用 ， 实 时
定量 Ｐ Ｃ Ｒ检测 细胞 中 ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ Ｒ Ｎ Ａ 一 ２ ０ ３ （ ｍ ｉ ｒ 一 ２ ０ ３ ） 以及 Ｐ １ Ｋ ３ Ｃ Ａ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表 达变 化 ， Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 法 检测磷 脂酰 肌醇 ３ 一 激 酶 （ Ｐ Ｉ ３ Ｋ ） 、 磷 酸化蛋 白激 酶 Ｂ（ Ｐ — Ａ Ｋ Ｔ ） 的表 达变 化 ， 瞬时转 染
技术 有 限公 司 ） ； Ｔ Ｒ Ｉ ｚ ｏ ｌ 、 Ｌ ｉ ｐ ｏ ｆ ｅ ｅ ｔ ａ ｍｉ ｎ ｅ ２ ０ ０ ０ Ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｅ ｅ — ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ｅ ａ ｇ ｅ ｎ ｔ（ 美国 Ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ｇ ｅ ｎ公 司 ） ； Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍ ｏ Ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ Ｒ Ｔ ． Ｐ Ｃ Ｒ ｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｉ ｓ ｋ ｉ ｔ （日本 Ｔ ａ Ｋ ａ Ｒ ａ公 司 ） ； ＭＴ Ｔ 、 Ｄ Ｍ． Ｓ Ｏ（ 美国Ｓ ｉ ｇ ｍａ 公司 ） ； 小 鼠抗 — ａ ｃ ｔ ｉ ｎ抗 体 、 辣 根过 氧化 物 酶标记 的二抗 （ 北京 中杉 金 桥生 物 技 术 有 限