哺乳动物原始卵泡生长启动的调控

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农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology2006,14(4):618~624
*基金项目:广东省自然科学基金(No.05012364)资助。

作者简介:田允波(1965~),男,教授,主要研究方向:动物繁殖生理与胚胎生物技术。

E-mail:<tyunbo@>.收稿日期:2005-08-30接受日期:2005-11-14·综述·
哺乳动物原始卵泡生长启动的调控*
田允波1,3,曾书琴1,陈学进2,施振旦3
(1.仲恺农业技术学院动物科学系,广州510225;2.上海市发育生物学重点实验室,上海200025;
3.华南农业大学动物科技学院,广州510642)
摘要:哺乳动物卵泡发育是一个被众多内分泌、旁分泌和自分泌因素精确调控的生理过程。

原始卵泡生长启动可能受卵巢内在因子,如生长因子等的调控,而不是通常认为的FSH(促卵泡素);原始卵泡细胞连接和原始卵泡的细胞(卵母细胞和颗粒细胞)之间相互作用也参与调节原始卵泡的生长启动。

关键词:哺乳动物;原始卵泡;生长
中图分类号:S185S188文献标识码:A文章编号:1006-1304(2006)04-0618-07
Regulation of Initiation of Primordial Follicle Growth in Mammals
TIAN Yun-bo1,3,ZENG Shu-qin1,CHEN Xue-jin2,SHI Zhen-dan3
Mammalian ovarian folliculogenesis is a complicated physiological process regulated by many endocrine,paracrine and autocrine factors.The initiation of primordial follicle growth is controlled by ovarian paracrine factors,such as EGF(epidermal growth factor)of other growth factors,but not by FSH(follicle stimulating hormone);the junctions of primordial follicles and the intercellular
communication between oocyte and granulosa cell are involving in the initiation of primordial follicle
growth.
mammal;primordial follicle;growth
哺乳动物胚胎期或新生卵巢内含有大量原始卵泡,如:出生时小鼠约为1万个,人和家畜约200万个(Gosden和Telfer,1987)。

由大量原始卵泡组成的卵泡库是雌性生殖资源储备库,卵母细胞就是从原始卵泡库中持续、小批量地起始生长,并不停地有少量发育完全的成熟卵母细胞恢复、完成减数分裂,最终排卵。

雌性个体一生的生殖活动中,原始卵泡库中能够成熟排卵的仅0.1%~0.2%。

近年来,胚胎生物技术发展迅速,对高质量卵母细胞需求量日益增加。

探索卵母细胞/卵泡在体内和体外发育的调节机制,成了当前畜牧繁殖和生殖生物学研究中的热点。

原始卵泡是卵巢中卵子贮存的基本单位,在卵泡生长启动中,颗粒细胞的分化和生长是原始卵泡生长启动的关键(Eppig and O'Brien,1996;Wandji .,1996)。

而在人类最后一组原始卵泡的启动迟到50年后,但为什么一些原始卵泡能启动生长,而其邻近的卵泡却保持静止。

迄今为止,未发现原始卵泡细胞上有任何激素受体,对原始卵泡的周期性启动和选择生长机制仍是个谜。

20世纪60年代英国学者曾提出“first in”and“first out”的论点,认为先迁入生殖嵴形成的卵泡先开始启动生长,但未得到证实。

Eppig和O'Brien(1996)发现小鼠原始卵泡中的卵母细胞在离体条件下可以生长,为进一步研究原始卵泡生长启动的基因调控提供了重要思路。

哺乳动物出生前或出生后不久,一些原始卵泡在卵巢内因子以及未知的调控机制作用下启动生长,离开静止期向初级卵泡转化,进入生长成熟周期,即原始卵泡的启动募集,没有被募集的卵泡继续维持在静息状态直至凋亡。

卵泡被启动募集后,卵母细胞便开始成熟分裂,并静息于MⅠ期,卵母细胞的生长是卵泡启动募集的标志(Rombauts., 1998)。

研究表明,许多自分泌和旁分泌因素,以及原
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始卵泡细胞连接、原始卵泡细胞之间相互作用参与调节原始卵泡的生长启动。

本文综述这些因素在原始卵泡生长启动中的调节作用。

1原始卵泡的生长启动不受下丘脑-垂体轴的直接调节
原始卵泡的发育启动与LH(inteinizing bor-mone)无关。

LH受体()的mRNA在仔鼠出生后5d、仔兔出生后7d,卵巢上出现次级卵泡时才可检测到(O'shanghnessy.,1997);在发情期的牛和兔,基因在卵泡发育到有腔卵泡和卵泡内膜形成以后,才开始在卵泡内膜细胞中转录其mRNA,在颗粒细胞中的转录更晚,这说明原始卵泡的发育启动与LH无关,至少LH对腔前卵泡的发育没有直接的作用。

至于FSH(促卵胞素)受体(FSHR),它存在于早期腔前卵泡的颗粒细胞中,人们熟知的是FSHR1受体(Babu.,2001)。

Adriaens.(2004)证实,一种新的剪接变体FSHR3的表达比率也与卵泡的分化呈正相关。

出生不足3d的小鼠就可检测到尚未达到全长的FSHR转录物,新生5d的小鼠该转录物已达全长,这表明最初的mRNA的发展是不依赖于促性腺激素的。

但当卵泡形成腔状结构时(出生10~15d)卵泡的发育开始依赖于FSH 的存在,FSH可刺激颗粒细胞增殖,刺激芳香化酶的活性,诱导LHR表达。

原始卵泡的发育不需要FSH的作用。

因为垂体切除的大鼠、小鼠的原始卵泡也可被启动募集,并发育为有腔卵泡,而且原始卵泡中没有功能性的FSH 和LH受体存在,它们到次级卵泡阶段才出现,因而FSH和LH不可能直接启动原始卵泡的发育。

在不添加FSH和血清的条件下,体外培养的鼠、兔、牛和羊的卵泡均可进入生长池(growing pool),发育到有腔卵泡早期或晚期(Braw-Tal,1997);使用性腺机能退化鼠和通过切除兔、羊的垂体以除去血中的FSH的实验也证实,原始卵泡可在缺乏促性腺激素的环境中发育到次级卵泡期(O'shanghnessy., 1997)。

在垂体切除的小鼠中,虽然原始卵泡可发育至有腔卵泡,但处于静息池(resting pool)中没有发育的原始卵泡数明显增加;若注入外源FSH、LH或hCG(human chorionic gonadotrophin),则处于生长池中的原始卵泡数显著增加。

在转hLH(human luteinizing hormone)的转基因小鼠中,原始卵泡相对较早地进入生长池,而且数目增加(Flaws., 1997)。

因此推测,内源性的cAMP活化通路在原始卵泡的启动募集中起重要作用(Mayerhofer., 1997),因为FSH,LH和hCG是通过cAMP通路发挥功能的。

新生大鼠的卵巢注入血管活性肠肽(VIP)和去甲肾上腺素后可激活cAMP通路,从而提高cAMP 合成量,诱导卵巢出现mRNA,卵泡对FSH 的敏感性增强,使原始卵泡的发育期提前(Mayer-hofer.,1997);仓鼠中,FSH也可诱导胚胎期卵巢内前体卵泡细胞分化形成原始卵泡(Roh., 2000)。

表明原始卵泡的发育可能受到卵巢髓质中的神经递质调节。

但Braw-Tal and Yossefi(1997)在牛中模拟Mayerhofer.(1997)的实验,却发现VIP 虽可增加cAMP含量,但并不能诱导牛早期腔前卵泡内出现功能性FSHR,卵巢内FSHR可能尚未和腺苷酸环化酶建立功能性偶联。

可见,虽然不同动物腔前卵泡获得对促性腺激素的反应能力均发生在早期卵泡发育阶段,但在不同的动物(尤其是在啮齿类和大家畜间)其发生时相可能存在一定差异。

在原始卵泡的发育过程中,颗粒细胞开始迁移、增值,并发生形态上的变化(Mayerhofer., 1997)。

颗粒细胞转变为立方形是原始卵泡发育为初级卵泡的标志,伴随此过程,卵母细胞开始成熟分裂,形态也发生变化。

据此推测原始卵泡的发育与卵母细胞的成熟分裂有关,并认为首先开始成熟分裂的卵母细胞的卵泡亦先发育并成熟排卵,预测这些卵泡主要位于卵巢的皮质-髓质结合区,其启动的机制可能与神经递质有关(Flaws.,1997)。

2卵巢局部生长因子
原始卵泡的生长发育从胚胎时期开始一直持续到初情期前,生长速度缓慢,是一个不间断的持续生长过程(van Wezel,1996),启动卵泡生长的因子来自卵巢本身合成的因子,与卵巢外因子无关(Pic-ton,2001)。

2.1原始卵泡生长抑制因子
抗谬勒氏管激素(AMH)属于转化生长因子超家族成员,在出生后小鼠和人卵巢的颗粒细胞内产生,是目前发现的惟一原始卵泡生长抑制因子。

早期研究表明,AMH可影响卵巢的内分泌功能。

AMH可抑制绵羊胚胎卵巢的芳香化酶活性,进而抑制雌激素的合成;大鼠胚胎卵巢体外培养时也发现相同结果。

颗粒细胞体外培养实验进一步揭示AMH可抑制芳香化酶基因的表达,同时下调LHR的含量。

基因缺失小鼠出生前原始卵泡形成明显异常,但是出生后大量原始卵泡迅速开始生长转化,明显多于基因正常小鼠;到生后13个月时,基因缺失小鼠卵巢内已经见不到原始卵泡,但出现大量发育到晚期的腔前卵泡和有腔卵泡。


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体外培养新生小鼠卵巢时,加入AMH后原始卵泡生长减少,卵泡募集受阻,而卵巢内抑制素产生增加(Durlinger.,2002)。

因此推测,AMH通过调节卵巢局部抑制素产生,来阻止原始卵泡生长启动。

2.2原始卵泡生长促进因子
2.2.1c-Kit和c-Kit配体(KL)Kit是基因编码的一个受体蛋白,属于域型跨膜酪胺酸激酶受体。

其配体由基因编码,包括KL1和KL2两种膜结合形式。

两种KL均可被进一步降解,生成一种可溶性的KL。

Kit/KL参与卵泡早期发育中的许多事件,如原始卵泡生长的启动、卵泡膜细胞和卵泡腔的形成等,对出生前后胎儿卵巢上的原始卵泡存活十分重要(Reynaud.,2000)。

小鼠卵巢原始卵泡和生长卵泡的卵母细胞中均可检测到mRNA,其表达不依赖于卵母细胞是否表达GDF-9和颗粒细胞是否表达KL。

同时卵巢膜间质细胞中也可检测到大量mRNA。

新生小鼠从产后1~12d通过每天注射ACK2阻断Kit/KL的相互作用,发现原始卵泡的始动募集被完全阻断。

体外添加KL或其阻断剂ACK2培养新生小鼠卵巢发现(Parrott.,1999),KL可促进原始卵泡始动生长,而抗体ACK2可阻断自发的或KL诱导的原始卵泡的生长起始。

可见,Kit/KL可能是调节原始卵泡启动生长,并进一步发育越过初级卵泡阶段的一个关键因素。

2.2.2碱性成纤维生长因子(bFGF)bFGF是一类直接促进原始卵泡募集的生长因子,可促进猪、牛、人、猫和啮齿类的颗粒细胞增殖,同时颗粒细胞分泌的bFGF经旁分泌途径,影响卵泡内膜细胞血管的发生。

bFGF主要存在于原始和初级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞,但在人原始卵泡内主要见于卵母细胞,而颗粒细胞内未见表达;bFGF受体表达于卵泡的颗粒细胞(Amamoto.,1997)。

体外培养新生小鼠卵巢发现,bFGF主要表达在原始和初级卵泡的卵母细胞,调节卵泡颗粒细胞生长、增殖、分化和凋亡;经bFGF作用后的新生小鼠卵巢原始卵泡减少,初级卵泡增加,且这种作用可被bFGF受体拮抗剂部分抑制(Nilsson.,2001)。

因此认为卵母细胞产生的bFGF作用于周围的颗粒细胞,促进原始卵泡生长和向初级卵泡转化。

2.2.3表皮生长因子(EGF)现有的研究,如增殖细胞核抗原(PCNA)表达、卵母细胞的直径变化、以及3H-胸腺嘧啶掺入等发现,颗粒细胞的生长启动先于卵母细胞,提示颗粒细胞的变化可作为卵泡生长启动信号,也说明颗粒细胞的分化和生长是原始卵泡启动和生长的关键,而颗粒细胞的分化可能与卵巢基质分泌的EGF作用有关。

EGF可促进静息细胞表达PCNA,导致细胞周期改变,促进细胞增殖,原始卵泡进入生长相。

Kristina.(2002)和Kezele (2002)研究证实,EGF在新生大鼠卵巢原始卵泡生长起始过程中有重要作用,它能促进颗粒细胞增殖分化。

对大鼠原始卵泡在体内(Kristina., 2002)和体外(王海滨等,2001)的研究发现,EGF能刺激原始卵泡的早期生长和类固醇分泌。

在研究EGF对新生大鼠卵泡生长启动中的作用时发现(柳海珍和刘以训,2000),EGF对颗粒细胞分化的影响远早于FSH。

给大鼠注射EGF2d后,相对于注射FSH组,卵巢中明显有较多的卵泡颗粒细胞开始增殖,并由扁平变为立方形;到第4天时颗粒细胞的增殖状况和层数更加明显;而FSH对卵泡启动在早期无明显作用,直到第7天颗粒细胞才有明显增殖现象。

提示,EGF受体在颗粒细胞上的分化可能早于FSHR。

通过原位杂交证实,mRNA 在出生后第6天的某些卵泡颗粒细胞中才有表达,随后表达量逐渐增加,这也说明为什么FSH迟于EGF,只有到生后第7天才对某些卵泡颗粒细胞增殖有显著刺激作用。

这表明可能是EGF,而不是FSH对原始卵泡的生长启动发挥作用。

2.2.4干细胞因子(SCF)SCF是最早发现的促进原始卵泡募集的生长因子,它通过相应的受体调节原始卵泡的生长转化,在原始卵泡的募集过程中发挥重要作用。

SCF在小鼠胚胎的生长期原始卵泡的颗粒细胞产生,而卵母细胞则表达相应的受体;SCF和基因突变小鼠卵巢原始卵泡形成无明显异常,但其生长转化发生明显障碍(Drian-court,2000)。

体外培养4日龄新生小鼠卵巢同样发现,SCF显著增加进入募集周期的原始卵泡数量,且这种促进作用能被SCF拮抗剂抑制(Parrott 和Skinner,1999)。

因此推测,原始卵泡颗粒细胞产生的SCF直接作用于卵母细胞受体,促进原始卵泡的生长转化。

mRNA及其蛋白在妊娠13~21周人胎儿卵原细胞和原始卵泡的卵母细胞膜以及胞浆内也表达(Robinson.,2001)。

2.2.5白血病抑制因子(LIF)LIF主要表达于原始卵泡、初级卵泡的颗粒细胞和腔前卵泡的卵母细胞(Nilsson.,2002)。

LIF结合到由LIF受体亚单位和gpl30组成的受体复合体,参与调节多种组织细胞的生长、增殖以及凋亡。

体外培养成人晚期卵泡颗粒细胞能够产生LIF,而LIF受体复合体在人腔前卵泡的卵母细胞表达。

对新生小鼠卵巢体外培养发现(Dissen.,2001),LIF促进原始卵泡向初级卵泡转化,这种作用可被LIF拮抗剂部分抑制;LIF还能诱导颗粒细胞表达SCF,而对原始卵泡的颗粒细
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胞生长增殖没有直接影响。

由此推测LIF可能通过促进颗粒细胞产生SCF,间接启动原始卵泡的募集。

2.2.6神经生长因子(NGF)即促神经生长素(NT),是一类促进神经系统生长分化的细胞因子,它通过高亲和受体Trk和低亲和受体p75发挥作用。

研究发现,基因缺失小鼠卵巢初级和次级卵泡显著减少,而原始卵泡无明显变化;进一步分析颗粒细胞分裂活性显示,基因缺失小鼠颗粒细胞增殖显著降低。

因此推测NGF可能通过促进颗粒细胞增殖来启动原始卵泡的生长(Dissen.,2001)。

研究NGF 及其受体在妊娠中期人胎儿卵巢中的表达时发现(Anderson.,2002),mRNA主要表达在卵原细胞和原始卵泡的颗粒细胞,而卵母细胞表达相对较少;免疫组化发现NT4蛋白主要表达在颗粒细胞,Trk受体蛋白见于各个发育阶段的卵母细胞,提示在人原始卵泡发育关键时期,卵母细胞与体细胞之间存在着NGF介导的信息传递途径,并且很可能对原始卵泡的生长发动起着非常重要的调节作用。

2.2.7生长分化因子-9(GDF-9)GDF-9属于转移生长因子-β(TGF-β)/激活素(activin)家族,可通过与丝氨酸-苏氨酸受体结合,激活MAPK系统而发挥活性(Hayashi.,1999)。

小鼠、大鼠和人初级卵泡中的卵母细胞都可表达GDF-9,但原始卵泡中的卵母细胞不表达GDF-9;在绵羊和牛中,GDF-9信号在原始卵泡阶段便出现(Vitt and Hsueh,2001),而GDF-9的受体为骨形成蛋白受体-Ⅱ,表达于颗粒细胞(Vitt,2002)。

GDF-9的调控早期卵母细胞发育,它既可直接促进颗粒细胞的增殖和分化,同时又可通过颉抗FSH对颗粒细胞的阳性作用,精确地调节颗粒细胞的增殖和分化。

GDF-9对卵泡发育作用的直接证据源于对基因缺失小鼠的研究。

基因缺失小鼠卵巢原始卵泡无明显异常,可以向初级卵泡生长转化,但发育停留在初级卵泡阶段,卵泡膜细胞缺乏,最终导致卵母细胞死亡(Albertini.,1996;Elvin.,1999)。

新生小鼠注射重组GDF-9(Vitt
,2000),10d后卵巢重量增加,初级卵泡和小腔前卵泡数量分别增加了30%和60%,原始卵泡数量减少了29%。

体外培养人卵巢经GDF-9作用后(Hreinsson.,2002),原始卵泡减少,初级和次级卵泡明显增加。

推测,GDF-9可能通过促进初级卵泡向腔前卵泡生长发育,间接影响原始卵泡募集过程。

Hayashi.(1999)在体外实验中发现GDF-9能促进早期初级卵泡的发育,而对原始卵泡的发育没有影响;而提高初级卵泡的发育进程,也可以使原始卵泡数进入生长池的数量增加(Hirshfield,1996)。

因此,也可能GDF-9诱导原始卵泡募集的作用,是通过促进初级卵泡的发育进程来实现的。

最近发现,体外培养条件下,GDF-9能够激活人和小鼠颗粒细胞转化生长因子信号途径蛋白Smad2,促进颗粒细胞分泌抑制素(Roh.,2003;Kaivo-Oja., 2003)。

目前,又在原始卵泡发现一种新的基因产物GDF-9β,又称骨形成蛋白-15(bone morphogenetic protein-15,BMP-15),可促进颗粒细胞的增殖(Mano-va.,1993;Tisdall,1997),并反向调节卵母细胞的生长(Laitinen.,1998;Dube.,1998)。

2.2.8胰岛素样生长因子(IGF)家族IGF家族包括IGF-Ⅰ,IGF-Ⅱ,Ⅰ型、Ⅱ型受体以及6种IGF结合蛋白(IGFBP)。

研究证实,IGF-Ⅰ可促进颗粒细胞和膜细胞的增殖和分化,同时介导雄激素促进卵泡生长和膜层细胞发育,雄激素通过促进原始卵泡卵母细胞表达IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ和IGF-Ⅰ受体参与原始卵泡生长起始过程。

将小鼠基因敲除后,发现IGF-Ⅰ能引起卵泡在无腔卵泡期或有腔卵泡早期停止发育,且不排卵,此类小鼠也没有青春期(Bachelot.,2002)。

提示IGFS可能对卵泡发生具有启动作用。

3原始卵泡细胞连接
组成原始卵泡的细胞(卵母细胞和颗粒细胞)之间建立了非常广泛的细胞连接,这些细胞连接参与卵泡细胞之间的信息传递和原始卵泡募集的调控。

细胞粘附对于细胞的生长分化起着非常重要的调节作用。

研究发现,粘附分子E-钙粘素(E-cad-herin)在原始卵泡和早期初级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞表达,随着原始卵泡生长发动,E-钙粘素首先在卵母细胞,随后在颗粒细胞表达消失;同样P-钙粘素(P-cadherin)表达于原始卵泡的颗粒细胞和卵母细胞,但是在腔前卵泡的卵母细胞减少或者消失(Machell.,2000;2002)。

钙粘素蛋白在原始卵泡的表达及其变化提示,E-钙粘素和P-钙粘素可能参与早期卵泡生长启动的调节。

连接蛋白(connexin,CX)是构成细胞间缝隙连接的主要成分和标志物。

CX43在原始卵泡不表达,但在初级、次级以及腔前卵泡的颗粒细胞表达;CX26出现在原始卵泡、初级和次级卵泡以及健康腔前卵泡的颗粒细胞及泡膜细胞(Ackert., 2001)。

进一步观察发现,连接蛋白亚单位在幼年和成年小鼠卵巢内的表达,并且从原始卵泡到排卵前卵泡各个阶段均有表达,而且不同亚单位出现在卵
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泡的不同部位,并与卵泡生长阶段有关。

因此,多数学者认为缝隙连接有可能对原始卵泡生长转化起调节作用。

4原始卵泡细胞之间相互作用
原始卵泡的细胞(卵母细胞和颗粒细胞)之间存在多种信息传递途径。

一类是以卵巢局部的活性因子为介质,通过旁分泌机制调节卵泡细胞之间相互作用,从而启动原始卵泡持续分批从静止状态进入生长成熟周期。

另外,原始卵泡细胞之间建立了多种类型的细胞连接,也是细胞之间相互传递信息的途径,同样参与调节原始卵泡的生长发动。

原始卵泡的细胞之间信息传递和调节是双向的。

卵母细胞通过产生细胞因子(如GDF-9、BMP 等)调节颗粒细胞生长分化;同样颗粒细胞通过SCF 等作用于卵母细胞,启动原始卵泡募集。

Eppig .,2002)将次级卵泡的卵母细胞取出植入到原始卵泡内,结果原始卵泡生长加速,卵泡颗粒细胞生长分化加快,而且卵母细胞发育正常,能够受精形成胚胎;提示卵泡细胞之间的相互作用对于原始卵泡生长发育非常重要,而且在这种相互作用过程中卵母细胞处于主导地位。

在体外培养小鼠卵泡细胞发现(Otsuka和Shimasaki,2002),卵母细胞产生BMP-15促进颗粒细胞表达SCF,而颗粒细胞产生的SCF反过来能够抑制卵母细胞表达BMP-15,二者之间形成负反馈调节系统。

表明不但细胞之间信息传递和调节是双向的、相互的,而且多种信息传递途径之间相互交叉,形成复杂的调节网络。

体外培养研究表明,将不成熟的卵母细胞与颗粒细胞分离培养,二者均不能生长;而共培养时,卵母细胞与颗粒细胞会自动形成间隙连结,这与它们在卵泡中的空间结构相似(Tsafriri,1997)。

在次级卵泡中的卵母细胞-颗粒细胞间隙连接处发现了间隙连接蛋白CX37,缺乏CX37的小鼠卵泡不能正常生长发育,虽然这些卵泡中的卵母细胞透明带和颗粒细胞形态都正常,但是卵母细胞-颗粒细胞间通讯被阻断,卵母细胞不能进行正常的成熟分裂,也不能调控颗粒细胞LHR、类固醇激素的合成以及颗粒细胞的堆积(Simon.,1997)。

5其它因素
Steel因子(steel factor)在被启动募集的原始卵泡颗粒细胞中高度表达,它的受体c-kit是一个酪氨酸蛋白激酶受体,属于胎盘来源的生长因子受体家族,卵母细胞和卵泡膜细胞都表达(Bedell., 1995)。

用点突变完全抑制小鼠Steel因子或基因的表达,卵泡的生长停止在初级卵泡阶段;若部分抑制Steel因子或c基因的表达,则有少量卵泡可发育至有腔卵泡,并发生排卵紊乱,卵母细胞没有受精能力(Bedell.,1995)。

对新生小鼠注入外源c-kit抗体后也发现卵泡发育紊乱(Yoshida., 1997)。

卵泡卵母细胞和颗粒细胞分泌的其它一些因子如pRb、WT1等也可能参与调节原始卵泡早期发育。

人类原始卵泡卵母细胞核内存在很强的pRb免疫染色活性,而前体颗粒细胞染色较弱;卵泡起始生长后卵母细胞pRb染色变弱,而颗粒细胞pRb染色增强。

推测卵母细胞核内高水平表达的pRb,可能诱导卵母细胞分泌抑制颗粒细胞生长的因子。

大鼠原始卵泡、初级卵泡和早期次级卵泡均存在WT1蛋白,并且在原始卵泡中表达量最高,随着卵泡的发育,其表达量开始降低,因此认为WT1是早期未成熟卵泡的标志。

WT1可抑制一些促进卵泡早期发育的因子如IGF及其受体的表达,并可和另一个肿瘤抑制基因产物P53协同抑制卵泡颗粒细胞的增殖,诱导细胞凋亡。

由此推测WT1可能对卵泡早期发育有抑制作用。

此外,卵母细胞分泌的一些因子如Bcl-X系列和WT-1、P53与Fas及其配体的作用相反,可抑制卵母细胞和颗粒细胞发生凋亡。

基因缺陷型小鼠原始卵泡数量显著减少,而高表达转基因小鼠原始卵泡贮存量显著增加(Flaws,1997),卵泡闭锁率显著降低。

5结语
原始卵泡的生长启动过程受诸多旁分泌和自分泌因子的影响,而且由卵母细胞、颗粒细胞和卵泡膜细胞构成的细胞间联系和通讯,对于卵母细胞的生长、成熟分裂以及卵泡的发育至关重要,这种微循环的稳定是卵泡发育所必需的。

目前对原始卵泡生长启动的机制还不完全清楚,所涉及的诸多因素在卵巢内细胞定位、发生时相以及相互作用仍未完全阐明,尚需进一步研究。

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