产云芝胞外多糖发酵工艺优化及抗氧化活性研究

＊ ＷＡＮＧ Ｊ ｉ ｚ ｈ ｏ ｎ ＥＮＧ Ｌ ｕ ｉ ｎ Ｃ ｈ ｕ ｎ ｉ ｎ － － ＸＵ － ｇ， Ｇ ｊ ｇ， ｐ ｇ
（ ， ， ） Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｅ ｏ ｆ Ｆ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｉ ｃ ａ ｌ Ｅ ｎ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ Ｚ ｈ ｅ ｎ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｏ ｆ Ｌ ｉ ｈ ｔ Ｉ ｎ ｄ ｕ ｓ ｔ ｒ Ｚ ｈ ｅ ｎ ｚ ｈ ｏ ｕ ４ ５ ０ ０ ０ ２， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ｇ ｇ ｇ ｇ ｇ ｙ ｇ ｙ ｇ
。 子实体 一 般 较 小 ， 无 柄， 呈覆瓦状排
列 。 云芝是 中 药 和 食 品 中 用 途 最 为 广 泛 的 真 菌 之 ， 具有健脾利湿 、 止咳平喘 、 清热解毒 、 抗肿瘤
收稿日期 ： ２ ０ １ １－０ ８－２ ２ ） ； ） 。 基金项目 ：郑州市科技计划项目 （ 郑州轻工业学院校博士基金项目 （ １ ０ Ｐ Ｔ Ｇ Ｇ ３ ３ ９； １ １ ２ Ｐ Ｐ Ｔ ＧＹ ２ ４ ９ ２ ０ １ ０ ０ ４ ２ ６ ， ： 作者简介 ：王吉中 （ 男， 河南周口人 ， 理学硕士 ， 讲师 ， 主要从事生物技术研究 。Ｅ－ｍ １ ９ ７ ５－ ） ａ ｉ ｌ ｗ ａ ｎ ｉ ｚ ｈ ｏ ｎ ７ ５＠１ ６ ３． ｃ ｏ ｍ ｇ ｊ ｇ ， ： 男， 河南焦作人 ， 工学博士 ， 教授 ， 主要从事生物技术研究 。Ｅ－ｍ １ ９ ７ ７－ ） ａ ｉ ｌ ｃ ． ． ｘ ｕ＠ｚ ｚ ｕ ｌ ｉ ． ｅ ｄ ｕ． ｃ ｎ ＊ 通信作者 ：许春平 （ ｐ
： Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｂ ｕ ｓ ｉ ｎ ｓ ｉ ｎ ｌ ｅ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｅ ｘ ｅ ｒ ｉ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ ｃ ｏ ｍ ｏ ｓ ｉ ｔ ｅ ｄ ｅ ｓ ｉ ｎ， ｔ ｈ ｅ ｏ ｔ ｉ ｍ ａ ｌ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｙ ｇ ｇ ｐ ｐ ｇ ｐ ｏ ｆ Ｃ ｏ ｒ ｉ ｏ ｌ ｕ ｓ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ ｆ ｏ ｒ ｗ ｅ ｒ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍ ｉ ｎ ｅ ｄ ａ ｓ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｌ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｓ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｌ ｔ ｏ ｎ ｅ ｐ ｙ ｐ ｐ ｙ ｐ ／ ／ ／ Ｈ Ｌ，ｍ ａ ｌ ｔ ｏ ｓ ｅ ５ ３． １ ２ ０ｇ Ｌ， ５， ｔ ｅ ｍ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ２ ８℃ ｓ ｈ ｅ ａ ｒ ｓ ｅ ｅ ｄ １ ５ ０ｒ ｍ ｉ ｎ．Ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ５． ８ ７ ０ｇ ｐ ｐ ｐ ， ／ ，Ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ Ｅ Ｐ Ｓ ｒ ｅ ａ ｃ ｈ ｅ ｄ ａ ｔ １ ０． ０ ９ ８ ２ｇ Ｌ． Ｆ ｕ ｒ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍ ｏ ｒ ｅ Ｐ Ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｐ ｙ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｔ ｏ ｒ ｅ ｍ ｏ ｖ ｅ ｔ ｈ ｅ ａ ｎ ｄ ｂ ｆ ｉ ｌ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ Ｓ ｅ ｈ ａ ｒ ｏ ｓ ｅ Ｃ Ｌ ６ Ｂｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｕ ｒ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｅ ｌ Ｓ ｅ ｖ ａ － － ｙ ｐ ｐ ｐ ｇ ｇ ２＋ ｔ ｏ ｒ ａ ｈ ． Ｔ ｈ ｅ ａ ｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｗ ａ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍ ｉ ｎ ｅ ｄ ｂ Ｐ ｈ ｅ ｎ ａ ｎ ｔ ｈ ｒ ｏ ｌ ｉ ｎ ｅ Ｆ ｅ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ － ｇ ｐ ｙ ｙ ｙ ， ａ ｓ ｓ ａ ． Ｔ ｈ ｅ ｏ ｌ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｎ ｏ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｏ ｆ ＯＨ ａ ｎ ｄ Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ ｒ ａ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ ． Ｔ ｈ ｕ ｓ ｙ ｐ ｙ ｙ ｙ ｔ ｈ ｅ Ｅ Ｐ Ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｃ． ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ ｍ ａ ｂ ｅ ｓ ｕ ｌ ｉ ｅ ｄ ａ ｓ ｏ ｎ ｅ ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ ｆ ｏ ｏ ｄ ． ｙ ｐ ｐ ｙ ： ， ， Ｋ ｅ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ Ｃ ｏ ｒ ｉ ｏ ｌ ｕ ｓ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ ｃ ｏ ｍ ｏ ｓ ｉ ｔ ｅ ｄ ｅ ｓ ｉ ｎ， ａ ｎ ｏ ｌ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｓ － ｐ ｇ ｐ ｙ ｙ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ 又 名 彩 绒 革 盖 菌、 杂 Ｃ ｏ ｒ ｉ ｏ ｌ ｕ ｓ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ） 云芝 （ 、 ， ， 色云芝 彩 绒 菌 和 瓦 菌 等 隶 属 非 褶 菌 目 多 孔 菌 科， 栓菌属 一
产云芝胞外多糖发酵工艺优化及抗氧化活性研究
王吉中 ， 耿卢婧 ， 许春平 ＊
（ ） 郑州轻工业学院 食品与生物工程学院 ， 河南 郑州 ４ ５ ０ ０ ０ ２
摘要 ：试验对云芝发酵生产胞外多糖的 培 养 基 进 行 优 化 并 对 其 抗 氧 化 活 性 进 行 研 究 ， 通过单因 素试验和中心组合设计并用 Ｄ 确定培养最优条件为 ｅ ｓ ｉ ｎ Ｅ ｘ ｅ ｒ ｔ ７ ． ０ 软件对实验结果进行分析 ， － ｇ ｐ ／ ／ 氮源 ５ 碳源 ５ 起始 ｐ 温度 ２ 搅拌发酵转速 １ ． ８ ７ ０ｇ Ｌ 多价胨 ， ３ ． １ ２ ０ｇ Ｌ 麦芽糖 ， Ｈ 值为 ５， ８℃ ， ５ ０ ／ ， ／ 多糖得率为 １ 对发酵多糖进行提取分离和脱蛋白处理得到 Ｅ 然后用邻二 ｒ ｍ ｉ ｎ ０ ． ０ ９ ８ ２ｇ Ｌ； Ｐ Ｓ， 结 果 表 明， 氮菲法和 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ 法测定了 Ｅ Ｐ Ｓ 的抗氧化活性 ， Ｅ Ｐ Ｓ 对 ·ＯＨ 自 由 基 和 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ· 自 由 。 基均具有较高的清除率 ， 且具有较好的量效关系 ， 说明云芝 Ｅ 具有较强的抗氧化活性 Ｐ Ｓ 关键词 ：云芝 ； 胞外多糖 ； 中心组合设计 ； 抗氧化活性 （ ） 中图分类号 ： ＴＱ ９ ２ 文献标志码 ：Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ３－１ ６ ８ ９ ２ ０ １ ２ ０ ７－０ ７ ５ ２－０ ７

王吉中 ， 等： 产云芝胞外多糖发酵工艺优化及抗氧化活性研究
］ ４－５ ， 具有多种药理 和 生 理 功 能 ［ 从云芝子实体中提
取的多糖均具有极 强 烈 的 抑 制 癌 细 胞 活 性 ， 抗氧化
６］ ， 活性和免疫 调 节 功 能 ［ 是 良 好 的 免 疫 增 强 剂， 可
然后用苯酚硫酸法测定发酵 ｍ Ｌ 蒸 馏 水 溶 解 沉 淀； ／ 。 液中多糖质量浓度 （ Ｌ） ｇ 在碳源为 １ ． ２ ． ２ 培养 基 及 培 养 条 件 优 化 氮 源 ： ／ 的 条 件 下， 实验选择的氮源有大豆 葡萄糖 （ ３ ０ｇ Ｌ） 粉、 多价胨 、 蛋 白 胨、 酵 母 粉、 牛 肉 膏、 胰 蛋 白 胨、 硝 ／ 酸钠 、 硫酸铵和尿素等共 ９ 种 ， 质量浓度为 ３ｇ Ｌ发 ， 酵培 养 ８ｄ 测定不同氮源发酵条件下的菌丝和 确定发酵最佳氮源 。 Ｅ Ｐ Ｓ 含量 ， ／ 碳源 ： 在氮源为多价胨（ 质 量 浓 度 为 ３ｇ 的 Ｌ） 条件下 ， 实验选择 木 糖 、 果 糖、 葡 萄 糖、 蔗 糖、 麦芽糖 ／ 和山梨醇等 ６ 种 材 料 作 为 碳 源 ， 质量浓度为３ ０ｇ ， 培养 ８ｄ 确定发酵最佳碳源 。 Ｌ， 无机盐 ： 在氮源为 多 价 胨 和 碳 源 为 麦 芽 糖 的 条 实验选择的无 机 盐 有 磷 酸 二 氢 钾 、 硫 酸 镁、 氯 件下 ， 化钠 、 氯化钙 、 硫酸亚 铁 和 氯 化 锰 等 共 ６ 种 ， 浓度为
１ ． １ 材料与设备 云芝菌株为作者所在试验室保藏 。 ／ ／ 固体培养基 ： 葡萄糖３ 酵 母 粉 ３ｇ ０ｇ Ｌ， Ｌ， ２ ／ ／ 基 础 培 养 基： 葡萄糖３ 酵母粉３ ｄ Ｌ 琼脂 ； ０ｇ Ｌ， ｇ ／ ／ ／ 改良 Ｐ 葡萄糖 １ Ｌ； Ｄ Ａ 培养基 ， ２ ５ ０ｇ Ｌ 土豆 、 ０ｇ ｇ ／ ： 蛋白胨 ４ｇ 液体种子培养基 （ 基础培养基 ） 葡 Ｌ、 Ｌ； ／ ／ 蛋白胨 ３ｇ 萄糖 ３ ０ｇ Ｌ， Ｌ。 上海福玛实验设备 ＱＲ Ｃ ２ ０ ０ 恒温振荡培养箱 ： － 有限公司产 品 ； 苏泰集团 ＳＷ－ Ｃ Ｊ ２ Ｆ Ｄ 超 净 工 作 台： － 产品 ； 上海沛欧 ＭＥ Ｔ Ｔ Ｌ Ｅ Ｒ ４ Ｅ ２ ０ ０ 电 子 分 析 天 平： 分析仪器有限公司产品 ； Ｓ Ｐ Ｘ １ ６ ０Ｂ ２ 恒温培 养 箱 ： － － 上海福 玛 实 验 设 备 有 限 公 司 产 品 ； Ｒ Ｅ ５ ２ ＡＡ 旋 转 － 浓缩仪 ： 上海亚荣生化仪器厂产品 。 １ ． ２ 实验方法 １ ． ２ ． １ 发 酵 时 间 的 确 定 使 用 直 径 ０ ． ５ｃ ｍ 的打 孔器 ， 从固体平板培 养 基 上 取 下 两 片 位 于 菌 落 边 缘 的菌 体 ， 接种于液体种子培养基中（ ２ ５ ０ｍ Ｌ 三角 ， ／ 瓶， 在２ ５ ０ｍ Ｌ 培 养 液） ６ ℃， １ ５ ０ｒ ｍ ｉ ｎ条件下培 ； 然后以质量分数 ４％ 的接种量将种子培养液 养 ５ｄ 接种于基础培养基 中 培 养 ， 每两天测定一次菌丝和 以确定最佳发酵时间 。 Ｅ Ｐ Ｓ 含量 ， （ ／ ／发 酵 菌丝质量 浓 度／ Ｌ） ＝菌丝干质量（ ｇ ｇ） 。 液体积 （ Ｌ） 取 一 定 体 积 的 发 酵 液， 抽滤 Ｅ Ｐ Ｓ 含量的 计 算 ： 菌丝 得 到 的 滤 液， 浓缩后加入４倍体积的无水乙 ／ ， 醇， 用２ ４ ℃ 过 夜 。１ ０ ０ ０ ０ｒ ｍ ｉ ｎ离心１ ０ｍ ｉ ｎ ５ ０
Ｆ ｅ ｒ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｐ ｏ ｌ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｙ Ｃ ｏ ｒ ｉ ｏ ｌ ｕ ｓ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ ａ ｎ ｄ Ｉ ｔ ｓ Ａ ｎ ｔ ｉ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｎ ｔ Ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ
［ ］ ２－３ ［ １］
其中最主 等功能 。 云芝中含有 多 种 生 理 活 性 成 分 ， 要的成分之一就是云芝多糖 。 云芝多糖相 对 分 子 质 量 在 １ 是富含 ０ 万 以 上， ） 糖苷键的葡聚糖 ， 同时含有甘露糖 、 木糖 、 半 １， ３ －（ β ［ １］ 乳 糖、 鼠 李 糖 和 阿 拉 伯 糖 。 研 究 发 现， 云芝多糖
云芝多糖同时具有 提高动物机体 Ｉ Ｍ 的量等作用 ； ｇ 保肝 护 肝 作 用 ， 可 显 著 降 低 血 清 转 氨 酶， 对肝组织 人们对 病变和肝坏死有明 显 的 修 复 作 用 。 近 年 来 ， 云芝子实 体 多 糖 的 提 取 方 法
［ ７］
和功来自百度文库已进行了大
量 的 研 究， 但就发酵云芝生产胞外多糖（ 和 Ｅ Ｐ Ｓ） 作者利用中心 Ｅ Ｐ Ｓ 功能及应用方面 的 研 究 还 很 少 ， 组合设计试验 探 寻 云 芝 发 酵 生 产 Ｅ Ｐ Ｓ的培养基配 并对 Ｅ 为大规模发酵生 方， Ｐ Ｓ 生理 活 性 进 行 初 探 ， 产云芝 Ｅ Ｐ Ｓ 及其 在 医 药 食 品 行 业 中 的 进 一 步 应 用 提供理论基础 。