食源性沙门菌检测方法的研究
食品中沙门氏菌和副溶血性弧菌污染状况的调查与分析
食品中沙门氏菌和副溶血性弧菌污染状况的调查与分析摘要：考察江苏地区181份高危食品（包括肉制品、熟食制品、水产品、蛋制品）中沙门氏菌和副溶血性弧菌的污染与分布情况。
调查结果显示：181份食品中，肉类食品108份，检出沙门氏菌4株，均在生畜禽肉类中检出。
49份生制水产类食品中检出副溶血性弧菌15份，检出率为30.6%。
针对两菌的污染状况进行分析，为寻找可能引起食源性疾病的重点食品，开展食品安全研究和控制食品市场食源性疾病的发生提供技术依据。
关键词：沙门氏菌副溶血性弧菌污染状况沙门氏菌（salmonella）是一种常见的病原菌，作为温血和冷血动物的肠道菌，分布范围十分广泛，它经污染食品传播，能在人类肠道中迅速繁殖，侵入肠粘膜组织，产生肠毒素，导致发热、腹痛、腹泻等全身症状，严重者出现败血症，由沙门氏菌引起的食物中毒一直占世界食物中毒病例前列。
1998年以来国家食源性疾病监测网的数据显示，副溶血性弧菌（vibrio parahaemolyticus， vp）引起食物中毒的发生规模及人群暴露规模已经超过沙门氏菌，高居微生物性食物中毒首位。
考虑到江苏省某些沿海沿江城市水产品中副溶血性弧菌危害的潜在性，因此同时选择沙门氏菌和副溶血性弧菌作为主要研究对象，考察其在我省地区食品中的污染和分布情况，为了解其在居民主要消费食品污染的本底情况，寻找可能引起食源性疾病的重点食品，为开展食品安全研究和控制食品市场食源性疾病的发生提供技术依据。
1、材料与方法1.1样品来源生肉类、蛋制品类采集自我省大型集贸市场、个体销售点及大型超市；散装熟食制品类采集自个体熟食销售点及大型超市熟食柜台；水产类包括生鲜水产品、冷冻水产品及水产制品类采集自水产品批发市场及大型超市。
1.2材料干燥培养基均使用北京陆桥技术有限公司产品。
沙门氏菌及弧菌显色培养基为郑州博赛生物技术研究所产品。
诊断血清为兰州生物制品研究所产品。
1.3方法1.3.1沙门菌检测参照gb 4789.4—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》。
食源性致病菌快速检测方法研究报告
食源性致病菌快速检测方法研究报告摘要】目的应用酶联免疫吸附实验（ELISA）快速检测奶类及肉类制品中沙门菌。
方法样品经增菌后，用ELISA法及国标法对样品中的沙门菌进行初步检测，并比较ELISA法检测结果与国标法灵敏性、特异性、符合率。
结果检测200份奶类制品和肉制品，经ELISA法检测阳性率为8.3%，国标法阳性率为6.7%。
ELISA法敏感性、特异性分别为100%、97%，与国标法符合率达99.3%。
结论 ELISA法可快速、方便的对食品中沙门菌的污染情况进行初步检测，灵敏度高、特异性好，与国标法符合率高。
适用于食品中沙门菌的初步检测。
【关键词】奶制品肉制品沙门菌 ELISA沙门菌为常见的引起食源性疾病爆发的病原菌，在我国微生物性食物中毒中一直位居首位，而受沙门菌污染的奶、肉制品为造成人类感染的主要来源，因此沙门菌一直为医疗卫生、食品卫生及商检部门重点检验对象之一[1]。
本研究采用ELISA法检测奶、肉制品中沙门菌，并与国标法进行比较研究，现报道如下：1 材料与方法1.1实验材料奶、肉制品分别来自本市8家不同超市，包括70份奶及奶制品样本，60份肉及肉制品样本。
取样均采取随机抽样的方法进行。
每份样品250ml或250g，经无菌包装后置冷链保存送实验室检测。
缓冲蛋白胨水，氯化镁孔雀绿增菌液，四硫酸钠煌绿增菌液，亚硒酸盐胱氨酸增菌液，亚硫酸铋琼脂，DHL琼脂，HE琼脂，WS琼脂，SS琼脂，三糖铁琼脂，蛋白陈水、靛基质试剂，尿素琼脂（pH7.2)，氰化钾（KCN）培养基，氨基酸脱梭酶试验培养基，糖发酵管， ONPG培养基，半固体琼脂，丙二酸钠培养基，沙门氏菌因子血清。
均按国标相关规定进行。
ELISA相关试剂均购自试剂公司。
1.2实验方法样品按国标法相关规定预先增菌。
样品处理后于36°C培养4h，转种于100ml氯化镁孔雀绿增菌液中，42°C18-24h，另取10ml转种于亚硒酸盐胱氨酸增菌液中，36°C18-24h。
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准主要包括以下步骤：
1.样品采集：从待检测的食品中采集适量样品，确保样品的代表性。
2.样品处理：将采集的样品进行适当处理，如破碎、研磨等，以便后续的
检测操作。
3.增菌培养：将处理后的样品接种到选择性培养基中，进行增菌培养。
选
择性培养基可以抑制其他微生物的生长，促进沙门氏菌的增殖。
4.分离培养：将增菌培养后的样品划线接种到鉴别培养基上，进行分离培
养。
鉴别培养基可以进一步筛选出沙门氏菌，并对其进行鉴别。
5.生化鉴定：对分离培养得到的沙门氏菌进行生化鉴定，以确定其是否为
沙门氏菌。
常用的生化鉴定方法包括API 20E、三糖铁试验等。
6.血清学鉴定：对生化鉴定为沙门氏菌的菌株进行血清学鉴定，以确定其
具体血清型。
常用的血清学鉴定方法包括玻片凝集试验、试管凝集试验等。
7.药敏试验：对分离得到的沙门氏菌进行药敏试验，以确定其对不同药物
的敏感性，为临床治疗提供参考。
需要注意的是，食品沙门氏菌测试方法标准可能因不同国家和地区而有所差异。
因此，在实际操作中，应根据当地的标准和法规进行相应的调整和操作。
食品中沙门氏菌快速检测方法论文
食品中沙门氏菌的快速检测方法【关键词】沙门氏菌；微生物；快速检测技术【中图分类号】r15 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2013）06-0524-01沙门氏菌为革兰氏阴性无芽胞杆菌，在自然界中分布广泛，寄生在人类和动物的肠道内，对营养要求不高，耐胆盐，对外界的抵抗力较强。
该菌有200多种，致病的只占少数，如伤寒、副伤寒菌。
引起食物中毒或败血症，如鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等十余种，沙门氏菌血清型繁多，已知的就有2500多个，而且几乎所有的沙门氏菌都会污染食物引起发病，是人畜共患的肠道病原菌[1]。
沙门氏菌中毒常常是大面积的，致病速度快，给人类健康带来极大威胁。
繁杂的各类生化反应型，使常规检验程序复杂繁琐、耗时费力，不仅给检验部门带来沉重的负担，而且还使产品运转和仓贮的时间延长，费用增加。
提高检测技术是有效控制该菌的重要手段，尤其是大面积普查时更需要快速简便的检测方法。
近年来，特殊培养基和分子生物学方法如聚合酶链式反应（pcr）等在沙门氏菌的检测上已得到较好应用[2]，尤其是分子生物学方法和其他一些快速检测手段的配合使用，大大缩短了检测时间。
1 特殊培养基的使用沙门菌传统的检测方法是先采用选择性培养基增菌，然后分离培养、生化反应和血清学鉴定等，检验程序十分复杂，且肠杆菌科细菌间的生化反应多有交叉。
需要4天～7天才能完成，传统的检测方法检测周期长，所需试剂繁多，费时。
因此传统的检测方法的快速、敏感与特异性等方面有较大的局限性。
随着分子生物学技术的快速发展，酶联免疫吸附技术（elisa）、核酸杂交技术、核苷酸序列分析（16srdna）测序及聚合酶链式反应（pcr）技术等，已经在沙门菌的快速检测和鉴定中起重要作用。
为了寻求快速、准确、简便、微量的分析技术和方法，国内外学者进行了大量的研究，从以传统方法为基础发展到以免疫学、分子生物学为基础的快速检测方法，并在实践中不断取得新进展。
无论分离培养还是快速检测都常常需要对目标菌进行富集培养，并且一种病原菌常需要用一种或多种特殊的培养基来进行富集。
PMA－qPCR 定量检测畜禽肉类中沙门菌活菌的研究
PMA－qPCR 定量检测畜禽肉类中沙门菌活菌的研究於颖;王文静;陆晔【摘要】Objective To enumerate Salmonella in meat of livestock and poultry rapidly and accurately by using propidium monoazide( PMA) combined with real-time fluorescence quantitation polymerase chain reaction ( qPCR). Methods The light exposure time and the concentration of PMA were optimized to establish PMA-qPCR.The standard curve was established by standard plasmid.The sensitivity and specificity were investigated.This method was used for the quantitation determination of Salmonella in livestock and poultry meat.Results The amplification of DNA derived from Salmonella dead cells could be inhibited without affecting the viable cells when PMA was at a dose of 15 μg/mL and exposed for 5 min.The cycle threshold values(Ct) and standard plasmid model cell copy number presented the satisfactory linear, and the correlation coefficient r 2 approached 0.997 9.This method could detect as low as 10copies/reaction.The minimum detection level was 21 copies/μL by PMA-qPCR.In artificial chicken samples, PMA-qPCR could detect as low as 103 CFU/mL.Conclusions It was possible to quantify viable Salmonella in meat of livestock and poultry by PMA-qPCR.%目的：将叠氮溴化丙锭（PMA）与实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）相结合定量检测畜禽肉类中活的沙门菌。
沙门氏菌检测标准方法及实验关键点
沙门氏菌检测标准、方法及实验关键点．检验沙门氏菌的原因和意义：据统计我国细菌性食物中毒中70%～80%是由沙门氏菌引起的，人一旦摄入含有大量沙门氏菌(105～(106个/g)的动物性产品，就会引起细菌性感染，进而在毒素作用下发生食物中毒导致胃肠炎、伤寒和副伤寒且沙门氏菌的传播媒介众多，肉、蛋以及食品从加工到出售的过程中都十分容易发生污染。
因此对沙门氏菌的检验事关重大。
二、检测及鉴定：沙门氏菌的检测要在二级生物安全实验室及二级生物安全柜(在负压情况下防止致病微生物气溶胶飘离实验室对实验人员及环境造成污染)中进行。
沙门氏菌典型菌落形态：生化鉴定显示：API20E 生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法，广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。
限值要求：参考CAC、ICMSF、欧盟、澳大利亚和新西兰、美国、加拿大、香港、台湾等国际组织、国家和地区的即食食品中沙门氏菌限量标准及规定，《GB29921-2013食品中致病菌限量》按照二级采样方案对所有11类食品设置沙门氏菌限量规定，具体为n=5，c=0，m=0（即在被检的5份样品中，不允许任一样品检出沙门氏菌）。
三、沙门氏菌传统检测方法的关键控制点1、样品处理尽可能缩短解冻时间，使竟争菌群生长最少，并减小对沙门氏菌的损伤致病菌取样一定要均匀并具有代表性（蛋黄蛋清混匀取样）。
2、培养基及培养方面（1）没有一种培养基可疑准确无误的筛选出沙门氏菌，必须选择多种选择性培养基同时筛选，只能说显色培养基综合选择性更强。
（2）试剂和培养基的配置一定要严格按照说明书配置，是否需要高压灭菌，添加剂用量及培养基保存条件。
（3）有1%沙门氏菌乳糖发酵阳性，为了避免漏检乳糖阳性菌必须选择不依赖乳糖的培养基，目前BS培养基认为是最适合的。
（4）BS培养基是分离沙门氏菌的高效培养基，特别适用于伤寒类的沙门氏菌，不是所有的选择性培养基都能有效分离出伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌，BS是分离伤寒类沙门氏菌的首选培养基。
PCR法快速检测肉食品污染沙门菌的实验研究
（ ． 南 省 沁 阳 技 术 监 督 局 检 验 测 试 中心 ， 南 沁 阳 １河 河 ４４ ５ ； ． 西 大学 动 物 科 学 技 术 学 院 ， 西 南 宁 ５５ ０ ２ 广 广 ５ ００ ） ３０ ５
摘 要 沙 门 茵属 是 引起 食 源性 疾病 的 重要 致 病 茵 之 一 。传 统 的 检 测 方 法 费 时 、 力 ， 究 建 立 了检 测 肉食 费 研
微 生物 学杂 志 ２１年５ ０ ０ 月第３ 卷第３ ＪＵ Ｎ Ｌ Ｆ Ｉ Ｏ ＩＬＧ ａ２１ Ｖ１０Ｎ． ０ 期 Ｏ Ｒ Ａ Ｃ Ｂ Ｏ ＹＭ Ｙ００ ｏ３ ｏ３ ＯＭ Ｒ Ｏ ．
ｌ ｏ ３
Ｐ Ｒ 法快 速 检 测 肉食 品 污 染 沙 门茵 的 实验 研 究 Ｃ
赵 玉 玲 ，张 天 生 ，张 巧 艳
ｍｏ ｅ ｌ ｅ ｍ ｅ ｉ ｈ ａ ｒ ｄ ｃ ｓ ｔ ｓａ ｉ ｈ Ｓ ｍｏ ｌａ ｄｉ ｔ ｃｔ ｅ，ｓ ｎｓｔｖ ｎ ｌ ｇ ｎｏ ｎ ｔ ｅ ｍｅ ｔ ｐ ｏ ｕ ｔ ｏ ｅ ｔ ｂｌｓ ａｌ ｎｅｌ ｓ ｉ ｉ ａ ｎ ｖ ｅ ｉｉ ｅ，ａ ａ ｄ ＰＣＲ ｅ ｅ ｔｏ ｒ ｖ ｄｉ ｇ ｎｄ ｒ ｐｉ ｄ ｔｃ ｉｎ ｐ ｏ ｉ ｎ
食源性病原微生物分子鉴定的研究进展
残 留 、非 法 添 加 物 以 及 霉 菌 毒 素 等 化 学 污 染 物
的广泛关注,并逐步 应 用 于 食 源 性 病 原 微 生 物 的
的 检 测 ,对 于 食 源 性 病 原 微 生 物 检 测 尚 未 引 起
足 够 重 视 [ 12] 。
传统的食品微生 物 检 验 包 括 菌 落 总 数 计 数、
才能检测出 结 果 [ 14] 。 然 而 食 源 性 疾 病 暴 发 往 往
发 生 [ 5- 6] 。 单 核 细 胞 增 生 李 斯 特 菌 能 在 极 端 环
菌、培养、生化试验、血清学凝集,最少要 5 d 时间
核细胞增生李斯特菌感染的食物后可导致胃肠
是快速、紧 急 的, 传 统 检 测 方 法 需 要 操 作 者 的 主
Abstract: Rapid detection of pathogenic microorganisms was the key way to prevent and control of foodborne diseases. Because traditional microbiological detection methods were cumbersome and low sensitivity, they failed to meet the needs of rapid detection. Using modern molecular biological detection methods,
琐;利用酶联免疫技术、免疫磁性分离法和免疫磁珠结合 PCR 法,可以特异性识 别 病 原 菌,能 够 快 速 分
离目标微生物,但成本较高。 综述了基于 PCR 技术的分子生物学检测方法、分子分型方法、免疫学检测
肉蛋类食品沙门氏菌分离与菌膜检测
类食 品卫 生状况， 并对 沙门氏茵的控制提供有益参考。
关键 词 ： 门氏 菌 ； 离 ；Ｃ ； 定 ； 沙 分 Ｐ Ｒ鉴 茵膜
Ｉｏ ａ ｉ ｎａ ｏ ｌ ｎ ｌｓｓｏ ａｍ ｏ ｅｌ ｒ ｍ ｅ ｈ ａ ｇ ｓ ｌ ｔｏ ｎｄＢｉｆ ｍ Ａ ａ ｙ ｉ ｆＳ ｌ ｎ ｌａｆ ｏ Ｆｌｓ ｎｄ Ｅｇ ｓ ｉ
ｄ ｍｏ ｓｒｔｄ ｈ ｔ ｓｒ ｉ ｓ ｏ ｌ ｆ ｒ ｅ ｎ ｔａｅ ｔ ａ ２ ｔ ｎ ｃ ｕ ｄ ｏ ｍ ｓｒ ｎ ｂ ｏ ｌ ａ ｔｏ ｇ ｉｆ ｍ． Ｔ ｅ ｅ ｔｄ ｅ ｃ ｕ ｄ ｉ ｈ ｓ ｓｕ ｉｓ ｏ ｌ ｗｅｌ ｅｌｃ ｍｉｒｏ ｇ ｎ ｓ ｌ ｒｆｅ ｔ ｃ ｏ ｒａ ｉｍ
ｃｎａ ｉａ ｏ ｉ ｅ ｄ ｏｋ ｎ ｉ ｊ ｉ ｄ ｉ ｍ ｓ ｕｔ ｎ ｎ ａｍ ｎｌ ｎ ｏ． ｏｔ ｎｔ ｎ ｆ ｈｃ ｎａ ｒ ｉ Ｔａ ｉ ｃ ｙ ｎ ｖ ｓ ｅｎｔ ｃｏ ｌ ｏ ｌ ｃ ｔ １ ｍ ｉ ｏｃ ｋ ｎ ｐ ｎ ｎ ｔａ ｇ ｅｏ ｉ ｒ ｉ ｏ Ｓ ｅ ａｏ ｒ
— ＝＝
１ ６ ３
第 第期 卷 １
３ １ ２
’
食品 Ｒ 研究与开发 叩 研＾司丌， 叉
检分 测析
肉蛋类食 品沙 门氏菌分离与菌膜检测
王硕 ， 赵金龙 ， 刘昕煜 。 朱超 ， 杜欣军 （ 品营养与安全省部共建教育部重点 实验室 天津科技大学 食品工程与生物技术学院 ， 食 天津 ３０ ５ ） ０４ ７
管， 加入 １ Ｏ体积的 Ｎ Ａ （ ｏ Ｌ ｐ ＝ ．） ２ 体 ／ ｌ ａ ｃ ３ ｌ ，Ｈ ５ 和 倍 ｍ ／ ２ 积无水 乙醇 ，２ 一 ０℃沉淀 ３ ｉ， ２ ０ ｍ ｎ 心 ０ｍｎ ４ｃ ０ｒ ｉ 离 【 ０ ／ ＝１ １ ｉ；５％乙醇 洗 涤 沉 淀 ， １ ０ ／ ｉ ５ｒｎ ７ ａ ４ ２００ｒ ｎ离 心 ｍ
实时荧光PCR法快速分离食源性致病菌
实时荧光PCR法快速分离食源性致病菌建立快速的食源性沙门菌和志贺菌检测方法，以提高对该菌的检验速度和准确性，为公共卫生，食源性致病菌监测，突发性群体性食物中毒事件提供技术支持。
方法采用实时荧光PCR法和培养法对40份不同类食品进行沙门菌和志贺菌的检测，并对分离的菌株进行血清分型和定量检测，比较两种方法的特异性，灵敏度，准确性。
结果采用实时荧光PCR法检测40份样本,其中8份沙门菌核酸阳性，阳性率20%；采用培养法检测这40份样本，4份样品分离出沙门菌，阳性率10%，且4份样品经核酸检测均为阳性，32份核酸阴性样本采用培养法检测，均未分离到沙门菌和志贺菌。
结论实时荧光PCR法结合传统分离培养法适宜食品中沙门菌，志贺菌的快速筛查鉴定及食物中毒等突发事件的快速诊断。
沙门菌(salmonella)和志贺菌(shigella)是重要的，常见的肠道致病菌，也是食品卫生国家标准中规定的食品必检的肠道致病菌，由沙门菌引起的伤寒、副伤寒及由志贺菌引起的细菌性痢疾是《中华人民共和国传染病防治法》中规定报告的乙类传染病，肉，蛋，奶等营养丰富的食品是其主要传播媒介。
沙门菌污染不仅能导致鸡白痢，仔猪副伤寒，流产等疾病，还使人类发生伤寒，败血症，胃肠炎，食物中毒等，志贺菌主要引起细菌性痢疾，它们对人们的身体健康和生命安全构成了严重的威胁[1，2］，世界各地的食物中毒中，由沙门菌引起的中毒病例占首位或第2位，建立快速的食源性沙门菌和志贺菌检测方法，以提高对该菌的检验速度和准确性，在公共卫生，食源性致病菌监测，突发性群体性食物中毒事件中的快速检测中有重要意义,也是沙门菌和志贺菌检验研究的核心所在。
1 材料与方法1.1样品种类和来源样品购于南京市各农贸市场，超市和餐饮店主要消费品：生畜肉，熟肉制品，即食食品，中式凉拌菜。
1.2主要试剂和仪器1.2.1培养基沙门菌和志贺菌选择性培养基（BS平板，HE平板,SS平板及显色平板）和沙门菌和志贺菌选择性增菌液（TTB,SC,GN）均购自北京陆桥公司。
白鱼粉饲料中沙门菌的检测
１ 材 料 与 方 法 Ｌ１ 材 料
１ ． 方 法 ２
１ ． 样 品 的制 备 ： 样 品饲 料 取 ２ ， 别用 预先 准 备好 ．１ ２ 将 ５ｇ 分 的 ２ ５ｍ ２ Ｌ灭菌 的 Ｂ Ｗ 进 行再 水化 ， Ｐ 并振 摇 充分 混匀 。 制成
ａ ｄ ｔ ｕ ｎ ｉ ｃｌ ｈ ｅ ｔ ｕ ｎ ｈ ａ ｔ ． ａｍｏ ｅｌ ｒ ｎ ｉ ｄ ｏ ｏ ｔｎ ｏ ｎ ｔ ａｈ ｇ ｎ ． ｏ ａ ｏｄ ｈ ｚ ｒ ｓｏ ｅ ａ ｓ ｄ ｂ ｎ ｓｉ ｄ ｒ ｔ ｔ ｒ ａ ｍａ ｅ ｌ Ｓ ｌ ｎ ｌ ａ ｅｏ ｅ ｋ ｎ ｆｉ ｈ ｅ ｙ ｈ ｈ ａ ｍｐ ｒ ｔｚ ｏ ｏｉ ｐ ｔｏ ｅ ｓ Ｔ ｖ ｉ ａ ａ ｄ ｆ ｅ ｄ ｃ ｕ ｅ ｙ ａ ｃ ｆ
文章 顺 序 编 号 ：６ ２ ５ ９ （００ ０ — ０５ ０ １７ — １０ ２ １ ）８ ０ １— ２
某区食品中沙门菌的监测与分析
肉、鸭肉、鱼肉、羊肉、牛肉、猪肉）、水产品、生食蔬菜 （ 黄瓜、
西 红柿 、香 菜 、生菜 ） 、熟 肉制 品、蔬 菜沙 拉 、速冻 米面 、生 制食 品 、熟制食品 ，共２２份 。 ３１
１ ． 本检验 ．２样 １
依据 《 中华人 民共和 国 国家标 准 食 品卫生 微生 物学检 验方 法》 （ ＢＴ ７９ ．０３ Ｇ ／４ ８． ２０ ）和 国家食 源性 疾病监测 网监测方 案检 验沙门菌 。 ４ 沙 门菌诊断血 清购 自深圳市 瑞鑫达 实验 用 品试剂 耗才有 限公 司提供 ， 并在 试剂的有 效期 内使用 。药敏试验结 果 由中国疾 病预 防控 制中心营 养与 食品安全所 采用 Ｃ Ｓ推 荐方法检测提供 。缓冲蛋 白胨水 、三糖铁 ＬＩ 培养 基、 四硫 酸钠煌绿增 菌液 、微量 生化管等购 自上海艾研 生物科技
１． ．１前增菌 ２
制食品 （． ％）及生食蔬菜 （． ％）。这一研究结果沙门菌检出率 ０９ ６ Ｏ５ １ 低于李秀桂等 】 ，高于蒋震羚等 。 ，究其原因可能与研究区域、调 查的食品包括范围、沙门菌培养的试剂和培养基等有关。
制 品 （． ％）、速冻米面 （． ％）、熟制食品 （． ％）、生 制食 １０ ６ １７ ４ ０７ ５ 品 （． ％）及生食蔬 菜 （． ％），不同种类食品检出率 ，见表 １ ０９ ６ Ｏ５ １ 。
表 １２０ 年 ８ ０ ８ 月￣２ １年７ ０ １ 月年７ 类不 同种 类食品 沙 门茵 的检 出率
品，并对沙门菌进行分离、生化及血清学鉴定，现将结果总结如下。
１ 材料 与 方法
１ ． １材料
１ ． 品来源 ． １样 １ 在 ２０年８ 至２ １年７ 以无菌方 式定期随机采集广 州市天河 区 ０８ 月 ０１ 月 ６ 个食 品污染物监 测点 内的７ 类农 贸市场 的２２份 食品 ，包括 生肉 （ ３１ 鸡
API 20E 鉴定系统等两种检测方法应用于食品中沙门氏菌的检测结果比较
Iustry科技文苑行业40 食品安全导刊 2021年5月API 20E 鉴定系统等两种检测方法应用于食品中沙门氏菌的检测结果比较□ 韩志双 胡凤 自贡检验检测院摘 要：本实验采用AP I 20E 鉴定系统和国标生化鉴定方法，分别对2020年四川省市场监督管理局能力验证计划提供的样品中分离得到的沙门氏菌可疑菌落进行鉴定。
结果表明，两种方法的检测结果均为沙门氏菌阳性，故可用于对食品中肠杆菌科致病菌的鉴定，且A P I 20E 鉴定系统更优于传统生化鉴定方法。
关键词：API 20E 沙门氏菌 鉴定沙门氏菌是一种食源性致病菌，且大多数食品在生产过程中易接触到此类污染物，这也是食品被沙门氏菌污染的重要途径。
其中，畜禽肉类、蛋类、乳制品等食品最易受到该菌的污染，尤其是生鲜[1]类食品。
由于沙门氏菌对人类的健康威胁较大，故世界各国普遍规定食品中不得检出该菌。
我国国标方法GB 4789.4-2016[2]中规定了食品中沙门氏菌的检验方法，如传统的生化鉴定方法，但该方法所需时间较长且工作量较大。
目前，由于微生物自动化检测系统与常规鉴定方法相比具有准确、快速地发现和鉴定病原体的特点，因此被越来越多地应用于临床检验、疾病控制等领域[3]。
API 20E 是梅里埃公司根据酶促反应及代谢产物检测而研制的肠杆菌生化鉴定试剂条，API 20E 细菌鉴定系统则为国际公认的标准鉴定系统，也是肠杆菌科和弧菌的标准鉴定系统。
本研究将API 20E 鉴定系统运用于食品中沙门氏菌的检验，并同国标中的生化鉴定方法结果相比较。
1 材料与方法1.1 仪器设备及试剂1.1.1 国标生化鉴定方法生化试剂盒、阳性对照乙型副伤寒沙门氏菌，由广东环凯微生物科技有限公司制造提供。
1.1.2 A P I 20E 法API 20E 试剂盒、API LAB软件，法国生物梅里埃公司制造提供。
1.1.3 供试品来源奶粉样品由四川省食品药品检验检测院提供。
1.2 试验方法1.2.1 国标生化鉴定方法样品按G B 4789.4-2016经过选择性琼脂平板增菌，经T S I 、赖氨酸脱羧酶初步生化确定为疑似沙门氏菌后，将菌落纯化，配制成菌悬液，具体按厂家提供的试剂盒使用说明书执行。
沙门菌的检查方法及鉴定
沙门菌的检查方法及鉴定
沙门菌是一种常见的食源性致病菌，检查和鉴定沙门菌的方法对于食品安全和公共卫生至关重要。
本文将介绍沙门菌的检查方法和鉴定流程。
沙门菌是一种革兰氏阴性杆菌，是引起食源性疾病的主要病原菌之一。
为了确保食品安全和公共卫生，必须对食品和环境中的沙门菌进行检查和鉴定。
下面将分别介绍沙门菌的检查方法和鉴定流程。
1. 检查方法
沙门菌的检查方法主要包括以下几种:
(1) 传统培养法：将样品接种到含有营养物质的培养基上，经过一定时间的培养，观察菌落形态和颜色等特征，判断是否存在沙门菌。
这种方法操作简单，但是需要较长的培养时间，一般需要 2-3 天。
(2) 快速检测法：利用沙门菌特定的生化反应或基因特征，通过比色、荧光或生化指示剂等方法，快速检测样品中是否存在沙门菌。
这种方法操作简便、快速，一般只需要数分钟到半小时，但是准确性可能受到一定的影响。
2. 鉴定方法
沙门菌的鉴定方法主要包括以下几种:
(1) 血清学鉴定法：通过检测样品中沙门菌的抗原或抗体，利用血清学的方法进行鉴定。
这种方法操作简便，但是需要特定的抗原或抗体，并且可能会受到交叉反应的影响。
(2) 分子生物学鉴定法：通过检测样品中沙门菌的 DNA 序列，利用分子生物学的方法进行鉴定。
这种方法准确性高，但是需要专业的实验设备和技术。
沙门菌检验的注意事项
沙门菌检验的注意事项沙门菌检验是一种重要的实验室检测方法，用于检测食品、水源和环境中是否存在沙门菌。
沙门菌引起的食源性疾病对人体健康有严重威胁，因此在进行沙门菌检验时，需要注意以下几个方面。
首先，实验室的环境条件需要符合相关要求。
沙门菌检验通常要求在无菌环境下进行，因此实验室应具备良好的防护措施，如安装有高效过滤器的空气净化设备，严格控制实验室的温度、湿度等环境参数，以保证实验的准确性和有效性。
其次，使用的实验器材和试剂应具备良好的质量控制。
在进行沙门菌检验时，常用的实验器材有培养基、试剂盒、匀浆棒等，这些器材应选择有质量保证的产品，以确保实验结果的可靠性。
此外，实验室还需进行质量控制，定期检测培养基的成分和质量，防止出现假阳性或假阴性结果。
接下来，操作过程中需要严格掌握无菌操作技巧。
无菌操作是确保实验结果准确的重要环节。
在进行实验之前，实验员需要进行彻底的消毒，采取正确的无菌操作方法，避免污染样品或试剂。
同时，实验过程中要尽量避免开启培养基和培养皿的时间过长，以减少外界杂菌的污染。
此外，沙门菌检验还需要注意合理的取样和保存方法。
沙门菌常见于水源、动物体内和人体感染的食物中，因此需要在这些环境中进行取样。
取样时应遵循规范的操作流程，采用合适的容器，防止样品被污染。
同时，应注意取样时的数量和频率，以获得较为准确的检测结果。
取样后，样品应尽快送到实验室进行处理，或者进行适当的保存，以保持样品的原样。
最后，实验结果的解读需要根据相关标准进行。
沙门菌检验常用的方法有传统培养法和分子生物学检测法。
无论使用哪种方法，实验结果都需要遵循相关的标准进行解读。
例如，根据食品安全标准或公共卫生标准，沙门菌的含量是否超过了安全限值。
在解读结果时，还需要考虑实验中可能存在的干扰因素，如其他细菌的污染等。
综上所述，沙门菌检验是一项严谨的实验室检测方法，需要在无菌环境下进行，使用具备质量控制的器材和试剂，并且要严格掌握无菌操作技巧。
沙门菌血清学鉴定流程及结果判读
沙门菌血清学鉴定流程及结果判读下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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不同食品标准中沙门氏菌分类方案比较
第一作者：苏章庭（1994-）,男，本科，助理工程师，研究方向为食品微生物检验,E-mail：779063789@ 通信作者：周露（1982-），女，博士，高级工程师，研究方向为食品生物安全,E-mail:zhoulu 1982@ 基金项目：2020年度广东省市场监督管理局科研攻关项目（2020ZS02）；广东省食品检验所2019年科技创新基金项目（2019JS01） 收稿日期：2020-11-07
《伯杰氏细菌鉴定手册》（Bergey's Manual of Determinative Bacteriology）第七版和第八版中所列 的族和各族所包括的属有很显著的变动$ 在第七版 中，埃希氏族包括埃希氏属、肠杆菌属（Enterobactor"和克雷伯氏菌属（Klebsiella）,而沙门氏菌属 （Salmonella）和志贺氏菌属（Shigella）则包括在沙门 氏菌族中。在第八版中，沙门氏菌族被删去$克雷伯 氏菌属放在克雷伯氏菌族中， 沙门氏菌属和志贺氏 菌属都转到埃希氏菌族中[6-7]$
沙门氏菌属的分类有过多种方案， 其不同的分 类指标涵盖了表型方法，血清学特征，数值分类学和 DNA同源性等$在早期的分类方案发展过程中，主 要是通过生化反应将沙门氏菌分成亚群 （subgroup ）$ Kauffmann-White方案使用生化反应对沙门氏菌进 行系统分类。最终确定了5种由生化反应定义的亚 属（I至V）$在这个分类方案中，每一种血清型被定 义为一个种。其中，亚利桑那菌属被列入亚属III中。 随后,Ewing提出了一个3种命名系统,使用16种 生化试验来鉴别伤寒沙门氏菌（S. typhi,单一血清 型）、猪霍乱沙门氏菌（S. choleraesuis,单一血清型）
1 前言 沙门菌氏广泛分布于自然界，寄生于人和动物
不同方法检测食源性致病菌的对比研究
分析检测不同方法检测食源性致病菌的对比研究苏 敏（太原市市场监管综合行政执法队，山西太原 030031）摘 要：目的：对比研究细菌培养法和荧光PCR法在食源性致病菌检测中的效果。
方法：选取时间为2020年6—12月，选取250份样本进行常见食源性致病菌的培养，再进行荧光定量PCR检测，分别比较不同检测方法的结果。
结果：细菌培养法阳性率为18.80%与荧光定量阳性率20.0%互比差异微小（χ2=0.890），无统计学意义（P＞0.05）。
结论：两种检测方法在食源性致病菌检测当中均具有一定应用价值，但是荧光PCR的优势（时限、结果、效率）远远高于细菌培养，更加适合应用于食源性致病菌的检测当中。
关键词：食源性致病菌；食品安全；细菌培养；荧光PCR检测随着人们生活水平的不断提升，人们对食品安全问题的关注度也越来越高，食品安全问题也是全球共同关注的公共卫生问题，其中食源性致病菌是最大的威胁，为此要采用高效的检测手段来检测食源性致病菌，才能保障食品安全。
在食品安全事件当中，最为常见的食源性致病菌有副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌等，当前我国将细菌培养法运用至食物病原菌的检测当中，但是由于操作步骤烦琐、用时长等，很难满足当前公共卫生事件快速反应的需求[1]，为此，检测方法必须符合特异性高、灵敏度高、快速等要求，而荧光PCR法作为食源性致病菌的检测方式，得到了广泛的运用。
基于此，为了选择更加有效的食源性致病菌检测方法，本文分别比较了细菌培养法以及荧光定量RCR法的检测效果。
1 材料与方法1.1 材料荧光定量PCR仪（型号：ABI7500），美国ABI公司；检测用试剂，均由青岛海默技术有限公司提供；API鉴定生化试条，法国梅里埃公司；荧光PCR检测试剂、样本处理DNA提取液，均由上海之江生物科技有限公司提供。
1.2 样本来源选取时间为2020年6—12月，选取250份样本，包括即食非发酵豆制品（50份）、速冻熟制米面制品（50份）、熟肉制品（50份）、生禽肉（50份）和生畜肉（50份）。
两种检测方法对肠道沙门菌的检测结果比较
两种检测方法对肠道沙门菌的检测结果比较刘志冰【摘要】目的:探讨肠道沙门菌检测的优化方法,提高健康体检阳性检出率.方法:通过替换沙门菌选择性增菌液和分离平板,采用改良磺绿增菌液(SBG)进行增菌,胆硫乳琼脂(DHL)进行选择性分离.结果:1 625份便检样品SBG-DHL模式分离出35株沙门菌,经MM-SS模式分离出11株沙门菌,敏感性分别为94.59％和29.73％,检出率分别为2.15％和0.68％.两种组合结果分离率上存在明显的差异(x2=18.89,P ＜0.05).结论:SBG-DHL组合在肠道沙门菌的检测明显优于MM-SS组合,优化方法SBG-DHL具有易于掌握和高敏感性的优点,适用于预防性健康体检的常规分离.【期刊名称】《华夏医学》【年(卷),期】2017(030)003【总页数】3页(P106-108)【关键词】沙门菌;SGB-DHL检测流程;敏感性;检出率【作者】刘志冰【作者单位】桂林市疾病预防控制中心,广西桂林541001【正文语种】中文【中图分类】R516.3沙门菌是常见的肠道致病菌，是引起人类食源性疾病主要病原菌之一。
《中华人民共和国食品安全法》和《公共场所卫生管理条例》均明确规定携带沙门菌的食品及公共场所从业人员不得从事直接接触入口食品或直接为顾客服务的工作［1］，因此，在食品和公共场所从业人员健康体检中必须进行沙门菌检测。
近几年来，桂林市对健康人群肠道沙门菌的检测均按照WS 271—2007感染性腹泻诊断标准附录B.1、《卫生防疫细菌检验》的方法进行增菌、分离培养及血清学和生化鉴定。
采用孔雀绿氯化镁肉汤(MM)为增菌液，先置(36±1)℃培养18～24 h后进行沙门氏菌－志贺氏菌(SS)平板划线分离培养，从SS平板上挑选可疑菌落做生化鉴定和血清学鉴定，即为MM－SS法。
然而，沙门菌的检出率在0.11%～0.60%［2］，检出结果偏低。
对此，笔者对沙门菌检测方法进行了改良，采用改良磺绿增菌液－胆硫乳琼脂(SBG－DHL)法，有效提高了肠道沙门菌的敏感性和检出率。
沙门菌凝集方法
沙门菌凝集方法沙门菌是一种常见的食源性病原菌，其检测方法在食品安全和公共卫生领域具有重要意义。
本文将详细介绍沙门菌的凝集方法，以帮助读者了解这一检测技术。
一、概述沙门菌凝集方法是一种基于抗原与抗体特异性结合原理的检测技术。
该方法通过特异性抗体与沙门菌表面抗原结合，形成凝集现象，从而实现对沙门菌的快速检测。
凝集方法具有操作简便、检测速度快、灵敏度和特异性较高等优点，在沙门菌检测中得到了广泛应用。
二、凝集方法的原理1.抗原与抗体特异性结合：沙门菌表面存在特异性抗原，如O抗原和H抗原。
当特异性抗体与这些抗原结合时，会形成抗原-抗体复合物。
2.凝集现象：当抗原与抗体在适当条件下结合后，会形成可见的凝集团。
凝集团的大小、形状和数量与沙门菌的数量成正比。
3.试剂：凝集方法所用的试剂包括特异性抗体、抗原和辅助试剂（如稀释液、洗涤液等）。
三、凝集方法的操作步骤1.样本处理：将待检测的沙门菌样本进行适当稀释，以便于后续实验操作。
2.抗原和抗体准备：根据实验需要，制备特异性抗体和抗原。
3.凝集实验：将抗原和抗体按一定比例混合，置于适当的条件下（如温度、时间等）进行反应。
4.结果观察：观察凝集团的形成情况，根据凝集团的数量和大小判断样本中沙门菌的含量。
5.结果判定：根据实验结果，与标准曲线或已知浓度样本进行比对，计算出样本中沙门菌的浓度。
四、注意事项1.抗体和抗原的选择：选择特异性强、灵敏度高的抗体和抗原，以提高检测结果的准确性。
2.实验条件：严格控制实验条件，如温度、时间等，以保证实验结果的可靠性。
3.结果判定：结果判定应结合实际情况，避免因操作不当或试剂问题导致的误判。
4.质量控制：定期进行质量控制，确保实验结果的稳定性和准确性。
五、总结沙门菌凝集方法作为一种快速、简便的检测技术，在食品安全和公共卫生领域具有重要应用价值。
通过掌握该方法的基本原理和操作步骤，有助于提高沙门菌检测的准确性和效率。
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１资料与方法
１ ． １一般资料 ：人工 制作食源性 沙门菌污染 样品９ ０ 份 ，猪 肉、鸡肉 以
及牛 奶各３ ０ 份 ，使用传统细菌监 测方法 以及酶联 免疫吸 附法 ，对 比两 种检 测方法 的检测结果。
１ ． ２方法
意 义 ＜Ｏ ． ０ ５ ） 。结 论 在食 源性 沙 门茵检 测方 面，酶联 免疫吸 附法 能够提 高检 测速度 以及 准确 性 ，从 而确保 受污 染食 品可 以得到 及 时有 效 的处理 ，在 食品 卫生 以及 口岸 检 疫 等方 面有重要 应 用价 值 。 【 关键 词】 食 － 源｜ 沙门 茵 ；细 菌检 测 ；食 品 卫生 ；检 疫
病＿ 】 。 ］ 。 目前细 菌性食 物 中毒病例 当 中，沙 门菌 因素 比例 最高 。沙 门
照 。用封板膜封板后置３ ７℃温育 １ ｈ 。取包被好的酶标 板 ， 小 心揭掉封 板膜 ，弃去液体 ，甩干 ，每￣ Ｌ ） Ｊ ｎ 满洗 涤液，静置３ ０ ｓ 后弃去 ，如此重复 ５ 次 ，拍干 。取 出酶标 板，迅速加入 ５ ０ Ｌ 终止液 ，加入 终止液 后应立
染食 物 １ ０ ￣ ３ ０ ｈ 后发 病 。可 以使人 类发生伤 寒 、副伤寒 、败血症 、 胃
１ ． ２ ． ２ 细菌检 测方法 。选 择污染 样品 并使用抑 制非沙 门菌 的琼 脂平板 进行 培养 ，肉眼确认 平板上面 的特征性菌落 ， 之 后对该菌 落的分离物
进行相 关的生化以及血清学检测 ，从而 完成鉴 定。
即在酶标仪上测定Ｏ Ｄ ４ ９ ０ 光吸收读值。以国标法作为金标准进行Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ
方法的敏感性和特异性分析 ，另外采用稀释法进行国标法和Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验
的检测限测定。
１ ． ３统 计学方法 ：将所检 测的数据用统 计学专业软 件数据包 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ８ ． ０ 进行分析 ，￣ Ａ Ｐ ＜ｏ ． ０ ５ 具有差异统计学 意义 】 ２结 果
于传统细菌监 测，差异有统计学 意义 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ），具体结果见表 １ 。 ３结 论 ３ ． １沙 门菌检 测的意义 。沙 门菌 是危害人与 动物健康 的一种重要致 病 菌 ，菌属 型别 比较繁 多 ， 同时抗原 也非 常复 杂 ， 目前 已经分 离 出超 过６ ０ 个 菌群 以及２ ０ ０ ０ 个血 清型 以及变 种 ，最常见 的是 肠炎 沙 门菌 。
１ ． ２ ． １污染 样 品制 备方 法 。第 一 ，生鲜 猪 肉污 染样 品制 备 。无菌 操 作 取无污 染肌 肉 ，将 其分 割成３ ｃ ｍ× ２ ｃ ｍ× ２ ｃ ｍ大小 ，２ ０ ｇ 大 小组
织块 。使 用灭菌生理盐水稀释培养的菌液 ，制成浓度各异的菌悬
液 ，将 称好 肉样 悬浮 在菌 悬液 当 ０２ ｏ ｓ 完 成接 种 ，常温 静置 ３ ０ ｍｉ ｎ 去 掉多 余水 分 ，制成浓 度不 同 的沙 门菌污染 样 品。第 二 ，鸡 肉污染 样 品制备 。无菌 操作取 调理 鸡 肉 ，分 割成为 规则 状组 织块 ，人 工污 染 步骤 同上 。第三 ，鲜 牛奶 污染 样 品制 备 。取１ ５ ｍ Ｌ 过 夜沙 门菌 悬 液 混入２ ０ ０ ｍ Ｌ 的鲜牛 奶当 中完成 人工污 染 ，混匀后 制成 牛奶污 染样
பைடு நூலகம்品。
沙门菌对环境有比较强的抵抗力 ，在肉类、牛奶以及蛋类制品当中
能够 存活 数周 甚 至数月 。在 沙 门菌的 危害方 面 ，该病 菌被认 为是 最 常见 的一 种食 源性 致病 菌 ，其 中食 物传 播是 人类 主要 的感染 途 经 ， 肉类 、蛋 类 、未消 毒 的牛奶 以及海 产 品等食 品都 同沙 门菌病 存在 一 定 的关系 。沙 门菌病 临床 表 现主要 为恶 心 、呕吐 、腹痛 、腹 泻 、发 热 、痉挛 以及 头痛 等 ，潜 伏 期６ ￣ ４ ８ ｈ 。患者 往往在 进食 受沙 门菌 污
３ ２ ・实验研究 ・
Ｎ ｏ ｖ ｅ ｍ ｂ ｅ ｒ ２ ０ １ ５ ， Ｖ ｏ １ ． １ ３ ， Ｎ ｏ ． ３ １ 围衄
食源性沙 门菌检 测方法的研 究
陈 凤仙
（ 罗平 县疾病预 防控制 中心 ，云南 罗平 ６ ５ ５ ８ ０ ０ ）
【 摘要 】 目的 探 讨 食 源性 沙门 菌检 测 方法 。方法 人 工制作 食 源性 沙 门菌污 染样 品 ９ Ｏ 份， 分别 使 用传 统 细菌监 测 方法 以及酶联 免疫吸 附法 ， 对 比 两种 检 测方 法 的检 测 结果 。结果 在 两种检 测 方 法的检 测 结果 方 面，酶联 免疫吸 附 法检 测结 果显著 优 于传 统细 茵监 测 ，差异 有统 计 学
菌病主要成因是食用加工不够彻底的食物 ，包括蛋类、肉类以及乳
制品 。抑制 食物 当 中沙门菌 的方 法还 不够成 熟 ， 因此检测 方法 在 防 范沙 门菌食 物污染 以及 疾病 传播 领域有 重要 价值 。在 食源性 沙 门菌 检 测过程 当中 ，我 中心 使用 酶联 免疫 吸 附法 检测 进行 检测 ，效 果理 想 ，报道如 下。
中 图分类 号 ：Ｒ ５ １ ６ ． ３
文 献标 识码 ：Ｂ
文章 编号 ：１ ６ ７ １ － ８ １ ９ ４（ ２ ０ １ ５ ）３ １ － ０ ０ ３ ２ － ０ ２
沙 门菌 可 以说是 感染 人 以及 动 物的 一种 重要病 原 菌 ，人体 容易 因为接 触沙 门菌 或者 食用其 污染 物而 感染 ，出现腹 泻或者 系统 性疾
肠 炎和食 物 中毒 ，给 国家经 济造 成 巨大损 失 ，同时严 重威胁 着 人们 的 身体健 康 。所 以 ，沙 门菌 病是 公共卫 生学 上具 有重 要意义 的人 畜
共患病 之一 。
１ ． ２ ． ３酶 联 免 疫 吸 附 法 检 测 方 法 。 检 测 方 法 ：用 碳 酸 盐 缓 冲 液 （ Ｏ ． ０ ５ ｍｏ ｌ ／ Ｌ ｐ Ｈ ９ ． ４ ） 稀释肠炎沙门菌８ Ｏ 包被９ ６ 孑 Ｌ 酶标板，１ ０ ｏ 徼升 ／ 孔， 用封板膜封板后置３ ７℃温育１ ｈ 。小心揭掉封板膜 ，弃去液体 ，甩干 ， 每孔加 满洗 涤液 ，静置３ ０ ｓ 后弃 去 ，如此重复５ 次 ，拍干 。取未致敏 的