171-教学课件-葡萄球菌属

直接涂片 染色镜检
初报
分离培养 （血琼脂平板）
可疑菌落
增菌培养（ 5% CO2 ） （葡萄糖肉汤或其他商 品化培养基）
分离培养 （高盐甘露醇培养基）
鉴定试验
药敏试验
涂片染色镜检 血浆凝固酶 耐热核酸酶 其他鉴定法
结果报告 图 8-3 葡萄球菌属检验程序
四、微生物学检验
（二）标本采集 • 根据感染部位采集标本 • 避免病灶周围正常菌群的污染
一、分类
•根据色素、生化反应等表型分类
金黄色葡萄球菌（ S. aureus ） 表皮葡萄球菌（ S. epidermidis ） 头状葡萄球菌（ S. capitis ）等
•根据凝固酶分类
凝固酶阳性葡萄球菌 凝固酶阴性葡萄球菌
•其他分类
二、临床意义
1. 致病物质
•侵 袭 性 酶
凝固酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、脂酶等
5. 其他鉴定试验
• 鸟氨酸脱羧酶试验
敏感
• 脲酶试验
• β- 半乳糖苷酶
• 3- 羟基丁酮试验
• 新生霉素耐药试验（右图）
• 多粘菌素耐药试验
耐药
• 糖产酸试验
肠毒素检测
• 动物试验
– 幼猫
• 琼脂扩散试验或 ELISA 法
– 琼脂扩散试验：待测标本中的金黄色葡萄球菌 肠毒素与相应抗毒素在琼脂糖中进行双相扩散 ，观察有无沉淀线产生
• 抗抗抗抗抗抗
三、生物学特性
4. 抵抗力
• 较强，耐干燥、耐盐 • 对碱性染料敏感 • 易产生耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 M
RSA （ methicillin-resistant S. aureus ）
四、微生物学检验
（一）检验程
序
脓汁、咽拭、穿刺液、尿液、痰液
脑脊液Βιβλιοθήκη 血 液 粪便、呕吐物四、微生物学检验
（三）标本直接检查
•显微镜检查：涂片，革兰染色镜检，根据形态特征
可初步报告
•抗原检测：乳胶凝集试验测定 SPA 及荚膜抗原 •核酸检测
四、微生物学检验
（四）分离培养与鉴定
• 血标本先接种肉汤增菌培养基 • 脓液、分泌物等标本接种血琼脂平板 • 粪便等污染标本接种选择培养基，如高
盐甘露醇琼脂平板
• 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、施氏葡萄球菌、 中间葡萄球菌和猪葡萄球菌阳性
4. 吡咯烷酮芳基酰胺酶试验
将被检菌 24h 斜面培养物接种在含吡咯烷酮 -β 萘基 酰胺（ PYR ）肉汤中， 35℃ 2h ，加入 PYR 试剂 后 2 分钟内呈现深紫红色为阳性
溶血葡萄球菌、路登葡萄球菌、施氏葡萄球菌及中间 葡萄球菌阳性
革兰染色
三、生物学特性
2. 培养特性
•营养要求不高 •普通琼脂平板上 18 ～ 24h ，形成直径 2mm 左右， 圆形凸起、光滑湿润的菌落，可产生金黄色、白色、 柠檬色等脂溶性色素
金黄色葡萄球菌的透明溶血环（血琼脂平 板）
三、生物学特性
3. 抗抗
• 表面抗原：葡萄球菌 A 蛋白（ staphylococcal pro tein A, SPA ）
病原性球菌检验
病原性球菌
链球菌属 (Streptococcus)
葡萄球菌属 (Staphylococcus)
肠球菌属 (Enterococcus)
奈瑟菌属 (Neisseria)
卡他莫拉菌
(Moraxella.catarrhalis)
葡萄球菌属（ Staphylococcus ）
重点提示
• 分类 • 临床意义 • 生物学特性 • 微生物学检验 • 药敏试验的药物选择
四、微生物学检验
金黄色葡萄球菌
–血琼脂平板：菌落圆形凸起，金黄色或 橙色，菌落周围出现透明溶血环
–高盐甘露醇琼脂平板：黄色菌落
初步鉴定
葡萄球菌属 • 涂片染色镜检 • 菌落形态 • 触酶试验阳性 • 氧化酶试验阴性
鉴定试验
1. 凝固酶试验
（ 1 ）玻片法：检测结合型凝固酶 （ 2 ）试管法：检测游离型凝固酶 金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌阳性
2. 耐热核酸酶试验
• 待检菌肉汤培养物沸水浴 15 分钟，取数滴，滴加
于甲苯胺蓝核酸琼脂的小孔内， 35℃ 1 小时后观察 结果 • 小孔周围蓝色琼脂变粉红为阳性，不变色为阴性 • 金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪 葡萄球菌阳性
3. 磷酸酶试验
• 将待测菌点种在加有硝基酚磷酸盐的 pH5.6 ～ 6.8 M-H 琼脂平板上， 18 ～ 24h ，菌落周围出现黄色 为阳性
– ELISA ：将抗毒素包被在固相载体中，以双抗 体夹心 ELISA 法检测样本中的肠毒素
五、药敏试验的药物选择
根据 CLSI 文件 M100-S24 推荐：
• 葡萄球菌属药敏试验的首选药物及常规试验报告 的药物是阿奇霉素或克拉霉素或红霉素、克林霉 素、苯唑西林、头孢西丁、青霉素及复方新诺明
• 其中苯唑西林仅用于 MIC 试验，纸片扩散法不 可靠
•毒 素
葡萄球菌溶素、杀白细胞素、肠毒素、表皮剥 脱毒素、毒性休克综合征毒素 -1 等
二、临床意义
2. 所致疾病
• 侵袭性疾病
皮肤感染：疖、痈等 器官感染：肺炎、中耳炎、骨髓炎等 全身感染：败血症、脓毒血症
• 毒素性疾病
食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征
三、生物学特性
1. 形态结构 • 革兰阳性球菌，葡萄串状排列 • 无鞭毛、无芽胞，一般不形成荚膜