过柱淋洗剂选择
过柱的方法和技巧
关于过柱得实验方法与技巧(注意:有机溶剂对身体特有害别就是心肺;肝脏等所有过柱操作都要在通风橱里进行!!常说得过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用得就是以硅胶或氧化铝作固定相得吸附柱。
由于柱分得经验成分太多,所以下面我就几年来过柱得体会写些心得,希望能有所帮助。
1、柱子可以分为:加压,常压,减压压力可以增加淋洗剂得流动速度,减少产品收集得时间,但就是会减低柱子得塔板数、所以其她条件相同得时候,常压柱就是效率最高得,但就是时间也最长,比如天然化合物得分离,一个柱子几个月也就是有得。
减压柱能够减少硅胶得使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但就是由于大量得空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结),以及有些比较易分解得东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大得噪音,而且时间长)。
以前曾经大量得过减压柱,对它有比较深厚得感情,但就是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压得念头了。
加压柱就是一种比较好得方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走得快些。
压力得提供可以就是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气得就行)。
特别就是在容易分解得样品得分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走得太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通得有机化合物得分离中就是比较适用得。
ﻫ2、关于柱子得尺寸,应该就是粗长得最好柱子长了,相应得塔板数就高。
柱子粗了,上样后样品得原点就小(反映在柱子上就就是样品层比较薄),这样相对得减小了分离得难度。
试想如果柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离得难度可想而知,恐怕要用很低极性得溶剂慢慢冲了、而如果样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大得柱子要牺牲比较多得硅胶与溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保得说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)。
现在见到得柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量就是样品量得30~40倍,具体得选择要具体分析。
柱层析方法和技巧
常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。
一:柱子可以分为:加压,常压,减压压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结),以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大的噪音,而且时间长)。
以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行)。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
二:关于柱子的尺寸应该是粗长的最好。
柱子长了,相应的塔板数就高。
柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离的难度可想而知,恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保的说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)。
现在见到的柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体的选择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用2cm×20cm的柱子);如果相差不到0.1,就要加大柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm的,也可以减小淋洗剂的极性等等。
柱层析的一些心得
常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分离的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。
1.吸附剂常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等:吸附剂一般要经过纯化和活性处理,颗粒大小应当均匀。
对吸附剂来说粒子小、表面积大,吸附能力就高,但是颗粒小时,溶剂的流速就太慢,因此应根据实际分离需要而定。
供柱色谱使用的氧化铝有酸性、中性和碱性3种。
酸性氧化铝是用1%盐酸浸泡后,用蒸馏水洗至氧化铝的悬浮液pH为4,用于分离酸性物质;中性氧化铝的pH约为7.5,用于分离中性物质;碱性氧化铝的pH约为10,用于胺或其它碱性化合物的分离。
因硅胶略带酸性,只能用于对酸不敏感的化合物的分离。
常用300-400目的柱硅胶或H 硅胶。
若化合物的R f值相差较大,则可考虑使用200-300目硅胶以加快层析速度。
另:因吸附剂的比表面较大,天气潮湿时或长期放置中吸附的水分会对分离效果产生极大的影响(相当于大大增加了固定相的极性导致样品分不开),因此应将吸附剂放入90~100度烘箱内烘2小时后,取出在干燥器中冷却后再使用。
使用的硅胶,不用时一定要密封,防止吸潮。
TLC所用的硅胶板一定要保存在干燥器里面,或使用前在红外烘箱里干燥一段时间。
2.溶质的结构与吸附能力的关系化合物的吸附性与它们的极性成正比,化合物分子中含有极性较大的基团时,吸附性也较强,氧化铝对各种化合物的吸附性按以下次序递减:酸和碱>醇、胺、硫醇>酯、醛、酮>芳香族化合物>卤代物、醚>烯>饱和烃3.柱子可以分为:加压,常压,减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。
加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
硅胶柱层析的操作过程
硅胶柱层析的操作过程柱层析极性小的用乙酸乙酯:石油醚系统极性较大的用甲醇:氯仿系统极性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系统拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析下面介绍我现在惯用的方法:匀浆法。
1。
称量。
200-300目硅胶,称30-70倍于上样量;如果极难分,也可以用100倍量的硅胶H。
干硅胶的视密度在0.4左右,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以。
2。
搅成匀浆。
加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系,就用石油醚拌;如果洗脱剂是氯仿/醇体系,就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆,说明溶剂中含水量太大,尤其是乙酸乙酯/丙酮,如果不与水配伍走分配色谱的话,必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥,以除去1%的醇。
如果样品对酸敏感,不能用氯仿体系过柱。
3。
装柱。
将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约1/3体积石油醚(氯仿),装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内。
随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚(氯仿)将其冲入柱中。
4。
压实。
沉降完成后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定。
柱床约被压缩至9/10体积。
无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5。
上样。
干法湿法都可以。
海沙是没必要的。
上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。
然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面。
6。
过柱和收集。
柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。
太低的洗脱强度并不好,推荐用梯度洗脱。
收集的例子:10mg上样量,1g硅胶H,0.5ml收一馏分;1-2g上样量,50g硅胶(200-300目),20-50ml收一馏分。
7。
检测。
要更多地使用专用喷显剂,如果仅用紫外灯,会损失较多产品,紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
8。
送谱。
收集的产品旋干,在送谱前通常需要重结晶。
柱层析的操作步骤和注意事项
柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。
柱子可以分为:加压,常压,减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝聚),以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大的噪音,而且时间长)。
以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行)。
非凡是在轻易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸,应该是粗长的最好。
柱子长了,相应的塔板数就高。
柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。
试想假如柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离的难度可想而知,恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而假如样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较轻易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保的说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)。
现在见到的柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体的选择要具体分析。
假如所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用2cm×20cm 的柱子);假如相差不到0.1,就要加大柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm 的,也可以减小淋洗剂的极性等等。
过柱子
过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。
柱子可以分为:加压,常压,减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结),以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大的噪音,而且时间长)。
以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行)。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸,应该是粗长的最好。
柱子长了,相应的塔板数就高。
柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离的难度可想而知,恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保的说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)。
现在见到的柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分rf在 0.2~0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用2cm×20cm的柱子);如果相差不到0.1,就要加大柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm的,也可以减小淋洗剂的极性等等。
有机化学过柱的实验方法和技巧
过柱的实验方法和技巧常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。
一:柱子可以分为:加压,常压,减压压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结),以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大的噪音,而且时间长)。
以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行)。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
二:关于柱子的尺寸应该是粗长的最好。
柱子长了,相应的塔板数就高。
柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离的难度可想而知,恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保的说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)。
现在见到的柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体的选择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用2cm×20cm的柱子);如果相差不到0.1,就要加大柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm的,也可以减小淋洗剂的极性等等。
过柱 操作技巧
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了,不过这 些成本相对于产品来说也许就不算什么了(不过溶剂回收重 蒸后也就减小了部分浪费)。
现在见到的柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样 品量的30~40倍,具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂 质分的比较开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质相差0.1以 上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用 2cm×20cm的柱子);如果相差不到0.1,就要加大柱子,我 觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm的,也可以减小淋洗剂 的极性等等关于无水无氧柱,适用于对氧,水敏感,易分解的 产品。
由于某些原因,用到的淋洗剂多是大包装的(便宜),我们
这里是用10升或25升的塑料桶装的,就要注意这些工业品的
纯度是较低的。经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质,
其他的杂质就可想而知了,所以在比较严格的柱分时就要对
溶剂重蒸。当然过原料时就可以免去这一步了,反正下面还
有
提
纯
的
方
法
。
另外溶剂在过柱子后最好也回收使用,一方面环保,另一方
21、实验的所有操作,最好先学习老师的标准,然后进行 自己操作,常常看到有学生连滴管都不知道如何拿,滴定管 (尤其是碱式滴定管)如何进行滴加。
22、乙醚做实验的时候,要注意排风和防火。 实验的所有操作,其实都是日积月累的过程,不要认为实
验是不重要的,恰恰相反,实验有些时候比理论更加的重 要。
面也能节省部分经费,缺点是要消耗一定的人工。这里要注
意的是,一般在过柱同时进行的是减压旋蒸,石油醚和乙酸
乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化,一般会使
得极性变大,在梯度淋洗时比较合适,正好极性越来越大了。
柱层析的操作步骤和注意事项
柱层析的操作步骤和注意事项(总5页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面,使用请直接删除柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。
柱子可以分为:加压,常压,减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝聚),以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大的噪音,而且时间长)。
以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行)。
非凡是在轻易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸,应该是粗长的最好。
柱子长了,相应的塔板数就高。
柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。
试想假如柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离的难度可想而知,恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而假如样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较轻易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保的说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)。
现在见到的柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体的选择要具体分析。
关于过柱的实验方法与技巧
无意中找到这个感觉很不错。
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我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。
1、柱子可以分为:加压,常压,减压压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结),以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大的噪音,而且时间长)。
以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行)。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
2、关于柱子的尺寸,应该是粗长的最好柱子长了,相应的塔板数就高。
柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离的难度可想而知,恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保的说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)。
现在见到的柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体的选择要具体分析。
过柱子的经验总结
过柱子的经验总结单一溶剂的极性大小顺序为:石油醚(小)→环己烷→四氯化碳→三氯乙烯→苯→甲苯→二氯甲烷→氯仿→乙醚→乙酸乙酯→乙酸甲酯→丙酮→正丙醇→甲醇→吡啶→乙酸(大)混合溶剂的极性顺序:苯∶氯仿(1+1)→环己烷∶乙酸乙酯(8+2)→氯仿∶丙酮(95+5)→苯∶丙酮(9+1)→苯∶乙酸乙酯(8+2)→氯仿∶乙醚(9+1)→苯∶甲醇(95+5)→苯∶乙醚(6+4)→环己烷∶乙酸乙酯(1+1)→氯仿∶乙醚(8+2)→氯仿∶甲醇(99+1)→苯∶甲醇(9+1)→氯仿∶丙酮(85+15)→苯∶乙醚(4+6)→苯∶乙酸乙酯(1+1)→氯仿∶甲醇(95+5)→氯仿∶丙酮(7+3)→苯∶乙酸乙酯(3+7)→苯∶乙醚(1+9)→乙醚∶甲醇(99+1)→乙酸乙酯∶甲醇(99+1)→苯∶丙酮(1+1)→氯仿∶甲醇(9+1)过柱子经验总结1, 选柱子:现在见到的柱子径高比一般在 1:5-10.2, 称量:100-300 目硅胶,称 30-70 倍于上样量;如果极难分,也可以用 100 倍量的硅胶书中写硅胶量是样品量的 30-40 倍,具体的选择要具体分析.如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分 Rf 在 0.2--0.4,杂质相差 0.1 以上) ,就可以少用硅胶.3, 选洗脱剂:一般淋洗剂是采用 TLC 分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂.极性小的用乙酸乙酯:石油醚系统;极性较大的用甲醇:氯仿系统;极性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系统.要使所需点在 Rf 值在 0.2-0.3 左右的比较好.常用溶剂的极性顺序:石油醚<环己烷/己烷<苯乙醚<氯仿<乙酸乙酯 <正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水. 一般把两种溶剂混合时, 采用高极性/低极性的体积比为 1/3 的混合溶剂. 拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸. 乙酸乙酯/石油醚= 4:1 可用 TLC 分开.乙酸乙酯和石油醚(60-90).4, 搅成匀浆:先把硅胶泡在烧杯中,用干硅胶体积一倍的溶剂泡,用超声波超半个小时,中间看到气泡时用玻璃棒搅一下.如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系,就用石油醚拌;如果洗脱剂是氯仿/醇体系,就用氯仿拌.5, 装柱: A, 用溶剂把柱子饱和一次, 因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量可能使产品分解. B,将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约 1/3 体积石油醚(氯仿),装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内.随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚(氯仿)将其冲入柱中. C,装柱时一定要保证无气泡,同时敲打柱体使柱体更均匀,紧凑,装毕,用洗脱液冲三次.6, 压实:装柱完后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定. 柱床约被压缩至 9/10 体积.无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂.7, 上样:干法湿法都可以. A,在硅胶上层加少量无水硫酸钠(以免样品被洗脱剂冲散)取适量样溶液上样.上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面.然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面. B,用少量的溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞打开,待溶剂层下降至石英砂面时,再加少量的低极性溶剂,然后再打开活塞,如此两三次,一般石英砂就基本是白色的了.加入淋洗剂,一开始不要加压,等溶样品的溶剂和样品层有一段距离(2~4cm 就够了) ,再加压,这样避免了溶剂(如二氯甲烷等)夹带样品快速下行.8, 过柱和收集:柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡.太低的洗脱强度并不好,推荐用梯度洗脱.收集的例子:10mg 上样量,1g 硅胶 H,0.5ml 收集馏分;1-2g 上样量,50g 硅胶(200-300 目) ,20-50ml 收集馏分.接收瓶一定要用可密封的.柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂,会被淋洗剂带到产品中的.9, 用少量的溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞打开.10,检测.要更多地使用专用喷显剂,如果仅用紫外灯,会损失较多产品,紫外的灵敏度一般比喷显剂底 1-2 个数量级.11, 送谱. 收集的产品旋干, 在送谱前通常需要重结晶. 如果样品太少或为液体, 可过一小凝胶柱,作为送谱前的最后纯化手段.可除去氢谱 1.5ppm 左右所谓的 "硅胶"峰.过柱子的经验常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
柱层析的操作步骤和注意事项
柱层析技术之巴公井开创作常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱.我们经常使用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱.由于柱分的经验成份太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮手.柱子可以分为:加压,常压,减压.压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产物收集的时间,可是会减低柱子的塔板数.所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,可是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的.减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,可是由于年夜量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝聚),以及有些比力易分解的工具可能得不到,而且还必需同时使用水泵抽气(很年夜的噪音,而且时间长).以前曾年夜量的过减压柱,对它有比力深厚的感情,可是自从检验考试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了.加压柱是一种比力好的方法,与常压柱类似,只不外外加压力使淋洗剂走的快些.压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行).非凡是在轻易分解的样品的分离中适用.压力不成过年夜,否则溶剂走的太快就会减低分离效果.个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比力适用的.关于柱子的尺寸,应该是粗长的最好.柱子长了,相应的塔板数就高.柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比力薄),这样相对的减小了分离的难度.试想假如柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离的难度可想而知,恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了.而假如样品层只有0.5厘米,那么各组分就比力轻易获得完全分离了.固然采纳粗年夜的柱子要牺牲比力多的硅胶和溶剂了,不外这些成秘闻对产物来说也许就不算什么了(有些不环保的说,不外溶剂回收重蒸后也就减小了部份浪费).现在见到的柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体的选择要具体分析.假如所需组分和杂质分的比力开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用2cm×20cm的柱子);假如相差不到0.1,就要加年夜柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm的,也可以减小淋洗剂的极性等等.关于无水无氧柱,适用于对氧,水敏感,易分解的产物.可以湿柱,也可以干柱.不外在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次,因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产物分解,究竟要分离的是敏感的东东,小心不为过.也是因为分离的工具比力敏感,所以接收瓶一定要用可密封的,遵循schlenk把持.至于是加压、常压、减压,随需而定.因为是schlenk把持,所以点板是个问题,假如样品是显色的,恭喜了,不用点板,直接看柱子上的色带就行了.假如样品无色,只好预备几十个schlenk瓶,一瓶一瓶的点,不外几次之后就知道样品在哪,也就可以省些了.像我以前过一根无水无氧柱,需要六个schlenk,现在只一个就能把所要的全收集到.无水无氧柱中用的比力多的是用氧化铝作固定相.因为硅胶中有年夜量的羟基裸露在外,很轻易是样品分解,非凡是金属有机化合物和含磷化合物.而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的,选择余地比力年夜,可是比硅胶要贵些.听说有个方法,就是用石英做柱子,然后用HF254做固定相,这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产物在哪里了,没有验证过.哪位做过可以提出来年夜家参详参详.--※ 关于湿法、干法上样.湿法省事,一般用淋洗剂溶解样品,也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等,但溶剂越少越好,否则溶剂就成了淋洗剂了.很多样品在上柱前是粘乎乎的,一般没关系.可是有的上样后在硅胶上又会析出,这一般都是比力年夜量的样品才会呈现,是因为硅胶对样品的吸附饱和,而样品自己又是比力好的固体才会发生,这就应该先重结晶,获得年夜部份的产物后再柱分,假如不能重结晶那就不论它了,直接过就是了,样品随着淋洗剂流动会溶解的.有些样品溶解性差,能溶解的溶剂又不能上柱(比如DMF,DMSO等,会随着溶剂一起走,显色是一个很长的脱尾),这时就必需用干法上柱了.样品和硅胶的量有一种说法是1:1,我觉得是越少越好,可是要保证在旋干后,不能看到明显的固体颗粒(那说明有的样品没有吸附在硅胶上).溶剂的选择.固然是最廉价,最平安,最环保的了.所以年夜多选用石油醚,乙酸乙酯.文献中有写用正己烷的,太贵了,除非非凡需要不要用否则银子哗哗的,流的比淋洗剂还快,不外因为极性很小,有时还是非它不成.乙醚也可以用,可是就是轻易睡觉,注重坚持清醒别让溶剂流干了,那样柱子也就不爽了.二氯甲烷也有用的,可是要知道,它和硅胶的吸附是一个放热过程,所以夏天的时候经常会在柱子里发生气泡,天气冷的时候会好一些.甲醇,据说能溶解部份的硅胶,所以产物假如想过元素分析的话要留神,应该经过后继处置,比如说重结晶等.其他的溶剂用的相对较少,要依个人的分歧需要选择了.由于某些原因,用到的淋洗剂多是年夜包装的(廉价嘛),我们这里是用10升或25升的塑料桶装的,就要注重这些工业品的纯度是较低的.经常能够从送来的年夜桶底部看见有色的杂质,其他的杂质就可想而知了,所以在比力严格的柱分时就要对溶剂重蒸.固然过原料时就可以免去这一步了,反正下面还有提纯的方法.另外溶剂在过柱子后最好也回收使用,一方面环保,另一方面也能节省部份经费,缺点是要消耗一定的人工.这里要注重的是,一般在过柱同时进行的是减压旋蒸,石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的分歧会招致极性的变动,一般会使得极性变年夜,在梯度淋洗时比力合适,正好极性越来越年夜了.在过完柱子后,溶剂最后回收要采纳常压,因为在减压旋蒸时会有部份低沸点的杂质一起出来,常压时就会减少这种现象,假如杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了.关于把持问题.1 装柱.柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂,会被淋洗剂带到产物中的,可以采纳四氟节门的.干法和湿法装柱觉得没什么区别,只要能把柱子装实就行.装完的柱子应该要适度的紧密(太密了淋洗剂走的太慢),一定要均匀(否则样品就会从一侧斜着下来).书中写的都是不能见到气泡,我觉得在年夜大都情况下有些小气泡没太年夜的影响,一加压气泡就全下来了.固然假如你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了.可是柱子更忌讳的是开裂,甭管竖的还是横的,城市影响分离效果,甚至作废!2 加样.用少量的溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞翻开,待溶剂层下降至石英砂面时,再加少量的低极性溶剂,然后俅蚩钊绱肆饺危话闶⑸熬突臼前咨牧恕?加入淋洗剂,一开始不要加压,等溶样品的溶剂和样品层有一段距离(2~4cm就够了),再加压,这样防止了溶剂(如二氯甲烷等)夹带样品快速下行.3 淋洗剂的选择.感觉上要使所需点在rf0.2~0.3左右的比力好.不要认为在板上爬高了分的比力开,过柱子就用那种极性,假如rf在0.6,即使相差0.2也不轻易在柱子上分开,因为柱子是一个屡次爬板的状态,可以通过公式的比力:0.6/0.8一次的分离度,肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方年夜.4 样品的收集.用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡.所以假如样品与硅胶的吸附比较强的话,就不轻易流出.这样就会发生,后面的点先出,而前面的点后出.这时可以采纳氧化铝作固定相.另外,收集的试管年夜小要以样品量而定,非凡是小量样品,假如用年夜试管,可能一根就收到了三个样品,wuwu.假如都用小试管那工作量又太年夜.5 最后的处置.柱分后的产物,由于使用了年夜量的溶剂,其中的杂质也会累积到产物中,所以假如想送分析,最好用少量的溶剂洗涤一下,因为年夜部份的杂质是溶在溶剂里的,一洗基本就没了,需要时进行重结晶.另外,再过柱的时候,有时会呈现气泡,一是和使用的溶剂有关,假如是易挥发的溶剂,如乙醚、二氯甲烷等,在室温稍高的情况下,很轻易呈现这种现象,因此,在室温高的时候, 可以选择沸点较高,挥发相对小的溶剂.还有,使用混合溶剂时,使用的两种溶剂的沸点应该相差不年夜,如:乙酸乙酯和石油醚(60~90),而乙醚却要选择30-60的石油醚.二是:不论是用带砂板的还是塞棉花的,在装柱之前,都要将空气用加压的方法将空气排干,这样就可防止柱中有空气!过柱子需要耐心,不要着急.。
实验室常规操作经验 关于过柱的实验方法和技巧 常说的过柱子应该
实验室常规操作经验关于过柱的实验方法和技巧常说的过柱子应该实验室常规操作经验关于过柱的实验方法和技巧常说的过柱子应该叫柱层析分离也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多所以下面我就几年来过柱的体会写些心得希望能有所帮助。
注意有机溶剂对身体特有害别是心肺肝脏等所有过柱操作都要在通风橱里进行柱子可以分为加压常压减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度减少产品收集的时间但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候常压柱是效率最高的但是时间也最长比如天然化合物的分离一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量感觉能够节省一半甚至更多但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发有时在柱子外面有水汽凝结以及有些比较易分解的东西可能得不到而且还必须同时使用水泵抽气很大的噪音而且时间长。
以前曾经大量的过减压柱对它有比较深厚的感情但是自从尝试了加压后就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法与常压柱类似只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气双连球或者小气泵给鱼缸供气的就行。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大不然个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是溶剂走的太快就会减低分离效果。
比较适用的。
关于柱子的尺寸应该是粗长的最好。
柱子长了相应的塔板数就高。
柱子粗了上样后样品的原点就小反映在柱子上就是样品层比较薄这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米而样品就有二厘米那么分离的难度可想而知恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有 0.5 厘米那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了有些不环保的说不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费。
现在见到的柱子径高比一般在 1510书中写硅胶量是样品量的 3040 倍具体的选择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开是指在所需组分 rf 在 0.20.4杂质相差 0.1 以上就可以少用硅胶用小柱子例如 200 毫克的样品用2cm×20cm 的柱子如果相差不到 0.1就要加大柱子我觉得可以增加柱子的直径比如用 3cm 的也可以减小淋洗剂的极性等等。
过柱子
一:关于柱子的尺寸应该是粗长的最好。
柱子长了,相应的塔板数就高。
柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。
如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用2cm×20c m的柱子);如果相差不到0.1,就要加大柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm的,也可以减小淋洗剂的极性等等。
二、淋洗剂的选择:在我进行过柱子之前,我们要进行点板进行分析。
我们通过调节展开剂的极性,即以不同比例的乙酸乙酯和正己烷的体积比进行混合,使我们要的产物点的所需组分rf在0.2~0.4,杂质相差0.1以上,这是我们就可以进行过柱子了。
过柱子的淋洗剂的极性要比展开剂的极性小一倍以上,在过柱子的过程中可以根据需要加大极性。
三:关于操作问题1、装柱,柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂,会被淋洗剂带到产品中的,可以采用四氟节门的。
干法和湿法装柱觉得没什么区别,只要能把柱子装实就行。
装完的柱子应该要适度的紧密(太密了淋洗剂走的太慢),一定要均匀(不然样品就会从一侧斜着下来)。
书中写的都是不能见到气泡,我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响,一加压气泡就全下来了。
当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。
但是柱子更忌讳的是开裂,甭管竖的还是横的,都会影响分离效果,甚至作废!2、样品的收集,收集的试管大小要以样品量而定,特别是小量样品,可以用试管进行收集,中量的样品,我们可以用小的锥形瓶来收集。
通过点板跟踪确定各个组分的物质,然后把相同成分的试管的淋洗液进行集中。
爬大板也可以介绍一下。
离子色谱 淋洗液种类
离子色谱淋洗液种类
离子色谱是一种分离和分析离子化合物的方法,其中淋洗液的种类对分离效果起着至关重要的作用。
淋洗液的种类通常包括以下几种:
1. 离子色谱柱常用的淋洗液包括盐溶液和缓冲液。
盐溶液主要用于提供离子强度,而缓冲液则用于控制溶液的pH值。
常见的盐溶液包括氢氧化钠、氢氧化钾等,而常见的缓冲液包括琥珀酸/氢氧化钠缓冲液、磷酸盐缓冲液等。
2. 有机溶剂也常被用作离子色谱的淋洗液,特别是对于一些有机物的分离和分析。
甲醇、乙腈等有机溶剂常被用于离子色谱中,可以提高分离效果。
3. 另外,离子色谱中还会用到去离子水或超纯水作为淋洗液。
这种淋洗液适用于一些对离子强度要求较高的分析,可以减少其他离子对分析结果的干扰。
总的来说,淋洗液的种类取决于待分离和分析的离子化合物的性质,以及分析的具体要求。
选择合适的淋洗液种类可以提高离子
色谱分析的准确性和灵敏度。
同时,在选择淋洗液时,也需要考虑淋洗液对仪器的影响以及对环境的影响,确保实验的安全和可持续性。
过柱子的原理与方法
过柱子的原理与方法之老阳三干创作标签:过柱子硅胶原理方法常说的过柱子应该叫柱层析分离, 也叫柱色谱.我们经常使用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱., 硅胶层析是根据物质在硅胶上的吸附力分歧而使物质分离, 一般情况下极性较年夜的物质易被硅胶吸附, 极性较弱的物质不容易被硅胶吸附, 整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程.硅胶层析主要用于石油产物的精制, 脱除芳烃物质或用于中草药有效成份的分离提纯, 高纯度物质的制备等.硅胶层析性状:该产物为白色均匀颗粒, 主要成份为二氧化硅, 由优质硅胶为原料加工制成.其主要特点是能通过对混合物质中的分歧成份吸附保管时间的不同, 到达分离提纯的目的.依其纯度又分为工业级粗孔柱层析硅胶、试剂级柱层析硅胶.用途:主要用于石油产物的精制, 脱除芳烃物质或用于中草药有效成份的分离提纯, 高纯度物质的制备等.硅胶概况结构概述在色谱和工业水处置领域中, 无定形硅胶已获得了广泛的应用, 它具有多孔的无定形结构, 不发生任何x 射线衍射[1,4].硅胶的概况存在着硅醇基团(sioh)和流露的硅氧烷键(siosi).硅醇基团是强吸附的极性基团, 而硅氧烷键是疏水基团.硅氧烷键上的δ键被dπpπ作用而加强, 氧原子上的孤对电子介入π作用, 不能介入给体与受体间的相互作用, 不能形成氢键.scott和kucera 证实硅氧烷基团几乎不吸附极性溶剂分子.然而, 由于硅氧烷键的疏水作用性, 可以吸附某些非极性溶剂分子.对硅胶改性而言, 硅醇基比硅氧烷基重要很多.硅醇基团可以孤立、成对(双生)和缔合(连位)等分歧的方式存在于硅胶概况.最近研究标明, 不单两个或两个以上的缔合硅醇基团可以形成键合对, 甚至成对硅醇基团也可以形成键合对.硅胶概况的结构可以通过许多方法进行测定.一般情况下, 随着比概况积的增加, 硅胶概况上硅醇基团的浓度略有降低.通常硅醇含量的测定方法有同位素交换法、滴定法、光谱法和烷基铝法等.nawrock[1]报道了用同位素交换法测定硅胶概况的硅醇基浓度是8.0±1.0μmol/m2, 而且这个数值经常被视为硅胶的物理化学常数.硅醇基团具有明显的酸性, 测定的pka值是7.1.通过对硅胶概况的结构分析, 可知硅胶概况硅醇基的类型、浓度和概况分布城市影响所制备键合相的性能, 而硅胶的预处置则可以改变概况硅醇类型的分布, 提高概况的缔合硅醇的含量, 改善硅胶概况键合相的性能.硅胶柱层析技术硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力分歧而获得分离, 一般情况下极性较年夜的物质易被硅胶吸附, 极性较弱的物质不容易被硅胶吸附, 整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程.硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯:石油醚洗脱;极性较年夜的用甲醇:氯仿洗脱;极性年夜的用甲醇:水:正丁醇:醋酸洗脱;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析惯用方法1.称量.00目硅胶, 称3070倍于上样量;如果极难分, 也可以用100倍量的硅胶H.干硅胶的视密度在0.4左右, 所以要称40g硅胶, 用烧杯量100ml也可以.2.搅成匀浆.加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充沛搅拌.如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系, 就用石油醚拌;如果洗脱剂是氯仿/醇体系, 就用氯仿拌.如果不能搅成匀浆, 说明溶剂中含水量太年夜, 尤其是乙酸乙酯/丙酮, 如果不与水配伍走分配色谱的话, 必需预先用无水硫酸钠久置干燥.氯仿用无水氯化钙干燥, 以除去1%的醇.如果样品对酸敏感, 不能用氯仿体系过柱.3.装柱.将柱底用棉花塞紧, 不用用海沙, 加入约1/3体积石油醚(氯仿), 装上蓄液球, 翻开柱下活塞, 将匀浆一次倾入蓄液球内.随着沉降, 会有一些硅胶沾在蓄液球内, 用石油醚(氯仿)将其冲入柱中.4.压实.沉降完成后, 加入更多的石油醚, 用双联球或气泵加压, 直至流速恒定.柱床约被压缩至9/10体积.无论走常压柱或加压柱, 都应进行这一步, 可使分离度提高很多, 且可以防止过柱时由于柱床萎缩发生开裂.5.上样.干法湿法都可以.海沙是没需要的.上样后, 加入一些洗脱剂, 再将一团脱脂棉塞至接近硅胶概况.然后就可以放心地加入年夜量洗脱剂, 而不会冲坏硅胶概况.6.过柱和收集.柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡.太低的洗脱强度其实欠好, 推荐用梯度洗脱.收集的例子:10mg上样量, 1g硅胶H, 0.5ml收一馏分;12g上样量, 50g硅胶(00目), 2050ml收一馏分.7.检测.要更多地使用专用喷显剂, 如果仅用紫外灯, 会损失较多产物, 紫外的灵敏度一般比喷显剂底12个数量级.8.送谱.收集的产物旋干, 在送谱前通常需要重结晶.如果样品太少或为液体, 可过一小凝胶柱, 作为送谱前的最后纯化手段.可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰.注意事项1.先根据TLC方法筛选好洗脱剂, 使两相邻物质Rf值之差最年夜化2.将柱子必需装平整、均匀柱层析分离的实验方法和技巧1B= vrGq一:柱子可以分为:加压, 常压, 减压压力可以增加淋洗剂的流动速度, 减少产物收集的时间, 可是会减低柱子的塔板数.所以其他条件相同的时候, 常压柱是效率最高的, 可是时间也最长, 比如天然化合物的分离, 一个柱子几个月也是有的.减压柱能够减少硅胶的使用量, 感觉能够节省一半甚至更多, 可是由于年夜量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结), 以及有些比力易分解的工具可能得不到, 而且还必需同时使用水泵抽气(很年夜的噪音, 而且时间长).以前曾年夜量的过减压柱, 对它有比力深厚的感情, 可是自从检验考试了加压后, 就几乎再也没动过减压的念头了.加压柱是一种比力好的方法, 与常压柱类似, 只不外外加压力使淋洗剂走的快些.压力的提供可以是压缩空气, 双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行).特别是在容易分解的样品的分离中适用.压力不成过年夜, 否则溶剂走的太快就会减低分离效果.个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比力适用的.三:关于无水无氧柱适用于对氧, 水敏感, 易分解的产物, 可以湿柱, 也可以干柱.不外在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次, 因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产物分解, 究竟要分离的是敏感的东东, 小心不为过.也是因为分离的工具比力敏感, 所以接收瓶一定要用可密封的, 遵循schlenk把持.至于是加压、常压、减压, 随需而定.因为是schlenk把持, 所以点板是个问题, 如果样品是显色的, 恭喜了, 不用点板, 直接看柱子上的色带就行了.如果样品无色, 只好准备几十个schlenk瓶, 一瓶一瓶的点, 不外几次之后就知道样品在哪, 也就可以省些了.像我以前过一根无水无氧柱, 需要六个schlenk, 现在只一个就能把所要的全收集到.无水无氧柱中用的比力多的是用氧化铝作固定相.因为硅胶中有年夜量的羟基裸露在外, 很容易是样品分解, 特别是金属有机化合物和含磷化合物.而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的, 选择余地比力年夜, 可是比硅胶要贵些.听说有个方法, 就是用石英做柱子, 然后用HF254做固定相, 这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产物在哪里了, 没有验证过.哪位做过可以提出来年夜家参详参详.四:关于湿法、干法上样湿法省事, 一般用淋洗剂溶解样品, 也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等, 但溶剂越少越好, 否则溶剂就成了淋洗剂了.很多样品在上柱前是粘乎乎的, 一般没关系.可是有的上样后在硅胶上又会析出, 这一般都是比力年夜量的样品才会呈现, 是因为硅胶对样品的吸附饱和, 而样品自己又是比力好的固体才会发生, 这就应该先重结晶, 获得年夜部份的产物后再柱分, 如果不能重结晶, 那就不论它了, 直接过就是了, 样品随着淋洗剂流动会溶解的.有些样品溶解性差, 能溶解的溶剂又不能上柱(比如DMF,DMSO等, 会随着溶剂一起走, 显色是一个很长的脱尾), 这时就必需用干法上柱了.样品和硅胶的量有一种说法是1:1, 我觉得是越少越好, 可是要保证在旋干后, 不能看到明显的固体颗粒(那说明有的样品没有吸附在硅胶上).五:溶剂的选择固然是最廉价, 最平安, 最环保的了.所以年夜多选用石油醚, 乙酸乙酯.文献中有写用正己烷的, 太贵了, 除非特别需要不要用否则银子哗哗的, 流的比淋洗剂还快, 不外因为极性很小, 有时还是非它不成.乙醚也可以用, 可是就是容易睡觉, 注意坚持清醒别让溶剂流干了, 那样柱子也就不爽了.二氯甲烷也有用的, 可是要知道, 它和硅胶的吸附是一个放热过程, 所以夏天的时候经常会在柱子里发生气泡, 天气冷的时候会好一些.甲醇据说能溶解部份的硅胶, 所以产物如果想过元素分析的话要留神, 应该经过后继处置, 比如说重结晶等.其他的溶剂用的相对较少, 要依个人的分歧需要选择了. Q7&Yy25由于某些原因, 用到的淋洗剂多是年夜包装的(廉价嘛), 我们这里是用10升或25升的塑料桶装的, 就要注意这些工业品的纯度是较低的.经常能够从送来的年夜桶底部看见有色的杂质, 其他的杂质就可想而知了, 所以在比力严格的柱分时就要对溶剂重蒸.固然过原料时就可以免去这一步了, 反正下面还有提纯的方法.另外溶剂在过柱子后最好也回收使用, 一方面环保, 另一方面也能节省部份经费, 缺点是要消耗一定的人工.这里要注意的是, 一般在过柱同时进行的是减压旋蒸, 石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的分歧会招致极性的变动, 一般会使得极性变年夜, 在梯度淋洗时比力合适, 正好极性越来越年夜了.在过完柱子后, 溶剂最后回收要采纳常压, 因为在减压旋蒸时会有部份低沸点的杂质一起出来, 常压时就会减少这种现象, 如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了.六:关于把持问题1、装柱柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂, 会被淋洗剂带到产物中的, 可以采纳四氟节门的.干法和湿法装柱觉得没什么区别, 只要能把柱子装实就行.装完的柱子应该要适度的紧密(太密了淋洗剂走的太慢), 一定要均匀(否则样品就会从一侧斜着下来).书中写的都是不能见到气泡, 我觉得在年夜大都情况下有些小气泡没太年夜的影响, 一加压气泡就全下来了.固然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了.可是柱子更忌讳的是开裂, 甭管竖的还是横的, 城市影响分离效果, 甚至作废!2、加样用少量的溶剂溶样品加样, 加完后将下面的活塞翻开, 待溶剂层下降至石英砂面时, 再加少量的低极性溶剂, 然后再翻开活塞, 如此两三次, 一般石英砂就基本是白色的了.加入淋洗剂, 一开始不要加压, 等溶样品的溶剂和样品层有一段距离(2~4cm就够了), 再加压, 这样防止了溶剂(如二氯甲烷等)夹带样品快速下行.3、淋洗剂的选择感觉上要使所需点在rf0.2~0.3左右的比力好.不要认为在板上爬高了分的比力开, 过柱子就用那种极性, 如果rf在0.6, 即使相差0.2也不容易在柱子上分开, 因为柱子是一个屡次爬板的状态, 可以通过公式的比力:0.6/0.8一次的分离度, 肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方年夜.4、样品的收集用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡.所以如果样品与硅胶的吸附比力强的话, 就不容易流出.这样就会发生, 后面的点先出, 而前面的点后出.这时可以采纳氧化铝作固定相.另外, 收集的试管年夜小要以样品量而定, 特别是小量样品, 如果用年夜试管, 可能一根就收到了三个样品, wuwu.如果都用小试管那工作量又太年夜.5、最后的处置柱分后的产物, 由于使用了年夜量的溶剂, 其中的杂质也会累积到产物中, 所以如果想送分析, 最好用少量的溶剂洗涤一下, 因为年夜部份的杂质是溶在溶剂里的, 一洗基本就没了, 需要时进行重结晶.另外, 再过柱的时候, 有时会呈现气泡, 一是和使用的溶剂有关, 如果是易挥发的溶剂, 如乙醚、二氯甲烷等, 在室温稍高的情况下, 很容易呈现这种现象, 因此, 在室温高的时候, 可以选择沸点较高, 挥发相对小的溶剂.还有, 使用混合溶剂时, 使用的两种溶剂的沸点应该相差不年夜, 如:乙酸乙酯和石油醚(60~90),而乙醚却要选择30-60的石油醚.二是:不论是用带砂板的还是塞棉花的, 在装柱之前, 都要将空气用加压的方法将空气排干, 这样就可防止柱中有空气!。
我的过硅胶柱的经验
资料范本本资料为word版本,可以直接编辑和打印,感谢您的下载我的过硅胶柱的经验地点:__________________时间:__________________说明:本资料适用于约定双方经过谈判,协商而共同承认,共同遵守的责任与义务,仅供参考,文档可直接下载或修改,不需要的部分可直接删除,使用时请详细阅读内容一、装柱装柱子(添硅胶)时,常用的有两种方法:即湿法装柱和干法装柱,二者各有优劣。
不论干法还是湿法,硅胶(称为固定相更为广义)的上表面一定要平整,并且硅胶(固定相)的高度一般为15cm左右(长度没有绝对之说,根据自身情况而定,制备的大柱可以长达一米),太短了可能分离效果不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压(土方法可以用养鱼的氧气泵加压或是用氮气,当然不加压也可以)用淋洗剂"走柱子",本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。
(我一般都用湿法装柱)干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧(湿法也要敲的,效果好点),至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实(一般柱子不敢用油泵抽,怕把柱子抽裂了)。
接着是用淋洗剂"走柱子",一般淋洗剂是采用TLC 分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
通常上面加压,下面再用油泵抽,这样可以加快速度。
干法装柱较方便,但最大的缺陷在于"走柱子"时,由于溶剂和硅胶之间的吸附放热(可以用手摸柱子明显感觉到)(梯度洗脱时,湿法装柱也会出现该情况,比较不好处理,可以缓慢改变溶剂,且置于通风处),容易产生气泡,这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚(用乙醚最最明显),二氯甲烷更为明显。
虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉,但是,一旦撤去压力,如在上样、加溶剂等操作的时候,气泡就会释放出来,严重时,整个柱子变花,样品不可能平整地通过,当然也就谈不上分离了。
过柱淋洗剂选择
柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。
这两项技术掌握与否,对于提高实验的效率至关重要。
常见的例子是:在柱层析时,由于层析柱中的硅胶填料装得不均匀(没有填严实),使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花,导致分离效果不好。
更常见的例子是:层析柱虽然装得不错,但是由于淋洗剂选择不恰当,结果导致几十毫克产品,用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。
分离同样的东西,熟手可能只需要半个小时,而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。
由此可见,这两项技术掌握与否,对于提高工作效率,减轻工作量,减少有机溶剂的使用,从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。
柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。
而淋洗剂的选择则是通过TLC 确定。
这里要指出的一点是:TLC的作用除了跟踪反应进程,检测试剂和原料纯度外,一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。
首先谈柱层析:1:装柱子(添硅胶)时,有两种方法:即湿法装柱和干法装柱,二者各有优劣。
不论干法还是湿法,硅胶(固定相)的上表面一定要平整,并且硅胶(固定相)的高度一般为15cm左右,太短了可能分离效果不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱:是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压用淋洗剂“走柱子”,本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。
干法装柱:则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧,至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实。
接着是用淋洗剂“走柱子”,一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
通常上面加压,下面再用油泵抽,这样可以加快速度。
干法装柱较方便,但最大的缺陷在于“走柱子”时,由于溶剂和硅胶之间的吸附放热(可以用手摸柱子明显感觉到),容易产生气泡,这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚,二氯甲烷更为明显。
虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉,但是,一旦撤去压力,如在上样、加溶剂等操作的时候,气泡就会释放出来,严重时,整个柱子变花,样品不可能平整地通过,当然也就谈不上分离了。
层析柱的干法湿法填充及相关知识
层析柱装填及相关常识注:常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。
1、柱子可以分为:加压,常压,减压压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结),以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大的噪音,而且时间长)。
以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行)。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
2、关于柱子的尺寸,应该是粗长的最好柱子长了,相应的塔板数就高。
柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离的难度可想而知,恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5 厘米,那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保的说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)。
现在见到的柱子径高比一般在1: 5〜10,书中写硅胶量是样品量的30〜40 倍,具体的选择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分rf 在0.2〜0.4,杂质相差0.1 以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200 毫克的样品,用2cm K20cm的柱子);如果相差不到0.1,就要加大柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm 的,也可以减小淋洗剂的极性等等。
过柱子的原理与方法
过柱子的原理与方法之马矢奏春创作标签:过柱子硅胶原理方法常说的过柱子应该叫柱层析分离, 也叫柱色谱.我们经常使用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱., 硅胶层析是根据物质在硅胶上的吸附力分歧而使物质分离, 一般情况下极性较年夜的物质易被硅胶吸附, 极性较弱的物质不容易被硅胶吸附, 整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程.硅胶层析主要用于石油产物的精制, 脱除芳烃物质或用于中草药有效成份的分离提纯, 高纯度物质的制备等.硅胶层析性状:该产物为白色均匀颗粒, 主要成份为二氧化硅, 由优质硅胶为原料加工制成.其主要特点是能通过对混合物质中的分歧成份吸附保管时间的不同, 到达分离提纯的目的.依其纯度又分为工业级粗孔柱层析硅胶、试剂级柱层析硅胶.用途:主要用于石油产物的精制, 脱除芳烃物质或用于中草药有效成份的分离提纯, 高纯度物质的制备等.硅胶概况结构概述在色谱和工业水处置领域中, 无定形硅胶已获得了广泛的应用, 它具有多孔的无定形结构, 不发生任何x 射线衍射[1,4].硅胶的概况存在着硅醇基团(sioh)和流露的硅氧烷键(siosi).硅醇基团是强吸附的极性基团, 而硅氧烷键是疏水基团.硅氧烷键上的δ键被dπpπ作用而加强, 氧原子上的孤对电子介入π作用, 不能介入给体与受体间的相互作用, 不能形成氢键.scott和kucera 证实硅氧烷基团几乎不吸附极性溶剂分子.然而, 由于硅氧烷键的疏水作用性, 可以吸附某些非极性溶剂分子.对硅胶改性而言, 硅醇基比硅氧烷基重要很多.硅醇基团可以孤立、成对(双生)和缔合(连位)等分歧的方式存在于硅胶概况.最近研究标明, 不单两个或两个以上的缔合硅醇基团可以形成键合对, 甚至成对硅醇基团也可以形成键合对.硅胶概况的结构可以通过许多方法进行测定.一般情况下, 随着比概况积的增加, 硅胶概况上硅醇基团的浓度略有降低.通常硅醇含量的测定方法有同位素交换法、滴定法、光谱法和烷基铝法等.nawrock[1]报道了用同位素交换法测定硅胶概况的硅醇基浓度是8.0±1.0μmol/m2, 而且这个数值经常被视为硅胶的物理化学常数.硅醇基团具有明显的酸性, 测定的pka值是7.1.通过对硅胶概况的结构分析, 可知硅胶概况硅醇基的类型、浓度和概况分布城市影响所制备键合相的性能, 而硅胶的预处置则可以改变概况硅醇类型的分布, 提高概况的缔合硅醇的含量, 改善硅胶概况键合相的性能.硅胶柱层析技术硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力分歧而获得分离, 一般情况下极性较年夜的物质易被硅胶吸附, 极性较弱的物质不容易被硅胶吸附, 整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程.硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯:石油醚洗脱;极性较年夜的用甲醇:氯仿洗脱;极性年夜的用甲醇:水:正丁醇:醋酸洗脱;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析惯用方法1.称量.00目硅胶, 称3070倍于上样量;如果极难分, 也可以用100倍量的硅胶H.干硅胶的视密度在0.4左右, 所以要称40g硅胶, 用烧杯量100ml也可以.2.搅成匀浆.加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充沛搅拌.如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系, 就用石油醚拌;如果洗脱剂是氯仿/醇体系, 就用氯仿拌.如果不能搅成匀浆, 说明溶剂中含水量太年夜, 尤其是乙酸乙酯/丙酮, 如果不与水配伍走分配色谱的话, 必需预先用无水硫酸钠久置干燥.氯仿用无水氯化钙干燥, 以除去1%的醇.如果样品对酸敏感, 不能用氯仿体系过柱.3.装柱.将柱底用棉花塞紧, 不用用海沙, 加入约1/3体积石油醚(氯仿), 装上蓄液球, 翻开柱下活塞, 将匀浆一次倾入蓄液球内.随着沉降, 会有一些硅胶沾在蓄液球内, 用石油醚(氯仿)将其冲入柱中.4.压实.沉降完成后, 加入更多的石油醚, 用双联球或气泵加压, 直至流速恒定.柱床约被压缩至9/10体积.无论走常压柱或加压柱, 都应进行这一步, 可使分离度提高很多, 且可以防止过柱时由于柱床萎缩发生开裂.5.上样.干法湿法都可以.海沙是没需要的.上样后, 加入一些洗脱剂, 再将一团脱脂棉塞至接近硅胶概况.然后就可以放心地加入年夜量洗脱剂, 而不会冲坏硅胶概况.6.过柱和收集.柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡.太低的洗脱强度其实欠好, 推荐用梯度洗脱.收集的例子:10mg上样量, 1g硅胶H, 0.5ml收一馏分;12g上样量, 50g硅胶(00目), 2050ml收一馏分.7.检测.要更多地使用专用喷显剂, 如果仅用紫外灯, 会损失较多产物, 紫外的灵敏度一般比喷显剂底12个数量级.8.送谱.收集的产物旋干, 在送谱前通常需要重结晶.如果样品太少或为液体, 可过一小凝胶柱, 作为送谱前的最后纯化手段.可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰.注意事项1.先根据TLC方法筛选好洗脱剂, 使两相邻物质Rf值之差最年夜化2.将柱子必需装平整、均匀柱层析分离的实验方法和技巧1B= vrGq一:柱子可以分为:加压, 常压, 减压压力可以增加淋洗剂的流动速度, 减少产物收集的时间, 可是会减低柱子的塔板数.所以其他条件相同的时候, 常压柱是效率最高的, 可是时间也最长, 比如天然化合物的分离, 一个柱子几个月也是有的.减压柱能够减少硅胶的使用量, 感觉能够节省一半甚至更多, 可是由于年夜量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结), 以及有些比力易分解的工具可能得不到, 而且还必需同时使用水泵抽气(很年夜的噪音, 而且时间长).以前曾年夜量的过减压柱, 对它有比力深厚的感情, 可是自从检验考试了加压后, 就几乎再也没动过减压的念头了.加压柱是一种比力好的方法, 与常压柱类似, 只不外外加压力使淋洗剂走的快些.压力的提供可以是压缩空气, 双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行).特别是在容易分解的样品的分离中适用.压力不成过年夜, 否则溶剂走的太快就会减低分离效果.个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比力适用的.三:关于无水无氧柱适用于对氧, 水敏感, 易分解的产物, 可以湿柱, 也可以干柱.不外在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次, 因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产物分解, 究竟要分离的是敏感的东东, 小心不为过.也是因为分离的工具比力敏感, 所以接收瓶一定要用可密封的, 遵循schlenk把持.至于是加压、常压、减压, 随需而定.因为是schlenk把持, 所以点板是个问题, 如果样品是显色的, 恭喜了, 不用点板, 直接看柱子上的色带就行了.如果样品无色, 只好准备几十个schlenk瓶, 一瓶一瓶的点, 不外几次之后就知道样品在哪, 也就可以省些了.像我以前过一根无水无氧柱, 需要六个schlenk, 现在只一个就能把所要的全收集到.无水无氧柱中用的比力多的是用氧化铝作固定相.因为硅胶中有年夜量的羟基裸露在外, 很容易是样品分解, 特别是金属有机化合物和含磷化合物.而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的, 选择余地比力年夜, 可是比硅胶要贵些.听说有个方法, 就是用石英做柱子, 然后用HF254做固定相, 这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产物在哪里了, 没有验证过.哪位做过可以提出来年夜家参详参详.四:关于湿法、干法上样湿法省事, 一般用淋洗剂溶解样品, 也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等, 但溶剂越少越好, 否则溶剂就成了淋洗剂了.很多样品在上柱前是粘乎乎的, 一般没关系.可是有的上样后在硅胶上又会析出, 这一般都是比力年夜量的样品才会呈现, 是因为硅胶对样品的吸附饱和, 而样品自己又是比力好的固体才会发生, 这就应该先重结晶, 获得年夜部份的产物后再柱分, 如果不能重结晶, 那就不论它了, 直接过就是了, 样品随着淋洗剂流动会溶解的.有些样品溶解性差, 能溶解的溶剂又不能上柱(比如DMF,DMSO等, 会随着溶剂一起走, 显色是一个很长的脱尾), 这时就必需用干法上柱了.样品和硅胶的量有一种说法是1:1, 我觉得是越少越好, 可是要保证在旋干后, 不能看到明显的固体颗粒(那说明有的样品没有吸附在硅胶上).五:溶剂的选择固然是最廉价, 最平安, 最环保的了.所以年夜多选用石油醚, 乙酸乙酯.文献中有写用正己烷的, 太贵了, 除非特别需要不要用否则银子哗哗的, 流的比淋洗剂还快, 不外因为极性很小, 有时还是非它不成.乙醚也可以用, 可是就是容易睡觉, 注意坚持清醒别让溶剂流干了, 那样柱子也就不爽了.二氯甲烷也有用的, 可是要知道, 它和硅胶的吸附是一个放热过程, 所以夏天的时候经常会在柱子里发生气泡, 天气冷的时候会好一些.甲醇据说能溶解部份的硅胶, 所以产物如果想过元素分析的话要留神, 应该经过后继处置, 比如说重结晶等.其他的溶剂用的相对较少, 要依个人的分歧需要选择了. Q7&Yy25由于某些原因, 用到的淋洗剂多是年夜包装的(廉价嘛), 我们这里是用10升或25升的塑料桶装的, 就要注意这些工业品的纯度是较低的.经常能够从送来的年夜桶底部看见有色的杂质, 其他的杂质就可想而知了, 所以在比力严格的柱分时就要对溶剂重蒸.固然过原料时就可以免去这一步了, 反正下面还有提纯的方法.另外溶剂在过柱子后最好也回收使用, 一方面环保, 另一方面也能节省部份经费, 缺点是要消耗一定的人工.这里要注意的是, 一般在过柱同时进行的是减压旋蒸, 石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的分歧会招致极性的变动, 一般会使得极性变年夜, 在梯度淋洗时比力合适, 正好极性越来越年夜了.在过完柱子后, 溶剂最后回收要采纳常压, 因为在减压旋蒸时会有部份低沸点的杂质一起出来, 常压时就会减少这种现象, 如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了.六:关于把持问题1、装柱柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂, 会被淋洗剂带到产物中的, 可以采纳四氟节门的.干法和湿法装柱觉得没什么区别, 只要能把柱子装实就行.装完的柱子应该要适度的紧密(太密了淋洗剂走的太慢), 一定要均匀(否则样品就会从一侧斜着下来).书中写的都是不能见到气泡, 我觉得在年夜大都情况下有些小气泡没太年夜的影响, 一加压气泡就全下来了.固然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了.可是柱子更忌讳的是开裂, 甭管竖的还是横的, 城市影响分离效果, 甚至作废!2、加样用少量的溶剂溶样品加样, 加完后将下面的活塞翻开, 待溶剂层下降至石英砂面时, 再加少量的低极性溶剂, 然后再翻开活塞, 如此两三次, 一般石英砂就基本是白色的了.加入淋洗剂, 一开始不要加压, 等溶样品的溶剂和样品层有一段距离(2~4cm就够了), 再加压, 这样防止了溶剂(如二氯甲烷等)夹带样品快速下行.3、淋洗剂的选择感觉上要使所需点在rf0.2~0.3左右的比力好.不要认为在板上爬高了分的比力开, 过柱子就用那种极性, 如果rf在0.6, 即使相差0.2也不容易在柱子上分开, 因为柱子是一个屡次爬板的状态, 可以通过公式的比力:0.6/0.8一次的分离度, 肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方年夜.4、样品的收集用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡.所以如果样品与硅胶的吸附比力强的话, 就不容易流出.这样就会发生, 后面的点先出, 而前面的点后出.这时可以采纳氧化铝作固定相.另外, 收集的试管年夜小要以样品量而定, 特别是小量样品, 如果用年夜试管, 可能一根就收到了三个样品, wuwu.如果都用小试管那工作量又太年夜.5、最后的处置柱分后的产物, 由于使用了年夜量的溶剂, 其中的杂质也会累积到产物中, 所以如果想送分析, 最好用少量的溶剂洗涤一下, 因为年夜部份的杂质是溶在溶剂里的, 一洗基本就没了, 需要时进行重结晶.另外, 再过柱的时候, 有时会呈现气泡, 一是和使用的溶剂有关, 如果是易挥发的溶剂, 如乙醚、二氯甲烷等, 在室温稍高的情况下, 很容易呈现这种现象, 因此, 在室温高的时候, 可以选择沸点较高, 挥发相对小的溶剂.还有, 使用混合溶剂时, 使用的两种溶剂的沸点应该相差不年夜, 如:乙酸乙酯和石油醚(60~90),而乙醚却要选择30-60的石油醚.二是:不论是用带砂板的还是塞棉花的, 在装柱之前, 都要将空气用加压的方法将空气排干, 这样就可防止柱中有空气!。
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柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。
这两项技术掌握与否,对于提高实验的效率至关重要。
常见的例子是:在柱层析时,由于层析柱中的硅胶填料装得不均匀(没有填严实),使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花,导致分离效果不好。
更常见的例子是:层析柱虽然装得不错,但是由于淋洗剂选择不恰当,结果导致几十毫克产品,用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。
分离同样的东西,熟手可能只需要半个小时,而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。
由此可见,这两项技术掌握与否,对于提高工作效率,减轻工作量,减少有机溶剂的使用,从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。
柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。
而淋洗剂的选择则是通过TLC 确定。
这里要指出的一点是:TLC的作用除了跟踪反应进程,检测试剂和原料纯度外,一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。
首先谈柱层析:
1:装柱子(添硅胶)时,有两种方法:即湿法装柱和干法装柱,二者各有优劣。
不论干法还是湿法,硅胶(固定相)的上表面一定要平整,并且硅胶(固定相)的高度一般为15cm左右,太短了可能分离效果不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱:是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压用淋洗剂“走柱子”,本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。
干法装柱:则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧,至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实。
接着是用淋洗剂“走柱子”,一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
通常上面加压,下面再用油泵抽,这样可以加快速度。
干法装柱较方便,但最大的缺陷在于“走柱子”时,由于溶剂和硅胶之间的吸附放热(可以用手摸柱子明显感觉到),容易产生气泡,这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚,二氯甲烷更为明显。
虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉,但是,一旦撤去压力,如在上样、加溶剂等操作的时候,气泡就会释放出来,严重时,整个柱子变花,样品不可能平整地通过,当然也就谈不上分离了。
解决的办法是:第一、硅胶一定要天结实;第二、一定要用较多的溶剂“走柱子”,一定要到柱子的下端不再发烫,恢复到室温后再撤去压力。
也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂,防止添加溶剂的时候,使得样品层不再整齐。
但我的感觉是如果小心上样,添加溶剂,则没有这个必要。
2:上样也有干法和湿法之分:干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后,在加入少量硅胶,拌匀后再旋去溶剂。
如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。
干法上样较麻烦,但可以保证样品层很平整。
湿法上样就是用少量溶剂(最好就是展开剂,如果展开剂的溶解度不好,则可以用一极性较大的溶剂,但必须少量)将样品溶解后,再用胶头滴管转移得到的溶液,沿着层析柱内壁均匀加入。
然后用少量溶剂洗涤后,再加入。
湿法较方便,熟手一般采用此法。
上样完毕后,接着即用淋洗剂淋洗。
淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
由于层析柱和薄板的不同,即使两者使用的硅胶都相同,但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时,也显得极性偏大,所以要稀释一倍,但又不能稀释太多,否则成了靠扩散作用来分离,效果也不会好。
谈TLC,需要切记的是:第一、某种样品在这种展开剂中只显示一个点,并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。
因此在寻找展开剂时,多尝试几种比例不同,成分不同的展开剂。
展开剂的极性太小,点分不开,极性太大,也分不开.一般以目标产物的Rf值在0.3左右为最佳。
第二、点不能点得太浓,否则容易重叠,不易判断,因为如果两个点相近的话,一浓就变成一个点第三、板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质在该溶剂中的溶解性有关,只有两者比较合适了,才能有一个交好的分离效果。
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为:石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇
使用单一溶剂,往往不能达到很好的分离效果,往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂,高极性的溶剂还有增加区分度的作用,常用的溶剂组合有:Petroleum ether/Ethyl acetate, Petroleum ether/Acetone, Petroleum ether/Ether, Petroleum ether/CH2Cl2, CH2Cl2/ethyl acetate, ethyl acetate/ MeOH, CHCl3/ ethyl acetate
展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂,就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个分离效果好的展开剂。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我在实验中,为了实现一个配体与其他杂质有效分离,曾经尝试了所有的溶剂用来两两组合后,最后才找到petroleum
ether/THF这类不常见的混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例,达到最佳效果,如果没有分开的迹象,最好是换溶剂。
对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质,在展开剂里往往加一点点三乙胺,氨水,吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。
当然,选择所添加的碱性物质,还必须考虑容易从产品中除去,氨水无疑是较好的选择。
这里要特别强调的一点是:分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系。
不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度,酸性强弱不同,从而导致产品在某个厂家的硅胶中分离效果很好,但在另一个厂家的就不行。
溶剂的含水量和杂质含量对分离效果都有明显的影响。
温度对分离效果影响也很明显。
我们实验室没有空调,我在实验过程发现,在夏天分离相同的产品,所需的淋洗剂极性要比在冬天小很多,这一点大家也是可以理解的
鉴于此,使用的硅胶,不用时一定要密封,防止吸潮。
TLC所用的硅胶板一定要保存在干燥器里面,或使用前在红外烘箱里干燥一段时间。
在利用TLC跟踪反应时,在点板的时候往往是反应体系的混和溶液点一个点A,每种难挥发的原料各点一个点B,C, D等等,然后所有的原料和反应体系的混合溶剂再共同点
一个混合点X,这些点在板上的位置如图所示:
A X
B
C D。