附录一试验室常用溶液配制

一、常用贮液与溶液
（一）常用缓冲液
1．磷酸缓冲液
（ 1） 25℃下磷酸钾缓冲液的配制※
pH 1mol/L K 2HPO4(mL) 1mol/L KH 2PO4(mL)
（ 2） 25℃下磷酸钠缓冲液的配制※
pH 1mol/L Na 2HPO4(mL) 1mol/L NaH 2PO4(mL)
※ :用蒸馏水将混淆的两种1mol/L 储存液稀释至1000mL ，依据 Henderson-Hasselbalch 方程计算其 pH 值：
pH=pK’ +1g([质子受体 ]/[ 质子供体 ])
在此， pK’=6.86(25℃ )。

2．电泳缓冲液
常用的电泳缓冲液
缓冲液使用液浓储存液（每升）
Tris- 乙酸（ TAE ）1×：乙酸50×： 242g Tris 碱
57.1mL 冰乙酸
100mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris- 磷酸（ TPE）1×磷酸10×:10g Tris 碱
15.5mL85% 磷酸（）
40mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris- 硼酸（ TBE ）a 0.5 ×硼酸5×： 54g Tris 碱
27.5 硼酸
碱性缓冲液Tris- 甘氨酸说明：b
c
20mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1×:50mmol/L NaOH1×:5mL 10mol/L NaOH
1mmol/L EDTA2mL 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
1×:25mmol/L Tris5×:15.1g Tris
250mmol/L甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3 ）
0.1% SDS50mL 10% SDS( 电泳级 )
① TBE 溶液长时间寄存后会形成积淀物，为防止这一问题，可在室温下用玻璃瓶保留5×溶液，出现积淀后则予以荒弃。

以片都以1×TBE 作为使用液（即1：5 稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。

但0.5 ×的使用液已具备足够的缓冲容量。

当前几乎全部的琼脂糖胶电泳都以1： 10 稀释的储存液作为使用液。

进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故经过缓冲液的电流量往常较大，需要使用1×TBE 以供给足够的缓冲容量。

②碱性电泳缓冲液应现用现配。

③ Tris- 甘氨酸缓冲液用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。

3．凝胶加样缓冲液
缓冲液种类6×缓冲液储存温度
0.25% 溴酚蓝
Ⅰ0.25% 二甲苯青 FF
4℃40% （W/V ）蔗糖水溶液
0.25 溴酚蓝
0.25% 二甲苯青 FF
Ⅱ室温15% 聚蔗糖 (Ficoll400)
0.25% 溴酚蓝
Ⅲ
二甲苯青4℃
0.25% FF
30% 甘油水溶液
0.25%溴酚蓝
Ⅳ4℃
40%(W/V) 蔗糖水溶液
碱性加样缓冲液 :
300mmol/L NaOH
6mmol/L EDTA
18% 聚蔗糖 (Ficoll400)
0.15%溴甲酚绿
4℃
Ⅴ
0.25%二甲苯青 FF
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以保证 DNA 平均进入样品孔内；使样品体现颜色，进而使加样操作更加便利，含有在电块中能以可预知速率朝阳极泳动的染料。

溴酚蓝在琼脂
糖中挪动的速率约为二甲苯青FF 的 2.2 倍，而与琼脂糖浓度没关。

以0.5 ×TBF 作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp 的双链线状 DNA 同样，而二甲苯青 FF 的泳动则与长4kb 的双链线状 DNA 同样。

在琼脂糖浓度为0.5% ～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并
不明显。

采用哪一种加样染料纯属个人喜恶。

可是，关于碱性凝胶应该使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在
碱性 pH 条件下其显色较溴酚更蓝为鲜亮。

4．各样 pH 值的 Tris 缓冲液的配制
各样 pH 值的 Tris 缓冲液的配制
所需 pH 值（ 25℃）的体积
7． 1 45． 7
7． 2 44． 7
7． 3 43． 4
7． 4 42． 0
7． 5 40． 3
7． 638．5
7． 7 36． 6
7． 8 34． 5
7． 9 32． 0
8． 0 29． 2
某一特定 pH 值的缓冲液的配制：将碱溶液与上表所示相应体积（单位： mL ）的混淆，加水将体积调至100mL
（二）常用酶的配制
1．溶菌酶
用水配制成50mg/mL 的溶菌酶溶液，分装成小份并保留于-20℃。

每一小份一经使用后便予抛弃。

2．蛋白水解酶类
储存液储存温度反响浓度反响缓冲液温度预办理
Tris(pH7.8)
链霉蛋
20mg/mL -20℃（溶
1mg/mL 37℃自消化 b
白酶 a 于水）
0.5% SDS
Tris(pH7.8)
蛋白酶
20mg/mL -20℃（溶
50μ g/mL
37～不必预处
K c 于水）理
56℃
0.5% SDS
a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分别到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混淆物。

b：自消化可除去 DNA 酶和 RNA 酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法以下：把该酶的粉
末溶解于 10mmol./L Tris ·HCl(pH7.5) 、10mmol/L NaCl 中，配成 20mg/mL 浓度，于 37℃温育 1h。

经
消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保留-20℃。

c：蛋白酶 K 是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（ Tritirachium album Limber ）中纯化获得。

该酶有两个Ca2+联合位点，它们离酶的活性中心有必定距离，与催化机理并没有直接关
系。

但是，假如从该酶中除掉Ca2+，因为出现远程的构造变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性往常已足以降解在一般状况下污染酸制品的蛋白质。

所以，蛋白酶K 消化过程中往常加入EDTA（以克制依靠于 Mg2+ 的核酸酶的作用）。

可是，假如要消化对蛋白酶 K 拥有较强耐心的蛋白，
如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/L Ca2+ 而不含 EDTA 的缓冲液。

在消化完成后、纯化核酸前要加入 EGT（）至终浓度为2mmol/L, 以鳌合 Ca2+。

3．无 DNA 酶的 RNA 酶
将胰 RNA 酶（ RNA 酶 A ）溶于 10mmol/L Tris ·HCl(pH7.5) 、 15mmol/L NaCl 中，配成 10mg/mL 的
浓度，于 100℃加热 15min，迟缓冷却至室温，分装成小份保留于-20℃。

（三）常用抗生素溶液
储存液 a 工作浓度
抗生素
浓度保留条件紧密型质粒废弛型质粒
氨苄青霉素50mg/mL( 溶于水 ) -20℃20μg/mL 60μg/mL
羧苄青霉素50mg/mL( 溶于水 ) -20℃20μg/mL 60μg/mL
氯霉素34mg/mL( 溶于乙醇 ) -20℃25μg/mL 170μg/mL
卡那霉素10mg/mL( 溶于水 ) -20℃10μg/mL 50μg/mL
链霉素10mg/mL( 溶于水 ) -20℃10μg/mL 50μg/mL
四环素 b 5mg/mL( 溶于乙醇 ) -20℃10μ g/mL 50μ g/mL
a：以水为溶剂的抗生素储存液经过0.22 μm滤器过滤除菌。

以乙醇为溶剂的抗生素溶液不必除菌处理。

全部抗生素溶液均应放于不透光的容器保留。

b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的挑选应使用不含镁盐的培育基（如LB 培育基）。

（四）常用储存液的配制
1． 30% 丙烯酰胺溶液
【配制方法】
将 29g 丙烯酰胺和 1g N， N’-亚甲双丙烯酰胺溶于整体积为 60mL 的水中。

加热至加水至终体积为100mL 。

用Nalgene 滤器（0.45 μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的，置棕色瓶中保留于室温。

37℃溶解之，补pH 值应不大于
【注意】
丙烯酰胺拥有很强的神经毒性并能够经过皮肤汲取，其作器具积累性。

称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯
酰胺时应戴手套和面具。

可以为聚丙烯酰胺无毒，但也应慎重操作，因为它还可能会含有少许未聚
合资料。

一些价钱较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺往常含有一些金属离子，在丙烯酰胺储存液中加入大概 0.2 体积的单床混淆树脂（ MB-1 Mallinckrodt ），搅拌留宿，而后用 Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之。

在储存时期，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会迟缓转变成丙烯酰和双丙烯酸。

2． 40% 丙烯酰胺
【配制方法】
把 380g 丙烯酰胺（ DNA 测序级）和20g N ，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于整体积为600mL 持续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法办理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为的蒸馏水中。

1L 。

【注意】
见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA 序列测定。

3．放线菌素 D 溶液
【配制方法】
把 20mg 放线菌素 D 溶解于 4mL 100% 乙醇中，1：10 稀释储存液，用 100%乙醇作空白比较读取OD440 值。

放线菌素 D （分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21， 900，故而 1mg/mL 的放线菌素 D 溶液在 440nm 处的吸光值为，放线菌素 D 的储存液应放在包有箔片的试管中，保留
于 -20℃。

放线菌素 D 是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时一定戴手套并在通风橱内操作，而不可以在开放在实
验桌面长进行，提防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。

药厂供给的作治疗用途的放线菌素 D 制品常含有糖或盐等增添剂。

只需经过丈量储存液在 440nm 波优点的光汲取确立放线菌素 D 的浓度，这种制品即可用于克制自己指引作用。

4．腺苷三磷酸（ ATP ）溶液
【配制方法】
在 0.8mL 水中溶解 60mg ATP, 用调至 pH 值至，用蒸馏水定容 1mL ，分装成小份保留于 -70℃
5． 10mol/L 乙酸酰溶液
【配制方法】
把 770g 乙酸酰溶解于800mL 水中，加水定容至1L 后过滤除菌。

6． 10% 过硫酸铵溶液
【配制方法】
把 1g 过硫酸铵溶解于终量为10mL 的水溶液中，该溶液可在4℃保留数周。

7． BCIP 溶液
【配制方法】
把 0.5g 的 5-溴 -4- 氯 -3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP ）溶解于10mL 100% 的二甲基甲酰胺中，保留于4℃8． 2×BES 缓冲盐溶液
【配制方法】
用整体积90mL 的蒸馏水溶解 1.07g 盐溶液 BES[N ， N- 双（ 2-羟乙基） -2- 氨基乙磺酸 ] 、1.6g NaCl 和 0.027g Na2HPO4 ，室温下用 HCl 调理该溶液的 pH 值至、而后加入蒸馏水定容至100mL ，用 0.22 μm滤器过滤除菌，分装成小份，保留于-20℃。

9． 1mol/L CaCl2 溶液
【配制方法】
在 200mL 蒸馏水中溶解54g CaCl2·6H2O ，用 0.22 μm滤器过滤除菌，分装成 10mL 小份储存于 -20℃。

制备感觉态细胞时，拿出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100mL ，用 Nalgene 滤器（ 0.45 μm孔径）过滤除菌，而后骤冷至0℃。

10．溶液
【配制方法】
在 20mL 蒸馏水中溶解 13.5g CaCl2 ·6H2O ，用 0.22 μm滤器过滤除菌，分装成 1mL 小份储存于 -20℃。

11． 1mol/L 二硫苏糖醇（DTT ）溶液
【配制方法】
用乙酸钠溶液（）溶解 3.09g DTT，过滤除菌后分装成1mL 小份储存于 -20℃。

【注意】
DTT 或含有 DTT 的溶液不可以进行高压办理。

12．脱氧核苷三磷酸（dNTP ）溶液
【配制方法】
把每一种dNTP 溶解于水至浓度各为100mmol/L 左右，用微量移液器汲取碱分别调理
每一 dNTP 溶液的 pH 值（用 pH 试纸检测），把中和后的每种dNTP 溶液各取一份作适合稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP 的实质浓度，而后用水稀释成终浓度为
50mmol/L 的 dNTP ，分装成小份储存于-70℃。

碱基波长（ nm）消化系数（ε） [L/ （ mol·cm）]
A 259 ×104
G 253 ×104
C 271
3 ×10
T 260
3 ×10
比色杯光径为1cm 时,吸光度 =εM 13． 0.5mol/L EDTA(pH8.0)溶液【配制方法】
在 800mL 水中加入186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na· 2H2O ），在磁力搅拌器上强烈搅拌，
用 NaOH 调理溶液的pH值至（约需20g NaOH颗粒）而后定容至1L，分装后高压灭菌备用。

【注意】
EDTA 二钠盐需加入NaOH 将溶液的pH 值调至靠近，才能完整溶解。

14．溴化乙锭（10mg/mL 溶液）
【配制方法】
在 100mL 水中加入 1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以保证其完整溶解，而后用铝箔包裹容器或转移
至棕色瓶中，保留于室温。

【注意】
当心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时
要戴面罩。

15． 2×HEPES 缓冲盐溶液
【配制方法】
用总量为 90mL 的蒸馏水溶解 1.6g NaCl 、0.074g KCl 、0.027g Na2PO4·2H2O 、0.2g 葡聚糖和1gHEPES，用调理 pH 值至，再用蒸馏水定容至 100mL 。

用 0.22 μm滤器过滤除菌，分装成 5mL 小份，储存于 -
20℃。

16． IPTG 溶液
【配制方法】
IPTG 为异丙基硫代 -β-D- 半乳糖苷（分子量为），在 8mL 蒸馏水中溶解 2g IPTG 后，用蒸馏水定容至
10mL ，用 0.22 μm滤器过滤除菌，分装成 1mL 小份储存于 -20℃。

17． 1mol/L 乙酸镁溶液
【配制方法】
在 800mL 水中溶解214.46g 四水乙酸镁，用水定容至1L 过滤除菌。

18． 1mol/L MgCl2 溶液
【配制方法】
在 800mL 水中溶解203.4g MgCl2 ·6H2O ，用水定容至1L ，分装成小份并高压灭菌备用。

【注意】
MgCl2 极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长久寄存。

19．β-巯基乙醇（ BME ）溶液
【配制方法】
一般获得的是溶液，应装在棕色瓶中保留于4℃。

【注意】
BME 或含有 BME 的溶液不可以高压办理。

20． NBT 溶液
【配制方法】
把 0.5g 氯化氮蓝四唑溶解于10mL 70% 的二甲基甲酰胺中，保留于4℃。

21．酚 /氯仿溶液
【配制方法】
把酚和氯仿等体积混淆后用HCl(pH7·.6) 抽提几次以均衡这一混淆物，
置棕色玻璃瓶中，上边覆盖等体积的HCl(pH7·.6) 液层，保留于4℃。

【注意】
酚腐化性很强，并可惹起严重灼伤，操作时应戴手套及防备镜，穿防备服。

全部操作均应在化学通
风橱中进行。

与酚接触过的部位皮肤应用大批的水冲洗，并用肥皂和水清洗，忌用乙醇。

22． 10mmol/L 苯甲基磺酰氟（PMSF ）溶液
【配制方法】
用异丙醇溶解PMSF 成（ 10mmol/L ），分装成小份储存于-20℃。

若有必需可配成浓度高
达的储存液（ 100mmol/L ）。

【注意】
PMSF 严重伤害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或经过皮肤汲取后有致命危险。

一旦眼睛或
皮肤接触了PMSF，应立刻用大批水冲刷之。

凡被PMSF 污染的衣物应予抛弃。

PMSF 在水溶液中的活PMSF 在水溶液中不稳固。

应在使用前从储存液中现用现加于裂解缓冲液
中。

性丧失速率随pH 值的高升而加速，且25℃的失活速率高于4℃。

pH 值为 8.0 时， 20μmmol/L PMSF
水溶液的半寿期大概为 85min，这表示将 PMSF 溶液调理为碱性（ pH>8.6 ）并在室温搁置数小时后，可安全地予以抛弃。

23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
【配制方法】
在 800mL 蒸馏水中溶解 8g NaCl 、 0.2g KCl 、 1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4, 用 HCl 调理溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 1L，在 15lbf/in2(1034 105Pa)×高压下蒸气灭菌 20min 。

保留于室温。

24． 1mol/L 乙酸钾（ pH7.5 ）溶液
【配制方法】
将 9.82g 乙酸钾溶解于90mL 纯水中，用2mol/L 乙酸调理pH 值至 7.5 后加入纯水定容到1L ，保留于 -20℃。

25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】
在 60mL 5mol/L 乙酸钾溶液中加入 11.5mL 冰乙酸和 28.5mL 水，即成钾浓度为 3mol/L 而乙酸根浓度为
5mol/L 的溶液。

26． 3mol/L 乙酸钠（ pH5.2 和 pH7.0 ）溶液
【配制方法】
在 80mL 水中溶解408.1g 三水乙酸钠，用冰乙酸调理pH 值至 5.2 或用稀乙酸调理pH 值至，加
水定容到1L，分装后高压灭菌。

27． 5mol/L NaCl 溶液
【配制方法】
在 800mL 水中溶解292.2g NaCl 加水定容至1L ，分装后高压灭菌。

28． 10% 十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
【配制方法】
在 900mL 水中溶解 100g 电泳级 SDS，加热至 68℃助溶，加入几滴浓盐酸调理溶液的 pH 值至，加水定容至1L，分装备用。

【注意】
SDS 的微细晶粒易扩散，所以称量时要戴面罩，称量完成后要除去残留在称量工作区和天平上的
SDS， 10% SDS 溶液不必灭菌。

29． 20×SSC 溶液
【配制方法】
在 800mL 水中溶解175.3g NaCl 和柠檬酸钠，加入数滴10mol/L NaOH 溶液调理pH 值至，加水定容至1L，分装后高压灭菌。

30． 20×SSPE 溶液
【配制方法】
在 800mL （约需水中溶解17.5g NaCl 、 27.6g NaH2PO4·H2O 和 7.4g EDTA ，用
6.5mL 10mL/L NaOH ），加水定容至1L，分装后高压灭菌。

NaOH 溶液调理pH 值至
31． 100% 三氯乙酸溶液
【配制方法】
在装有500g TCA 的瓶中加入227mL 水，形成的溶液含有100% （ M/V ） TCA 。

32． Tris 缓冲盐溶液（TBS ）（ 25mmol/L Tris ）
【配制方法】
在 800mL 蒸馏水中溶解 8g NaCl 、0.2g KCl 和 3g Tris 碱，加入 0.015g 酚并用 HCl 调至 pH 值至，
用蒸馏水定容至 1L，分装后在 151bf/in2(1.034 105Pa)×高压下蒸汽灭菌 20min ，于室温保留。

33． X-gal 溶液
【配制方法】
X-gal 为 5-溴 -4-氯 -3-吲哚 -β-D 半乳糖苷。

用二基甲酰胺溶解X-gal 配制成的20mg/mL 的储存液。

保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal 溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被损坏，并应贮
存于 -20℃。

X-gal 溶液不必过滤除菌。

34．杂交试验顶用于降低背景的关闭剂
试剂用途
Northern 杂交
Denhardt 试剂
使用 RNA 探针的杂交
单拷贝序列的Southern 杂交
将 DNA 固定于尼龙膜上的杂交
Denhardt 试剂往常配制 50×储存液，过滤后保留于 -20℃。

可将该储存液 10 倍稀释于预杂交液（常为含有 0.5%SDS 和 100μg/mL 经变性被打断的鲑精 DNA 的 6×SSC 或 6×SSPE）中。

50×Denhardt 液中含 5g 聚蔗糖（ Ficoll,400 蛋白（组分 V”Sigmal），加水至终体积为
BLOTTO 型， Pharmacia）、5g 聚乙烯吡咯烷酮和5g 牛血清白500mL 。

Grunstein-Hogness 杂交
Benton-Davis 杂交
除单拷贝序列 Southern 杂交之外的全部
Southern 杂交
斑点印迹
1×BLOTT （牛乳转移技术优化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer）,是含5%胶脂奶粉和 0.02%叠氮钠的水溶液，应保留于4℃。

使用前可用预杂交液稀释25 倍。

BLOTTO不该与高浓度的 SDS 并用，因为后者会致使牛奶中蛋白质析出。

假如杂交背景不合要求，可在杂交液中加入 NP-40 至终浓度为 1%。

BLOTTO 不可以用作 Northern 杂交的关闭剂，因为这一关闭剂中可能含有 RNA 酶，其活性之高令人没法接受。

注意：叠氮钠有毒性，取用时需戴手套当心操作。

含叠氮钠的溶液应予明确标志。

Southern 杂交
肝素
原位杂交
肝素（ Sigma H-7005 ，从猪中提取的二级产品或相当等级的产品）用4×SSPE 或 4×SSC 溶解配制成 50mg/mL 的浓度，保留于 4℃。

肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液顶用作关闭剂的浓度为
500 μ g/mL，在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度为50μ g/mL。

经变性并被打断的鲑精DNA southern 和 Northern 杂交
把鲑鱼精子DNA （ Sigma,Ⅲ ,盐钠）溶解于水配制成10mg/mL 的浓度，必需时于室温磁力搅拌2～ 4h 助溶。

把溶液中NaCl 的浓度调至，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。

合 DNA 溶液快速通17 号皮下注射针头12 次，以剪切DNA 。

加入 2 倍体积用冰预冷的乙醇沉淀 DNA 。

离心回收DNA 并重溶于水，配制成10mg/mL 的浓度，测定溶液的OD 260值并计算出精准的 DNA 浓度，而后煮沸10min ，分装成小份保留于-20℃。

使用前置开水浴中加热5min ，而后快速在冰浴中骤冷。

预杂交液中应含有100μg/mL经变性并被打断的鲑鱼精子DNA
35． 4% 多聚甲醛
【配制方法】
称取 40g 多聚甲醛，加人溶解后用浓HC1 调理 pH 800mL 0.2M PBS 加热溶解，并加人少许的
至，定容至 1000mL
NaOH 助溶，待多聚甲醛完整
36．热修复液
【配制方法】
贮液：柠檬酸21.01g + 蒸馏水 1000mL
柠檬酸三钠29.4g +蒸馏水 1000mL
工作液：取柠檬酸9mL + 柠檬酸三钠41 mL + 450 mL 蒸馏水, 调PH 至
37．矿化引诱液
【配制方法】
Alpha-MEM 15% FCS 405 mL 75ml
P/S（双抗）10mM AA 1M beta-GP 5ml
5mL
5mL
L-ascorbic acid-phosphate (0.145g+50mLPBS)
beta-glucorophosphate (10.8g+50mLPBS)
2mM L-glutamine5mL
1.8mM KH2PO4
2.5 ml (2.45g+50ml PBS)
μL
38． 500 mL 5X Mix（用于real-time PCR）
【配制方法】
5X 20mM TRIS 0.5 M TRIS 100 mL
5X 50 mM KCl 1M KCl 125 ml
5X 3 mM MgCl 1M MgCl2 7.5 ml
5X 10 nM Fluorescein 10 uM Fluoresein 2.5 mL
5X 5% DMSO DMSO 125 mL
ddH2O 141 mL
μ m filter Before using the final 5X mix, 10 mL 5X Mix +50μ L 500X SYBR rgreen (to 0.5X cybergreen)
39． 10mg/mL 牛血清蛋白 (BSA ）
【配制方法】
加 100mg 的牛血清蛋白（组分V 或分子生物学试剂级，无DNA 酶）于 9.5mL 水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完整溶解为止。

不要涡旋混淆。

加水定容到10mL ，而后分装成小份储存于-20℃。

40． 1mol/L 二硫苏糖醇（DTT ）
【配制方法】
在二硫苏糖醇5g 的原装瓶中加32.4mL 水，分红小份储存于-20℃。

或转移100mg 的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65mL 的水配制成1mol/L 二硫苏糖醇溶液
41． 1mol/L HEPES
【配制方法】
将 23.8gHEPES 溶于约 90mL 的水中，用NaOH 调 pH （），而后用水定容至100mL 。

42． 25mg/mL IPTG
【配制方法】
溶解 250mg 的 IPTG （异丙基硫代-β-D- 半乳糖苷）于10mL 水中，分红小份储存于-20℃。

43． 10％ SDS（十二烷基硫酸钠）
【配制方法】
称取 100g SDS 慢慢转移到约含0.9L 的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完整溶解。

用水定容
至 1L。

44．％ X － gal（ 5-溴 -4-氯 -3- 吲哚－β-半乳糖苷）
【配制方法】
溶解 25mg 的 X － gal 于 1mL 的二甲基甲酰胺（DMF ） ,用铝箔包裹装液管，储存于-20℃。

45． DEPC （焦碳酸二乙酯）办理水
【配制方法】
加 100μL DEPC 于 100mL 水中，使 DEPC 的体积分数为％。

在 37℃温浴起码 12h，而后在 15 psi 条
件下高压灭菌20min ，以使剩余的DEPC
液。

失活。

DEPC 会与胺起反响，不行用DEPC 办理Tris 缓冲46．TE （用于悬浮和储存DNA ）
【配制方法】
1mL 1mol/L Tris-HCl（，25℃）
200 μL0.5 mol/L EDTA （ pH 8.0 ）
98.8mL 水
47．TBS ：
2.1 Tris 缓冲液配方：（ 0.5 M pH7.6 ）
Tris （三羟甲基氨基甲烷）
1N HCL约420mL
双蒸水加至 1000mL
Tris 缓冲液配制方法：
先以少许双蒸水（300~500mL ）溶解 Tris ，加入 HCl 后，用 HCl（ 1N）或将 pH 调至，最后双蒸水加至1000mL 。

此液为贮备液，4℃冰箱中保留。

NaOH（ 1N ）
2.2 TBS 配方：
Tris-HCI缓冲液（pH7.6 ）100mL
NaCI 8.5~9g (0.15mol/L)
双蒸水
TBS 配制方法：
先以少许双蒸水溶解摇匀。

加至
NaCl ，再加入
1000mL
Tris-HCl 缓冲液，最后加双蒸水至1000mL ，充足
二、常用培育基
1． LB 培育基
将以下组分溶解在0.9L 水中：
蛋白胨 10g
酵母提取物5g
氯化钠 10g
假如需要用 1N NaOH （～ 1mL ）调整 pH 至，再补足水至 1L。

注：琼脂平板需增添琼脂粉 12g/L, 上层琼脂平板增添琼脂粉 7g/L 。

2． SOB 培育基
将以下组分溶解在0.9L 水中：
蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
氯化钠
1 mol/L 氯化钾
用水补足体积到1L 。

分红 100mL 的小份，高压灭菌。

培育基冷却到室温后，再在每100mL 的小份中加 1mL 灭过菌的 1mol/L 氯化镁。

3． SOC 培育基
成分、方法同1mL 灭过菌的再用水补足到SOB 培育基的配制，不过在培育基冷却到室温后，除了在每100mL 的小份中加1mol/L 氯化镁外，再加2mL 灭菌的 1mol/L 葡萄糖（ 18g 葡萄糖溶于足够水中，100mL ，用 0.22um 的滤膜过滤除菌）。

4． TB 培育基
将以下组分溶解在0.9L 水中：
蛋白胨 12g
酵母提取物24g
甘油 4mL
各组分溶解后高压灭菌。

冷却到170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（
60℃，再加100mL
的 KH2PO4 和
灭菌
的
溶在足量
的水中，使终体积为100mL 。

高压灭菌或用0.22um 的滤膜过滤除菌）。

5． 2×YT 培育基
将以下组分溶解在0.9L 水中：
蛋白胨 16g
酵母提取物10g
氯化钠 4mL
假如需要用 1N NaOH （～ 1mL ）调整 pH 至，再补足水至 1L。

注：琼脂平板需增添琼脂粉 12g/L, 上层琼脂平板增添琼脂粉 7g/L 。

6． YPD 培育基
将以下组分溶解在0.9L 水中：
蛋白胨 20g
酵母提取物10g
葡萄糖 20g
用水补足体积为1L 后，高压灭菌。

建议在高压灭菌以前，对色氨酸营养缺点型每升培育基增添
1.6g 色氨酸，因为YPD 培育基是色氨酸限制型培育基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入
20g 琼脂粉。