小鼠骨髓细胞微核试验
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阳性及阴性对照组处理方法同上。
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4.3 固定
将推好晾干的骨髓片放入染色缸中，甲醇 溶液固定15分钟，取出，晾干。不能及时 染色的涂片也应固定好保存。
4.4 染色
将固定晾干后的涂片，用新鲜配制的 Giemsa (Giemsa储备液1份+pH6.8的磷酸盐 缓冲液9份) 染色10~15分钟，冲洗，晾干。
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MN NCE
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14
红细胞
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电镜
15
单个微核
多个微核
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Hale Waihona Puke 16医学ppt17
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3 器材与试剂
3.1 器材 解剖器械，生物显微镜，载玻片 等。
3.2 试剂 甲醇（分析纯）、甘油（分析 纯）、小牛血清、生理盐水、Giemsa 储备 液、 pH 6.8磷酸盐缓冲液
3.3 阳性对照物 环磷酰胺
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4 操作步骤
4.1 试验动物及处理
动物选择 小鼠是微核试验的常规动物，通常用7～12
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11
4.5 观察计数
低倍镜下观察，选择细胞完整、分散均匀， 着色适当的区域，再在油镜下观察计数。
多染红细胞（PCE）呈灰蓝色，正染红细胞 （NCE）呈橘黄色。典型的微核多为单个、 圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致， 呈紫红色或蓝紫色 。
计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计 数200个细胞中PCE与NCE的比值。
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2
化学致突变物
染色体
作用于纺锤丝
无着丝点,片或环
整条染色体 带着丝粒的环和断片
形成微核
于细胞分裂末期细胞质中
微核成因
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3
小鼠骨髓嗜多染医学红ppt 细胞微核的形成
4
因此，微核试验用于检测断裂剂和部分非整 倍体致突变剂。
微核可出现在多种细胞中，但在有核细 胞 中较难与正常核的分支相区别，由于红 细胞在成熟前最后一次分离后数小时可将 主核排出，而仍保留微核于PCE细胞中，因 此，通常计数PCE细胞中的微核数。
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1
1 目的
通过本次实验，学习和掌握小鼠骨髓多染 红细胞（PCE）微核测定方法。
2 原理
微核是在细胞的有丝分裂后期染色体有 规 律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留 在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝 粒断片或环。它在末期以后，单独形成一 个或几个规则的次核，被包含在细胞的胞 质内而形成，由于比核小得多故称微核。
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5 结果分析与评价
本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分 率表示。
PCE/NCE为评价细胞毒性的指标，受试组 PCE/NCE值与阴性对照组比较有统计学意 义表示受试化学毒物的剂量过大，试验结 果不可靠。
阴性对照和阳性对照组的微核发生率，应 与相关文献报道或研究历史数据相一致。
周龄，体重18～20g的小鼠。每组10只，雌 雄各半。
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7
剂量及分组
受试物应至少设三个剂量组，最高剂量组 原则上为不产生动物死亡的最大毒作用剂 量。一般取受试样品1/5、1/10、1/20 LD50 剂量。
另设溶剂对照组和阳性对照组。阳性对照 组可用环磷酰胺腹腔注射1次。阴性对照组 使用等体积的溶剂。
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8
染毒途径 腹腔注射
染毒次数及取样时间 一般采用两次或多次染毒。两次染毒：第
一次染毒后24小时进行第二次染毒，6小时 后取样；多次染毒：每天染毒1次，连续5 天，末次染毒后24小时取样。
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4.2 骨髓液的制备和涂片
试验动物一次染毒后，按确定的时间用颈 椎脱臼或麻醉法将其处死，取胸骨，擦净 血污，剔去肌肉，剪去骨骺，用小型止血 钳将骨髓挤于有一小滴小牛血清的清洁载 玻片上，混合均匀后推片。也可在股骨取 骨髓。
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4.3 固定
将推好晾干的骨髓片放入染色缸中，甲醇 溶液固定15分钟，取出，晾干。不能及时 染色的涂片也应固定好保存。
4.4 染色
将固定晾干后的涂片，用新鲜配制的 Giemsa (Giemsa储备液1份+pH6.8的磷酸盐 缓冲液9份) 染色10~15分钟，冲洗，晾干。
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单个微核
多个微核
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3 器材与试剂
3.1 器材 解剖器械，生物显微镜，载玻片 等。
3.2 试剂 甲醇（分析纯）、甘油（分析 纯）、小牛血清、生理盐水、Giemsa 储备 液、 pH 6.8磷酸盐缓冲液
3.3 阳性对照物 环磷酰胺
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4 操作步骤
4.1 试验动物及处理
动物选择 小鼠是微核试验的常规动物，通常用7～12
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4.5 观察计数
低倍镜下观察，选择细胞完整、分散均匀， 着色适当的区域，再在油镜下观察计数。
多染红细胞（PCE）呈灰蓝色，正染红细胞 （NCE）呈橘黄色。典型的微核多为单个、 圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致， 呈紫红色或蓝紫色 。
计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计 数200个细胞中PCE与NCE的比值。
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化学致突变物
染色体
作用于纺锤丝
无着丝点,片或环
整条染色体 带着丝粒的环和断片
形成微核
于细胞分裂末期细胞质中
微核成因
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因此，微核试验用于检测断裂剂和部分非整 倍体致突变剂。
微核可出现在多种细胞中，但在有核细 胞 中较难与正常核的分支相区别，由于红 细胞在成熟前最后一次分离后数小时可将 主核排出，而仍保留微核于PCE细胞中，因 此，通常计数PCE细胞中的微核数。
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1 目的
通过本次实验，学习和掌握小鼠骨髓多染 红细胞（PCE）微核测定方法。
2 原理
微核是在细胞的有丝分裂后期染色体有 规 律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留 在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝 粒断片或环。它在末期以后，单独形成一 个或几个规则的次核，被包含在细胞的胞 质内而形成，由于比核小得多故称微核。
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5 结果分析与评价
本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分 率表示。
PCE/NCE为评价细胞毒性的指标，受试组 PCE/NCE值与阴性对照组比较有统计学意 义表示受试化学毒物的剂量过大，试验结 果不可靠。
阴性对照和阳性对照组的微核发生率，应 与相关文献报道或研究历史数据相一致。
周龄，体重18～20g的小鼠。每组10只，雌 雄各半。
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剂量及分组
受试物应至少设三个剂量组，最高剂量组 原则上为不产生动物死亡的最大毒作用剂 量。一般取受试样品1/5、1/10、1/20 LD50 剂量。
另设溶剂对照组和阳性对照组。阳性对照 组可用环磷酰胺腹腔注射1次。阴性对照组 使用等体积的溶剂。
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染毒途径 腹腔注射
染毒次数及取样时间 一般采用两次或多次染毒。两次染毒：第
一次染毒后24小时进行第二次染毒，6小时 后取样；多次染毒：每天染毒1次，连续5 天，末次染毒后24小时取样。
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4.2 骨髓液的制备和涂片
试验动物一次染毒后，按确定的时间用颈 椎脱臼或麻醉法将其处死，取胸骨，擦净 血污，剔去肌肉，剪去骨骺，用小型止血 钳将骨髓挤于有一小滴小牛血清的清洁载 玻片上，混合均匀后推片。也可在股骨取 骨髓。