TetR转录因子Ms2583对分枝杆菌异烟肼敏感性的影响

Ｔ ｅ ｔ Ｒ转 录 因子 Ｍｓ ２ ５ ８ ３对 分枝杆 菌 异 烟 肼 敏 感 性 的 影 响
林 健 胡利 华
华 中农业大学农业微生物学国家重点 实验室／ 蛋 白质组 学平 台（ 中心） ， 武汉 ４ ３ ０ ０ ７ ０ 摘要 转录因子在细菌适应胁迫环境中发挥重要作用 ， 但是参 与药物胁迫的转 录因子还知之甚少 。本研究 以
三分之 一 的人 口感染过结 核杆 菌 ， 每年 １ ５ ０万 人死 于 素 （ Ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｏ ｍｙ ｃ ｉ ｎ ） 和 四环 素 （ Ｔ ｅ ｔ ｒ ａ ｃ ｙ ｃ ｌ ｉ ｎ ｅ ） 的 敏 感 结核病 ［ １ ］ 。结核病 难 以预 防和 治疗 的根本 原 因在 于 性 ｌ 】 。 。 。Ｔ ｅ ｔ Ｒ 家族是 分枝 杆菌 中分 布 最 广 泛 的 转 录 耐药 和 多重 耐药结 核分枝杆 菌 的 出现［ ２ ］ 。因此 ， 寻找 分枝 杆菌 的耐药 性相 关基 因 已成 为 结 核病 防 治领 域
Ｑ ９ ３ ９ ． ９ 文 献标 识码 Ａ 文章编号 １ ０ ０ ０ － ２ ４ ２ １ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ６ — ０ ０ ５ ４ — ０ ７ 中 图分 类 号
结核 分枝 杆 菌 （ Ｍｙ ｃ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｕ ｍ ｔ ｕ ｂ ｅ ｒ ｃ ｕ ｌ ｏ ｓ ｉ ｓ ） 是 一 子 Ｍｔ ｒ Ａ， 影 响 了分枝 杆菌对异烟肼 、 利副平 和链霉 素
Ｌ ２ １ （ Ｄ Ｅ ３ ） 和 ＸＲ 菌株 以 及 表 达 载 体 ｐ Ｅ Ｔ ２ ８ ａ 、 单 ｕ ｍ ｂ ｒ ｏ ｍｉ ｄ ｅ ， Ｅ Ｂ ） 的耐受性 ¨ ８ ］ 。可见 ， 不 同家族 的转 录 Ｂ
Ｂ Ｘ和 ｐ Ｔ ＲＧ、分 枝 杆 菌 穿 梭 载 体 因子几乎都 参与 了细菌对药 物 的耐 受性 ， 有 些转 录 因 杂 交 载 体 ｐ ＭＶ２ ６ １ 均 为农 业微 生物 学 国家重 点实 验室 蛋 白质 子还参与 了多药抗性 ， 如Ｏ ｍ ｐ Ｒ家族的转 录调节 因 ｐ
ｃ ｉ ｎ ， ｆ １ Ｐ ） 的抗性 ， 超 表 达 Ｍｓ ６ ５ ０ ８使 耻垢 分枝 杆 菌对
利福 平敏感 性降低 ， 表现 出利福 平抗性 ＿ ５ ； Ｅ ｔ ｈ Ｒ 编码
Ｃ ａ ｍＲ家族 的转录 因子 ， 控 制着分 枝 杆菌 对 乙胺 丁醇
基础。
１ 材 料 与 方 法
使耻垢分枝杆菌对 Ｉ ＮＨ 的敏感性增强 ； 基因保守结构域分析表明 Ｍｓ ２ ５ ８ ３ 编码一个 Ｔ ｅ ｔ Ｒ家族 的转录调节蛋 白； 凝 胶迁移率 阻滞实验和细菌单杂交实验证明 Ｍｓ ２ ５ ８ ３能够与 自身启动子特异结合 。 关键词 耻垢分枝杆菌 ； Ｔ ｅ ｔ Ｒ 家族转 录因子 ； Ｍｓ ２ ５ ８ ３ ； 敏感性 ； Ｉ Ｎ Ｈ
耻垢分枝杆菌 （ Ｍｙ ｃ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ Ｈ ｕ ｍ ｓ ｍｅ ｇ ｍａ ｔ ｉ ｓ ） 为研究对象 ， 通过在药物平板上筛选转 录因子超表达文库 ， 发现 ＭＳ ＭＥ Ｇ
一
２ ５ ８ ３ （ Ｍｓ ２ ５ ８ ３ ） 影响耻垢分枝杆菌（ Ｍ． ｓ ｍ ｅ ｇ ｍａ ｔ ｉ ｓ ） 对抗结核药物异烟肼 （ Ｉ ｓ ｏ ｎ ｉ ａ ｚ ｉ ｄ ， Ｉ ＮＨ） 的敏感性 。超表 达 Ｍｓ ２ ５ ８ ３
本研 究 以病 原 性 结 核 分 枝 杆 菌 （ Ｍ． ｔ ｕ ｂ ｅ ｒ ｃ ｕ ｌ ｏ — ｓ ｉ ｓ ） 的模 式 菌株 耻垢 分枝 杆 菌 （ Ｍ． ｓ ｍｅ ｇ ｍａ ｔ ｉ ｓ ） 为研
究对 象 ， 通 过 在药 物 平 板上 筛 选 耻 垢 分枝Fra Baidu bibliotek杆 菌 转 录 肼 的敏感性 ， 超表达 Ｍｓ ２ １ ７ ３使耻垢 分 枝杆 菌 对异 烟 因子超 表 达文库 ， 寻 找 与药 物 耐 受 性相 关 的转 录 因 肼（ Ｉ ｓ ｏ ｎ ｉ ａ ｚ ｉ ｄ ， Ｉ ＮＨ） 更 敏感＿ ４ ； Ｍｓ ６ ５ ０ ８是 Ｍａ ｒ Ｒ家 族 子， 旨在为 进一 步研 究 该 转 录 因 子 的调 控 机 制 奠 定 的转 录调节 因子 ， 调控着分 枝杆菌对 利福平 （ Ｒ ｉ ｆ ａ ｍｐ ｉ —
种 典型 的胞 内致病 菌 ， 它感染 引起 的结核病 严重 危 害 （ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍｙ ｃ ｉ ｎ ， Ｓ Ｍ） ３ 种 药物 的耐受 性［ ； Ｗｈ ｉ Ｂ ７家族 人 畜健康 ， 威胁 公 共 卫 生安 全 。在过 去 的 ２ ０ ０年 里 ， 的转录调节 因子 Ｗｈ 订 ３ ７ ， 至少调控 分枝杆 菌对 ４ 种 不 结核病 已累计造 成全世 界约 １ ０ 亿 人死 亡 。全球约 有 同的抗生素 如 异 烟 肼 、 氯 霉素 （ Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｍｙ ｃ ｅ ｔ ｉ ｎ ） 、 红 霉
的首要 问题 。
因子 ， 然 而 该家 族 大 部 分 的功 能 还 不是 十 分 清 楚 ，
其 中参 与 或直 接 介 导 药 物 耐受 性 的 转 录 因子 还 知
之 甚 少 。
转 录因子在介 导 分枝 杆 菌耐 药性 中发挥 着 重要 的调控 作 用 。 。 ］ 。如 ｇ ｆ ｃ Ｒ（ Ｍｓ ２ １ ７ ３ ） 编码 一 个 Ｇ ｎ ｔ Ｒ ／ Ｆ ａ ｄ Ｒ家族 的转 录 调节 因子 ， 调控 着 分枝 杆 菌 对异 烟
第 ３ ６ 卷 第 ６ 期
２ ０ １ ７年 １ １ 月
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Ｖ０ １ ． ３ ６ Ｎｏ ． ６
Ｎｏ ｖ ．２ ０１ ７， ５ ４－ － ６ ０
Ｊ ｏ ｕ ｍａ ｌ ｏ ｆ Ｈｕ ａ ｚ ｈ ｏ ｎ ￣ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ
． １ 材 料 （ Ｅ ｔ ｈ ａ ｍｂ ｕ ｔ ｏ ｌ ， Ｅ ＭＢ ） 的抗 性 ｌ ＿ ６ ； Ｔ ｅ ｔ Ｒ 家 族 的转 录 因 １ 耻 垢 分 枝杆 菌 ｍｃ １ ５ ５菌 株 、 大 肠杆 菌 ＤＨ５ ａ 、 子Ｒ ｖ ３ ０ ６ ６ 影 响了结核 分 枝 杆 菌对 溴 化 乙锭 （ Ｅ ｔ ｌ １ ｉ