维药骆驼蓬草质量标准研究

维药骆驼蓬草质量标准研究
目的：建立维药骆驼蓬草的质量标准。

方法：参照2010年版《中国药典》附录相关方法，对骆驼蓬草水分、总灰分、水溶性浸出物、酸不溶性灰分和重金属进行检测。

采用硅胶HSGF254薄层板上，以乙酸乙酯甲醇氨水（10∶15∶05）为展开剂，分别采用置紫外光（254nm）下检视、碘化铋钾显色以及乙酰胆碱脂酶导向的薄层色谱生物自显影技术对骆驼蓬草进行鉴别。

采用C18色谱柱（46 mm×250mm，5μm），以甲醇01%三氟乙酸溶液（15∶85）为流动相，在280 nm波长下对骆驼蓬草中活性成分鸭嘴花碱进行定量分析。

结果：采用紫外光（254 nm）下检视及乙酰胆碱脂酶生物自显影技术可对骆驼蓬草中的活性成分进行定性鉴别。

鸭嘴花碱在07923～7923mg·L-1呈良好的线性关系，方法平均回收率为1016%，RSD为19%，方法的日内和日间精密度均小于2%。

10批骆驼蓬草中鸭嘴花碱质量分数在023%～147%，波动较大。

结论：根据结果制定了药材中鸭嘴花碱的质量分数限度不得低于06%。

水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物分别不得过100%，200%，17%和300%。

重金属铅、镉、砷、汞、铜分别不得过5，3，2，2，20mg·kg-1。

建立的定性和定量方法可用于维药骆驼蓬草药材的质量控制。

标签：骆驼蓬草；骆驼蓬碱；去氢骆驼蓬碱；鸭嘴花碱；乙酰胆碱脂酶；薄层色谱生物自显影法；高效液相色谱；质量标准
1材料
Agilent1100高效液相色谱仪（四元泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱恒温箱、DAD检测器）；Agilent化学工作站；薄层色谱自动点样器（Linomat Ⅵ，瑞士CAMAG公司），薄层色谱摄像仪（Reprostar3，瑞士CAMAG公司）；BT124S电子分析天平（Sartorius），KQ250DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；箱式电炉（SX2系列，上海圣欣科学仪器有限公司）。

鸭嘴花碱（vasicine，V AS）、骆驼蓬碱（harmaline，HAL）、去氢骆驼蓬碱（harmine，HAR）由上海中药标准化研究中心提供（HPLC测定纯度大于98%）；10批骆驼蓬草药材均采自新疆，由上海中医药大学王长虹研究员鉴定为骆驼蓬Pharmala的干燥地上部分，凭证标本存放于上海中药标准化研究中心标本室，样本信息见表1。

硅胶预制板（HSGF254，烟台化学工业研究所）。

甲醇分别有分析纯、色谱纯，三氟乙酸为色谱纯，水为超纯水。

牛血清蛋白（Roclu公司），乙酰胆碱酯酶[electriceel（EC3117），StLouis，MO；productnoC3389]，α乙酸萘酯（Sigma公司），Fast Blue B Salt（Sigma公司）。

2方法与结果
21显微鉴别
211横切面采取石蜡制片法，分别经过取材、软化、固定、冲洗、脱水、
透明、浸蜡、包埋、切片、粘贴、脱蜡、染色，观察茎横切面和叶横切面。

结果显示，茎横切面（约3mm）表皮细胞1列，近方形，外被角质层；皮层细胞长方形砖砌状，由外向内增大，约10余列；中柱鞘纤维2～4列；维管束外韧性，约10～12个，连续排列呈环状；韧皮部细胞较小，形成层不明显；木质部扇面形，导管径向排列；髓部为大型薄壁细胞。

叶横切面上下表皮细胞各1列，长方形或近方形，排列紧密，外被略突起的角质层；等面叶，栅状组织多由2列细胞组成；维管束外韧型，主脉维管束较大，侧脉维管束较小，在叶的每边有5～6个。

212粉末显微鉴别取粉末少许，置载玻片上，滴加水合氯醛液，在酒精灯上加热透化，透化后滴加稀甘油少许，加盖玻片。

显微观察结果，粉末黄绿色，薄壁细胞较大，长32～78μm，宽22～25μm，内含草酸钙针晶、簇晶、颗粒状物。

气孔不定式，椭圆形，副卫细胞3～5个。

石细胞类圆形或多角形，淡黄色，纹孔明显，大小悬殊，长80～230μm，宽35～80μm，细胞壁厚薄悬殊，7～30μm。

分泌腔圆形，黄色，具蜂巢状纹理，内含油滴。

花粉粒类圆形，黄色，具3～4个萌发孔，表面光滑或具颗粒状纹理。

花粉囊细胞类圆形或不规则形，具网纹，长径30～86μm，短径16～28μm。

星状毛少见，可见具8个分枝者。

纤维条状或梭形，有的壁有隔纹。

导管为螺纹、具缘纹孔。

多见针晶，细小，亦可见簇晶与双锥八面体结晶。

22检查
221水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物测定参照《中国药典》2010年版一部附录有关方法对骆驼蓬草药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物测定进行测定，结果见表1。

根据测定结果，确定水分不得过100%，总灰分和酸不溶性灰分别为不得过200%和17%，浸出物不得少于300%。

222重金属测定采用电感偶合等离子质谱法，参照《中国药典》2010年版一部（附录ⅨB）铅、镉、砷、汞、铜测定法测定，结果见表2。

根据测定结果，确定铅、镉、砷、汞、铜分别不得过5，3，2，2，20mg·kg-1。

23薄层色谱定性鉴别
231对照品溶液的制备取V AS，HAL，HAR对照品适量，加甲醇分别制成每1mL各含1mg的溶液，作为对照品溶液。

232供试品溶液的制备取本品粉末（过2号筛）1g，加甲醇10mL，超声处理25min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，滤液作为供试品溶液。

233点样、展开吸取上述对照品和供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶HSGF254薄层板上，以乙酸乙酯甲醇氨水（10∶15∶05）为展开剂。

234不同显色方法的比较荧光观察与碘化铋钾显色。

将展开后的薄层板
首先置紫外灯（254nm）下检视，再喷以碘化铋钾试液，置105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1。

3讨论
与原标准[3]比较，增加了显微鉴别（横切面）、检查、薄层鉴别、含量测定等内容，检查项目包括水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、重金属等项目，以便更好控制维药骆驼蓬药材的质量。

本文所建立的薄层色谱鉴别方法，经过系统适用性实验表明，不同类型的预制薄层板、展开温度和湿度对展开效果的影响均较小，说明方法的适用性较强。

薄层板展开后直接在254nm紫外灯下检视荧光斑点，方法简便，不需要特殊的显色剂，但其缺点是缺乏专属性。

碘化铋钾试剂对生物碱类成分来说专属性较强，但其灵敏度稍低。

乙酰胆碱脂酶薄层色谱生物自显影技术是一项新的技术，不仅具有极高的检测灵敏度和专属性，而且在成分鉴别的同时，还可将成分斑点的鉴别与药理活性相联系，并可用于活性成分的导向分离与结构鉴定[1213]，是对生物鉴定法的进一步发展。

因此，本文建立的薄层色谱鉴别方法科学、合理、适用性强，可有效地对骆驼蓬草进行鉴别分析。

文献[49]报道骆驼蓬属植物主要含有生物碱类、黄酮类化合物等成分。

作者前期研究表明，骆驼蓬种子中以HAL和HAR等β咔啉类生物碱类成分为主，而骆驼蓬的地上部分则主要含有以V AS为代表的喹唑啉类生物碱类成分，另含有较多的黄酮类成分。

现代药理学表明V AS具有子宫兴奋作用、抗病原体作用、轻度降压作用、以及对气管平滑肌有舒张作用等多方面药理作用[1415]，与骆驼蓬草的功效接近[3]，且V AS在骆驼蓬草中含量高。

因此，选择以V AS为指标成分建立骆驼蓬草的定量分析方法。

而其中的黄酮类成分是否发挥药理作用，是否需要作为质量控制指标正在进一步研究中。

经对10批骆驼蓬草药材中的V AS含量进行测定，V AS的质量分数在023%～147%变化，差异较大。

因此，迫切需要对更多样品进行测定，从而保障临床的用药安全。

[致谢]重金属含量的电感偶合等离子质谱法测定得到上海食品药品检验所中药室季申主任和王欣美主管药师的技术支持，显微鉴别得到上海中医药大学中药学院生药教研室张红梅讲师的技术支持。

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