水产病原微生物学导学资料

水产病原微生物学导学资料
一、名词解释（24分，每个4分）
1、原生质体：指在认为条件下，用溶菌酶除尽原有细胞壁或用青霉素抑制新生细胞壁合成后所得到的仅有一层细胞膜包裹着的圆球状渗透敏感细胞。

2、病毒：病毒是一种生物实体，其基因组是能利用细胞的合成系统在活细胞内复制，并合成能将病毒基因组转移到其它细胞中去特殊颗粒的核酸分子（DNA或RNA）。

3、菌落(colony)：某个细菌在适合生长的固体培养基表面或内部，在适宜的条件下，经过一定时间培养，可形成一个肉眼可见的有一定形态的独立群体。

4、质粒：闭合环状双链DNA，在基因工程中用作载体，分为克隆质粒和表达质粒。

5、诱变育种：诱变育种是指利用物理或化学诱变剂处理均匀而分散的微生物细胞群，促进其突变率显著提高，然后采用简便、快速和高效的筛选方法，从中挑选少数符合育种目的的突变株，以供生产实践或科学实验之用。

6、基因工程：将重组对象的目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞,构建成工程菌（或细胞）,实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。

二、选择题（16分，每空1分）
1、A C
2、C A
3、A
4、A
5、C
6、A
7、A
8、D
9、A
10、A
11、B C
12、A
三、判断题（10分）
√√×√√√√√√√
四、简答题（35分）
1、简述细菌、放线菌的应用有哪些？（5分）
（1）制备面包，酸奶等食品
（2）制备微生物药物
（3）制备氨基酸、有机酸等营养物质
（4）制备各种酶制剂
（5）制备微生物农药
（6）制备微生态制剂
（7）处理环境污水
（8）产生抗生素
（9）产生色素
（注：回答出以上中的5条即可，每条一分）
2、以噬菌体为例，说明病毒的繁殖过程。

（5分）
①吸附。

病毒表面蛋白与细胞受体特异性结合。

（1分）②侵入。

以注射方式。

尾丝收缩，
尾管插入细胞壁和细胞膜中，释放少量溶菌酶水解细胞壁上的肽聚糖，使核酸注入到细胞内，
（1分）③增值。

早期基因利用宿主内的RNA聚合酶转录成早期mRNA，蛋白质外壳留在外面。

并转译成早期蛋白（包括次早期mRNA聚合酶和更改蛋白）；次早期基因经次早期mRNA聚
合酶转录成次早期mRNA并转译成次早期蛋白（包括DNA酶、DNA聚合酶、HMC、晚期
mRNA聚合酶；晚期基因经晚期mRNA聚合酶转录成晚期mRNA并转译成晚期蛋白（包括装配噬菌体用的部件：头部蛋白、尾部蛋白、各种装配蛋白和溶菌酶）（1分）④成熟。

即把已经合成的各个部件进行装配的过程。

（1分）⑤裂解。

大量的噬菌体将宿主细胞自内裂解。

（1分）
3、简述微生物的生长曲线的绘制方法（5分）
首先制备待检测菌的菌悬液，按照1%的接种量接种于适合其生长的液体培养基中。

（1分）
定时取样，测600nm处的吸光值。

（2分）以时间为横坐标，细菌的量为纵坐标绘制生长曲
线。

（2分）
4、简述革兰氏染色的原理和步骤。

（8分）
步骤：首先用结晶紫进行初染后用碘液进行媒染，再用95%的乙醇进行脱色后用蕃红花红复
染，在显微镜下观察。

（3分）
原理：细胞经结晶紫染成紫色，加碘液后，结晶紫与碘形成大的复合物。

（1分）革兰氏阳
性菌的细胞壁中的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之脱水而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合
物留在细胞内而不被脱色；（2分）而革兰氏阴性菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇
处理后，部分细胞壁被溶解并改变了其组织状态，孔径增大，不能阻止溶剂进入将结晶紫与
碘的复合物洗去。

（2分）
5、简述基因工程的基本步骤。

（7分）
（1）目的基因的获得：通过PCR或者人工合成的方法获得目的基因。

（1分）
（2）选择优良的载体：选择适合的质粒或者噬菌体做为载体。

（1分）
（3）目的基因与载体DNA的体外重组：酶切目的基因和质粒形成粘性末端，利用DNA
合成酶进行连接形成重组质粒。

（2分）
（4）导入受体细胞：制备感受态细胞，将重组质粒导入。

（1分）
（5）筛选和鉴定：利用抗性基因，PCR，测序等方法在基因水平进行鉴定；利用
Westernblot等及时在蛋白水平上进行鉴定。

（2分）
6、简述水产动物疾病的诊断方法有哪些。

（5分）
（1）根据患病部位的表观特征进行判断。

（1分）
（2）组织切片法对患病部位进行染色观察。

（1分）
（3）分离致病菌或者致病病毒，进行鉴定。

（1分）
（4）利用免疫学方法进行抗体检测。

（1分）
（5）利用分子生物学方法比如LAMP，CRISPR-cas13a，定量PCR等方法进行诊断。

（1
分）
五、论述题（15分）
某养殖池内的一条大菱鲆的鳃部发生病变，如何利用柯赫原则分离致病菌？如何利用药敏实验确定哪种药物有效？
在无菌的条件下获取大菱鲆的患病部位鳃部。

无菌剪把它剪碎后加入无菌水中震荡
20min。

将制备的菌悬液梯度稀释后，涂布到LB固体培养基（或者牛肉膏蛋白胨培养基），28度倒置培养。

将优势菌株利用划单菌落的方法进行纯化。

将纯化的菌株分别注射到健康的大菱鲆体内，能够在相同部位获得相同症状的菌株为致病菌。

（8分）
配制LB固体培养基（或者牛肉膏蛋白胨培养基），灭菌后倒平板。

在平板上涂布致病菌的菌悬液。

然后放上4个滤纸片，分别滴加上不同的药液，放入恒温箱进行培养。

第二天观察结果，看是否有透明圈。

有透明圈的药液有效。

（7分）。