伊维菌素微乳制剂的过敏性研究

伊维菌素微乳制剂的过敏性研究
邢守叶;周绪正;李冰;牛建荣;魏小娟;张继瑜
【摘要】本试验旨在观察伊维菌素微乳制剂对动物的过敏性反应.以《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》为指导,选用豚鼠及Wistar大鼠为试验动物,采用全身主动过敏试验和被动皮肤过敏试验观察伊维菌素微乳制剂对动物的致敏作用.结果显示伊维菌素微乳制剂对豚鼠和Wistar大鼠的过敏性反应均为阴性.本试验为伊维菌素微乳制剂的安全性评价提供了试验依据.
【期刊名称】《中国畜牧兽医》
【年(卷),期】2014(041)011
【总页数】4页(P275-278)
【关键词】伊维菌素微乳制剂;豚鼠;大鼠;过敏性试验
【作者】邢守叶;周绪正;李冰;牛建荣;魏小娟;张继瑜
【作者单位】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃兰州 730070;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃兰州730070;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃兰州 730070;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃兰州 730070;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部兽用药物创制重点实验室,甘肃兰州 730070
【正文语种】中文
【中图分类】S859.79
伊维菌素(ivermectin，IVM)是一种新型高效、广谱、低毒、安全的大环内酯类抗生素，是美国Merck公司对阿维菌素(avermectin，AVM) B1的C22与C23之
间的双键采用Wilkinson催化，在均相体系中加氢处理后得到的第1个阿维菌素
类药物衍生物(马满堂等，2006)。

伊维菌素的毒性只有阿维菌素B1的一半左右，对哺乳动物的机体组织有更强的渗透性和安全性，特别适用于一般口服驱虫剂难以到达的肌肉、器官和特殊组织中的寄生虫防制(马承铸等，2000)。

伊维菌素可用
于马、牛、绵羊、猪、犬、禽等多种动物驱杀线虫等寄生虫(Courtney等，1995)，对人畜安全，已开发出多种可供兽医临床使用的剂型，如片剂、注射剂等。

目前，兽医临床应用的伊维菌素制剂存在每次给药维持时间短、需多次重复给药等缺点，而且普通制剂体内血药浓度起伏大，常出现“峰谷”现象，导致其安全性和有效性均较低(赵永星等，2010)。

研制开发新的适用剂型，无疑是解决和提高伊维菌素
防制效果的有效方法。

微乳(microemulsion，ME)又称纳米乳(nanoemulsion)，是粒径10～100 nm，由水、油、表面活性剂和助表面活性剂组成的一种新型药
物载体。

中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所以微乳为主要载体，研制出一种新型注射剂剂型——伊维菌素微乳，该载体对水溶性、脂溶性及难溶性药物均有良
好的溶解能力，据Szebeni等(2001)报道，微乳载体具有缓释和靶向作用。

本研
究以《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》为指导，对伊维菌素微乳制剂进行了全身主动过敏试验和被动皮肤过敏试验，旨在为该药临床用药的安全性提供科学依据。

1.1 材料
1.1.1 供试药品及试剂伊维菌素微乳制剂(规格：1 g/100 mL)由中国农业科学院兰
州畜牧与兽药研究所研制；生理盐水(批号：07050202)购自山东临淄制药厂；牛血清白蛋白(BSA)购自Sigma公司；伊文斯蓝染料购自北京利科生化科贸有限公司。

1.1.2 试验动物普通级豚鼠，40只，体重300～400 g，雌雄各半，购自中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物场，许可证号：SCXK(甘)2010-0001；Wistar大鼠，32只，体重180～220 g，雌雄各半，购自兰州军区兰州总医院实验动物中心，许可证号：SCXK(军)2012—0020。

1.2 方法
1.2.1 全身主动过敏试验(ASA)
1.2.1.1 分组取豚鼠40只，雌雄各半，随机分成4组，每组10只，标记为伊维菌素微乳高剂量组(0.6 mg/kg)、伊维菌素微乳低剂量组(0.3 mg/kg)、阳性对照组(BSA 5 mg/只)、阴性对照组(等体积的生理盐水)。

1.2.1.2 致敏分别对各组豚鼠隔天腹腔注射1次相应溶液，体积均为0.5 mL/只，共注射3次，使豚鼠致敏。

1.2.1.3 激发末次给药后各组动物随机分为2小组，每小组5只。

分别于首次给药后的第14及21天，各组动物1次静脉注射相应溶液1 mL激发。

1.2.1.4 指标观察及判断标准致敏期间每天观察每只动物的症状。

静脉注射激发后至30 min，参照表1中的过敏反应症状详细观察每只动物的反应，记录动物有无抓鼻、竖毛、咳嗽、喷嚏、呼吸困难、颤抖、休克甚至死亡等过敏反应，症状的出现及消失时间，最长观察3 h。

根据表2全身致敏性评价标准判断过敏反应强度，计算每组的过敏反应阳性率。

根据过敏反应发生率和发生程度进行综合判断。

1.2.1.5 数据统计按照表2判定每只动物的反应程度级别，用非参数检验进行组间比较，若整体分布水平有差异，则用Wilcoxon Signed Ranks Test检验进行两两比较。

1.2.2 被动皮肤过敏试验(PCA)
1.2.2.1 分组试验开始前，动物预饲养1周以观察其活动表现。

取健康Wistar大鼠8只，雌雄各半，随机分成4组，每组2只，标记为伊维菌素微乳高剂量组(0.6 mg/kg)、伊维菌素微乳低剂量组(0.3 mg/kg)、阳性对照组(BSA 5 mg/只)、阴性对照组(等体积的生理盐水)。

1.2.2.2 致敏分别对各组Wistar大鼠隔天腹腔注射1次相应溶液，体积均为0.5 mL/只，共注射3次。

1.2.2.3 抗血清制备末次致敏后第10天，取致敏后的8只Wistar大鼠以3%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，2000 r/min离心10 min，分离血清，-20 ℃保存，2周内备用。

1.2.2.4 被动致敏另取24只健康Wistar大鼠，随机分为4组，每组6只，分组同1.2.2.1。

分别在各组大鼠背中线两侧距脊柱约1.5 cm处剪毛，面积为3×4 cm2。

取上述含IgE的不同抗血清，用生理盐水按1∶2、1∶4和1∶8比例分别稀释成3个稀释度，将稀释的抗血清按左侧(1∶2比例)、右侧上(1∶4比例)、右侧下(1∶8比例)皮内注射于Wistar大鼠背部预先剪毛部位，每侧注射一个点，每点注射0.1 mL。

1.2.2.5 激发被动致敏24 h后，各组尾静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原加等量的0.8%伊文斯蓝染料共1 mL(各0.5 mL)，进行激发。

1.2.2.6 结果测定 30 min后麻醉处死各组Wistar大鼠，剪取背部皮肤，测量皮肤内层的斑点大小，直径大于5 mm者为阳性。

不规则斑点的直径为长径与短径之和的一半。

2.1 全身主动过敏试验(ASA) 致敏给药后的反应：各组动物于致敏(第1、3、5天腹腔注射)后，所有动物均未出现特征性的过敏反应症状。

激发给药后的反应：各组14和21 d激发给药后的表现相似。

阳性对照组(BSA 5
mg/只)激发后出现明显的过敏反应，主要表现为躁动、颤抖、搔鼻、打喷嚏、排尿、排粪、步态不稳、跳跃、喘息等，根据表2依照出现的症状，判定动物反应
级数在2～3级之间，为阳性反应，阳性率为100%。

伊维菌素微乳高、低剂量组及阴性对照组激发后所有动物均未出现明显的过敏反应，阳性率为0(表3)。

2.2 被动皮肤过敏试验(PCA) 伊维菌素微乳高、低剂量组、阴性对照组Wistar大
鼠均未出现明显的皮肤过敏现象，蓝斑直径均在5 mm以下，阳性对照组大鼠出
现了明显的皮肤过敏现象，蓝斑直径大于5 mm(表4)。

结果表明伊维菌素微乳高、低剂量组对Wistar大鼠的皮肤过敏反应呈阴性。

过敏反应又称变态反应，是指抗原(药物或其他致敏原)与抗体结合形成的一种对机体有害的免疫反应。

在药物引起的过敏反应中，药物作为抗原，与附着在肥大细胞、嗜碱细胞表面的IgE相结合，引起介质的释放，导致一系列临床症状，如皮疹、皮炎、水肿、发热、哮喘、呼吸困难及过敏性休克等(黎奔等，2006)。

药物的有效
成分、杂质、辅助成分、无效成分均可能作为过敏原引发机体产生过敏反应。

近年来，偶见伊维菌素因用量过大引起动物中毒或过敏的报道，杨小玲(2012)报道，黄牛和山羊均因注射过量伊维菌素出现中毒症状，甚至死亡；陈业峤等(1998)报道，犬猫注射过量伊维菌素，也出现中毒反应。

少数犬种敏感，正常用量即可出现中毒症状(杨怀等，2005)。

也有个别犬种偶见过敏，引起死亡，1只9月龄的京巴犬，患部涂擦伊维菌素，引起全身过敏(刘孝玮等，2004)。

因此，对伊维菌素
进行过敏性研究很有必要。

本研究就动物接触伊维菌素微乳后是否产生全身或局部过敏反应进行研究，以豚鼠及Wistar大鼠为试验动物，高、低剂量组给药剂量均高于伊维菌素微乳临床使用剂量(牛、羊，0.2 mg/kg)，BSA为阳性对照，生理盐水为阴性对照，观察动物临床过敏症状。

结果测得，除阳性对照组动物出现不同程度的临床过敏症状外，伊维菌素微乳剂量组及阴性对照组均未出现过敏反应，结果表明，伊维菌素微乳制剂对
豚鼠和Wistar大鼠的过敏性反应均为阴性，故受试物伊维菌素微乳制剂在注射量0.3 mg/kg条件下，对豚鼠和Wistar大鼠没有过敏性，为其在临床上的安全使用奠定了理论基础。

【相关文献】
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