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论文提交日期：二 0 一二年五月 论文答辩日期：二 0 一二年六月
学 位 类 型：医学科学学位
学位授予单位：广州医学院源自答辩委员会主席：评议人：
二 0 一二年五月
广州医学院
二 00 九级博士学位论文
脆性 X 相关疾病 FMR1 基因突变 筛查和致病性分析
Screening and Pathogenicity Analysis of the FMR1 Gene Mutation in Patients with Fragile X-associated Disorders
分类号：R742.1 U D C：616.831
密级：一般 编号：2009310126
广州医学院
博士学位论文
脆性 X 相关疾病 FMR1 基因突变 筛查和致病性分析
研究生：段现来 导 师：易咏红 教授
廖卫平 教授
申请学位级别：医学博士
年
级：二 00 九级
学 位 专 业：神经病学
研 究 方 向：神经遗传性疾病
此外，也有研究报道具有典型 FXS 临床表型的患者 FMR1 基因并未出现 CGG 重复序列的异常扩增，但是在 FMR1 基因外显子区域出现了错义突变等变异类 型，因此 FMR1 基因突变的致病机制值得深入研究。 【研究目的】
筛查FMR1基因外显子突变，探讨筛查到的错义突变在脆性X相关性疾病中 可能的致病机制。 【研究方法】
参照美国医学遗传学会推荐的 FXD 分子筛查指南（2005 年版），选取疑似 FXD 患者 68 例（包括家系），其中不明原因的精神发育迟滞病例 56 例、FXTAS 疑似患者 2 例、FXPOI 疑似患者 10 例。常规 PCR 对 FMR1 基因 5'-UTR 的(CGG)n 区段进行 PCR 扩增测序，未能扩出目的片段或女性可疑个体行 Southern Blo（t SB） 及 Capillary Electrophoresis（CE）测序扫描分析。PCR 扩增测序(CGG)n 正常的 疑似 FXS 或 FXTAS 患者，排除 FMR2 基因(CCG)n 异常扩增突变后，对 FMR1 基因外显子及 3'-UTR 区段采用常规 PCR 方法扩增测序筛查。
广州医学院·广州 二 0 一二年五月
目录
中文摘要............................................................................................................................... 1 Abstract .................................................................................................................................4 缩略词表............................................................................................................................... 7 前 言...............................................................................................................................9 第一部分 疑似 FXD 患者 FMR1 基因突变筛查 ..........................................................15
............................................................................................................................. 45 2.1 材料与方法 .........................................................................................................47 2.2 结果 .....................................................................................................................58 2.3 讨论 .....................................................................................................................62 2.4 结论 .....................................................................................................................69 全文总结............................................................................................................................. 70 参考文献............................................................................................................................. 72 综 述.............................................................................................................................76 附 录.............................................................................................................................90 攻读博士期间发表论文情况........................................................................................... 102 致 谢...........................................................................................................................103 学位论文原创性声明 ....................................................................................................... 104 学位论文知识产权权属声明........................................................................................... 104 关于学位论文使用授权的说明....................................................................................... 104
中文摘要
脆性 X 相关疾病 FMR1 基因突变筛查和致病性分析
学 科： 内科学： 专 业：神经病学
研究生: 导 师:
.
段现来 易咏红 教授 廖卫平 教授
中文摘要
【研究背景】 脆性 X 相关性疾病（Fragile X-associated disorders，FXD）与由脆性 X 智力
低下基因 1（Fragile X Mental retardation 1，FMR1）5‘非翻译区（5'-untranslated region，UTR）CGG 三核苷酸重复序列的异常扩增有关。CGG 重复>200 次（全 突变）导致智能低下为主要表型的脆性 X 综合征(Fragile X syndrome，FXS)， 55-200 次 CGG 重复者（前突变），部分患者可出现脆性 X 相关性震颤/共济失调 综合症（Fragile X-associated tremor ataxia syndrome，FXTAS)，部分女性则出现 脆 性 X 相 关 原 发 性 卵 巢 功 能 不 全 （ FragileX-associated primary ovarian insufficiency，FXPOI)。
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广州医学院博士学位论文
对筛查到的错义突变病例行 FMR1 基因及相关基因行实时定量 PCR 和 2－△ △CT 法分析检测 mRNA 的相对表达水平，选择表达异常的基因行常规 PCR 外显 子扩增测序。并对所筛查到的突变位点进行保守性分析，同时运用 CFSSP、 PANTHER、SIFT、Polyphen2 和 PMut 等在线预测软件对突变蛋白质进行二级结 构分析及致病性预测分析，以探讨 FMR1 基因错义突变的致病性。 【研究结果】
1.1 材料与方法 ........................................................................................................17 1.2 结果 ....................................................................................................................33 1.3 讨论 ....................................................................................................................42 1.4 结论 ....................................................................................................................46 第二部分 FMR1 基因外显错义突变（c.1877C>T）致病性分析
1. 本研究在精神发育迟滞组患者中筛查到 5 例全突变 FXS 患者（1 例女性 和 4 例男性）和 1 例处于“grey zone”的患儿（CGG 重复 47 次）；全突变患者 在本组入选的总体智力低下患者和男性智力低下患者中所占比例分别为： 8.9%(5/56)和 7.7%(4/52)；其中 3 个智力低下家系中，第一个全突变患儿家系母 亲为前突变（CGG30/CGG86），妹妹为全突变；第二个全突变患者家系中其母亲 为全突变；第三个全突变家系中患者外婆、母亲、姨妈和舅舅均为全突变；处于 ―grey zone‖的患儿，其母亲也是同样重复（CGG36/CGG47）；疑似 FXTAS 和 FXPOI 患者（POF）未发现前突变携带者；在 FXS 及 FXTAS 疑似患者中也未发 现 FMR2 全突变。
博士研究生：段现来
年
级：二 00 九级
学 科 专业：内科学 导 师 单位：广州医学院第二附属医院
广州医学院神经科学研究所
学 号：2009310126 院系名称：广州医学院第二临床学院 指导教师：易咏红 教授
廖卫平 教授
本课题受国家自然科学基金（30870876/C090301、81171073/H0905）资助