一例鸽疱疹病毒感染病例的诊治

—CROP病毒感染病例的诊治
王慧##程小果
(1山东省动物病原微生物工程实验室山东滨州256606
2山东滨州沃华生物工程有限公司山东滨州256606)
%型鸽疱疹病毒(Pigeon herpesvirus1, PHV-1)又称哥伦比亚疱疹病毒％型(CoUmbi) herpesvirus1,CoHV-1),是禽疱疹病毒科、cr疱疹病毒亚科、马立克氏病毒属的一员+12。

鸽是该病毒的自然宿主，鸽感染％型疱疹病毒后，主要表现为厌食、精神不振等，发病急，死亡率高，给养鸽业造成较大的经济损失*
随着国内养鸽业的快速发展，鸽存栏量持续增加，鸽病也越来越多，且临床表现越来越复杂囚。

基于此，如何从复杂的临床病例中确诊疾病从而做出适宜的防治方案尤其重要，建立快速、准确的检测方法势在必行*
2019年9月北京某养鸽户饲养的赛鸽出现食欲下降、嗦囊积食、精神沉郁等症状，个别病鸽有神经症状，严重者死亡*经流行病学调查、临床诊断、病理解剖和实验室诊断等环节，患鸽最终确诊为鸽疱疹病毒感染，现将诊治情况报道如下*
1发病情况
发病群为约(月龄赛鸽，共100余羽，至送检时已有约30羽发病，死亡10余羽*病鸽食欲下降、精神沉郁，有神经症状，经恩诺沙星治疗3d后未见明显好转*
经调查，鸽群分别于1月龄、3月龄接种过鸡新城疫灭活疫苗，均为0.5oL/羽-月龄刺种过鸡痘活疫苗(鹤鹑化弱毒株)，1羽份/羽*
2临床症状
病鸽羽毛蓬乱，精神沉郁，下痢，打喷嚏，鼻孔堵塞充满黏液*有的病鸽出现一侧结膜炎，眼睑肿胀，呼吸困难、有啰音*赛鸽死亡前大口喘气，头颈前伸，后快速衰竭死亡，发病急，病程为2〜(d*
"为通信作者3剖检病变
剖检6羽病死鸽，口腔及喉气管炎黏膜充血，咽部黏膜出现轻薄的白喉性假膜，气管环状出血，肝脏瘀血、有坏死灶，脾脏坏死，肺脏瘀血，肾脏肿胀，个别病死鸽出现鼻窦炎*
4诊断
4.1初步诊断
依据鸽群的免疫及用药情况，结合鸽群的整体发病，以及病死鸽的临床症状、剖检病变和健康鸽的血清学调查等信息，初步诊断为鸽疱疹病毒感染，但不能排除鸽新城疫或黏膜型鸽痘*
4.2实验室诊断
42.1血清抗体检测:随机采集16份同一鸽群表观健康鸽的血液，分离血清检测其新城疫HI抗体水平*结果新城疫HI抗体几何平均数为7.52log2,且均匀度良好(CV=0.15),表明鸽群对于接种的鸡新城疫灭活疫苗反应良好，且产生了理想水平的保护性抗体*
4.2.2PCR检测和测序：参照相关文献建立并验证的方法46,本实验室设计了3对检测引物，通过PCR(RT-PCR)方法来进行实验室检测，用于鸽疱疹病毒感染、鸽新城疫及鸽痘的筛查*参照北京全式金生物技术有限公司的EasyPure Viral DNA/ RNA kit试剂盒说明，以病死鸽喉头、气管等处病料组织提取的DNA/RNA为模板，进行PCR(RT-PCR)反应,再通过1%的琼脂糖凝胶电泳及凝胶成像系统鉴定，回收目的条带，送华大基因(北京)进行序列测定，将所得核昔酸序列通过NCBI的Blast 比对进行同源性分析*琼脂糖凝胶电泳结果表明，仅针对％型鸽疱疹病毒的PCR(RT-PCR)反应得到了约242bp的扩增产物，其大小与预期相符，其他两项病毒检测项目和阴性对照均未扩增出条带*
序列测定和分析表明，所扩增的基因片段序列与发表的I型鸽疱疹病毒的相应核昔酸序列同源性在99%以上，与PHV-1的分子生物学特征相符*
4.2.3病毒分离和PCR复检:参照文献介绍的方法,将病死鸽喉头拭子无菌滤液接种鸡胚成纤维(CEF)细胞,定期观察细胞病变*收获接种48h内的细胞，反复冻融3次后，按照上述“4.2.2”的方法提取核酸进行上述3种疑似病原的复验*结果接种CEF 细胞30h后细胞体积增大,形成合胞体*PCR复验结果为仅针对PHV1的PCR反应得到了与预期相符的约242bp的扩增产物，其他两项病毒检测及阴性对照均无条带，与PCR初次检测的结果相一致* 4.3诊断结果
经初步诊断，结合实验室诊断，尤其是病毒分离和基因测序，最终确诊为鸽疱疹病毒感染*
5鸽疱疹病毒感染的治疗
目前，尚无可针对I型鸽疱疹病毒的商品化疫苗，且对于鸽疱疹病毒感染病鸽，也无特效药物进行治疗，为临床防治鸽疱疹病毒感染增加了难度*
建议畜主给予抗病毒、抗菌等针对性治疗，选择双黄连、黄英多糖等中药结合干扰素或白细胞介素-2(IL-2)等生物制剂联合抗病毒治疗，同时提升机体的免疫力。

饲料或饮水中添加泰乐菌素、氟苯尼考等广谱抗生素以防治细菌或支原体等继发感染*
6讨论
6.1重视鸽疱疹病毒感染防控
鸽疱疹病毒感染于1945年被首次报道后，目前在全世界各地均有流行和发病，给养鸽业造成了重大的危害*与其他疱疹病毒感染和发病特性相类似，鸽I型疱疹病毒可在鸽群以潜伏感染的方式而健康带毒*潜伏感染的鸽会不定期向体外排出病毒*一旦鸽群因感染一些疾病或免疫力下降，健康带毒鸽即可大量排出病毒*大多数潜伏性感染的成年鸽在交配季节和饲养乳鸽期内，可从其喉内排出病毒，并将病毒传给乳鸽*乳鸽由于母源抗体的保护并不发病，而成为无症状的带毒者；而较大一些的幼鸽由于母源抗体的衰减等因素而成为易感者，因此临床上1〜6月龄幼鸽较为易感*因此，鸽群潜伏带毒极大地增加了本病的防控难度*
对本病的防控需要从生物安全等角度入手，引进鸽子需要严格隔离后再混入鸽群；对于鸽舍或公棚定期进行消毒，及时隔离、诊治病鸽*
6.2PCR检测不能作为确诊的唯一依据
对于鸽疱疹病毒感染的确诊，需要结合实验室病毒分离，而不能只依靠临床剖检或PCR检测*尽管一些研究表明PCR检测可以快速、准确地检测病毒［34］，可以成为临床确诊的主要依据，但是PCR检测还存在假阳性、假阴性等不足，且鸽群可健康带毒，若处于非排毒期也可能检测不到，因此在监测采样时样品数量要尽可能多一些*
本病例结合了鸽群的发病特征及剖检病变，PHV-1病原的分离鉴定和基因测序，以及关键病原的鉴别排除等环节才最终确诊*因病毒分离以及基因测序工作较为繁琐，故病毒分离可以与基因测序同步进行，提高检测效率的同时也利于本病的最终确诊和高效防治*
参考文献
［1］SAIF Y M.禽病学［M］.12版.苏敬良，高福，索勋主译.
北京：中国农业出版社，2012：468-469.
［2］赵宝华，戴鼎震，杨一波.鸽病防治图谱［M］.上海：上海科学技术出版社，2017:70-71.
［3］茅慧华，张志成，方光远，等.七个不同地区鸽场PTTV、PPMV-I和P,HV混合感染的调查［J］.中国家禽，2017
(17):69-729
［4］蒋文明，侯广宇，李金平，等.鸽疱疹病毒与腺病毒感染的PCR检测方法的建立［J］动物医学进展，2009(8)：63-65.
［5］朱杰，赵晴晴，陈广仁，等.免疫鸽群中2株新城疫病毒的分离鉴定及遗传进化分析+,中国兽医科学，2012(10)：998-10019
［6］余晓彬，邵冬冬，戴鼎震.鸽痘病毒的分离与鉴定中国家禽，2009(7)：45-46.。