反相高效液相色谱法测定吉非罗齐片中主药的含量

反相高效液相色谱法测定吉非罗齐片中主药的含量
姚忠;蒋锋
【摘要】建立反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定吉非罗齐片中主药的含量.色谱柱为安捷伦的C18柱,以甲醇-缓冲盐(体积比为75∶25)为流动相,检测波长276 nm,流速1.0 mL/min,测定吉非罗齐片中主药的含量.结果显示吉非罗齐和2,5-二甲酚达到完全分离.在考察吉非罗齐的质量浓度范围内具有良好的线性关系,r达到0.999,平均回收率为99.81％,RSD为0.89％.可见用所建立的分析方法测定吉非罗齐片中主药的含量,结果准确、可靠.
【期刊名称】《淮海工学院学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2012(021)004
【总页数】3页(P63-65)
【关键词】吉非罗齐片;高效液相色谱法;测定
【作者】姚忠;蒋锋
【作者单位】江苏鹏鹞药业有限公司,江苏宜兴214200;江苏鹏鹞药业有限公司,江苏宜兴214200
【正文语种】中文
【中图分类】O657.7
0 引言
吉非罗齐又名吉非贝齐、诺衡，是一种氯贝丁酸衍生物类血脂调节药。

该药首先由
美国派德药厂开发并用于临床，中国自1987年开始进口诺衡的小批用于临床实验。

临床广泛应用于治疗各型血脂异常症，如高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高脂血症及血脂代谢症等，既达到了降低胆固醇、甘油三酯水平，又提升高密度脂蛋白胆固醇水平之双重功效，被视为新型高效的血脂调节剂之一，其降脂作用速度快，疗效确切，对防治动脉粥样硬化和降低冠心病的发病率及死亡率也有一定作用［1－3］。

曾有报道，吉非罗齐中主药含量测定使用紫外分光光度法，但由于辅料有干扰，所以回收率偏差大；还有文献报道用HPLC法测定吉非罗齐胶囊的含量［4］，但流动相配置方法操作相对繁琐，峰形差，分析时间长。

本文根据ICH指导原则［5］和《中华人民共和国药典2010年版（二部）》的相关规定［6］建立了吉非罗齐片中主药含量HPLC测定方法，并对该方法进行了验证，发现该方法操作简单，分离度好，是准确、灵敏、快速、可行的。

1 仪器
Sartorius BT－25S型电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司），岛津LC－
20AT全自动液相色谱仪，PDA检测器，LC－Solution色谱工作站。

2 试剂与试药
甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为纯化水。

对照品批号为100284—200602，规格为100mg，含量为100%，吉非罗齐片3批样品由江苏鹏鹞药业有限公司提供。

3 方法与结果
3.1 色谱条件
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料（安捷伦，4.6mm×25cm，5μm），以甲醇－水（体积比为75∶25）（取1.0mL三乙胺加入250mL水中，用磷酸调
pH至3.0，加入甲醇750mL，混匀后过滤）为流动相，流速为1.0mL／min，检
测波长为276nm，柱温为25℃。

3.2 试验方法
对照品溶液的制备：准确称取吉非罗齐对照品适量，加甲醇适量使溶解并稀释制得含吉非罗齐1 mg／mL的储备液，再精密量取5mL置25.0mL量瓶中，用流动相稀释至刻度。

供试品溶液的制备：取本品20片，研成细粉，精密称取适量（约相当于吉非罗齐100mg）于100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，再精密量取5mL 溶液至25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀。

分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图和峰面积，以外标法计算含量。

3.3 系统适用性试验
用流动相配制每1mL含0.2mg吉非罗齐和0.05mg 2，5－二甲酚的溶液作为系统适用性溶液，精密量取系统适用性溶液10μL注入液相色谱仪，按“3.1”项下的色谱条件检测，记录色谱图。

结果表明，吉非罗齐和2，5－二甲酚的分离度不小于2.0，吉非罗齐的理论板数均不低于2 000（试验色谱图如图1所示）。

图1 系统适用性试验色谱图Fig.1 HPLC of system suitability test保留时间
5.478min—2，5－二甲酚，保留时间14.318min—吉非罗齐
3.4 检测波长的选择
取本品对照品适量溶解并稀释制成含吉非罗齐0.2mg／mL的溶液，以PDA作为检测器，在200～400nm的波长范围内绘制紫外吸收曲线，发现本品在276nm 的波长处有最大吸收。

故选用276nm作为本品含量的检测波长。

3.5 流动相的选择
选用甲醇－水为流动相，主峰与相关杂质分离不完全，故用冰醋酸溶液代替水，分离度得到很好改善。

3.6 线性关系考察
取含量测定项下的对照品储备液，用流动相稀释成一系列质量浓度的溶液，质量浓度梯度分别为0.01，0.10，0.15，0.20，0.24和0.30mg／mL，分别精密量取20μL注入液相色谱仪，记录峰面积。

以质量浓度（ρ）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，线性回归，可见线性关系良好，r达到0.999。

结果如图2和表1所示。

图2 线性回归结果Fig.2 Results of solvents in linear range
3.7 精密度试验
取对照品溶液，连续进样6次，记录色谱图，以峰面积计算RSD为1.36%（n＝6），小于2.0%，符合要求。

结果如表1所示。

表1 线性、精密度试验、回收率试验、样品检测结果Table 1 Testing result of linearity，accuracy，recovery rate and samples进样次别项目平均值 RSD ／%1 2 3 4 5 6 633.67 1.36回收率／% 99.18 99.31 98.96 99.64 101.21 100.58 99.81 0.89质量浓度ρ／（mg／mL） 0.05 0.1 0.15 0.2 0.24 0.3 ——峰面积A 79 125 152 964 229 154 315 654 371 252 473 585 ——线性方程 A ＝2E＋06ρ，r精密度试验 224 154 220 481 226 842 222 154 220 659 227 512 223＝0.999
3.8 回收率试验
精密称取已知含量的样品3份，置100mL量瓶中，分别精密加入对照品80，100和120mg，各质量浓度平行配制3份，按“3.2”项下方法配制和检测吉非罗齐中主药含量。

外标法计算，平均回收率为99.81%（n＝9），RSD为0.89%，结果如表1所示。

3.9 检测限试验
取对照品溶液适量用流动相逐级稀释，分别精密量取20μL注入液相色谱仪，记录峰面积，按信噪比3∶1计算检测限，检测限为2.1μg／mL。

3.10 样品检测
取对照品溶液两份，色谱条件下各进3针，再取供试品溶液2份，色谱条件下进样，记录色谱图，按外标法计算含量，即得。

本品3批含量结果分别为99.18%，98.34%和100.09%，符合规定。

4 结论
本文采用高效液相色谱法测定吉非罗齐片中主药含量，生产时投料100%，3批中试产品含量结果分别为99.18%，98.34%和100.09%，符合规定。

本文还进行了一系列的专属性、线性、回收率、溶液稳定性试验，试验数据证明，采用文中色谱条件检测吉非罗齐片中主药含量是准确、灵敏、快速、可行的。

【相关文献】
［1］丁辉.新型血脂调节剂——国产诺衡的临床应用研究［J］.新医药，1992，23（7）：355. ［2］淡海丽，易飞.吉非罗齐对临床几种常用口服降糖药的作用［J］.中国临床药理学与治疗学，2011，16（1）：116－120.
［3］黄燕南.吉非罗齐治疗糖尿病脂代谢异常40例临床分析［J］.现代中西医结合杂志，2005，14（3）：319.
［4］李云兰，康旭亮，李青山.HPLC法测定吉非罗齐胶囊的含量［J］.山西医科大学学报，2001，32（4）：316－317.
［5］周海钧.药品注册的国际技术要求（质量部分）［M］.北京：人民卫生出版社，2001.
［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）［M］.北京：化学工业出版社，2005：附录61－65.
［7］周健，蒋锋.盐酸托泊替康质量分析方法［J］.淮海工学院学报：自然科学版，2011，20（1）：55－57.。