Ad-ING4-IRES-IL-24双基因共表达载体的构建及表达

Ad-ING4-IRES-IL-24双基因共表达载体的构建及表达
盛伟华;谢宇锋;缪竞诚;顾范博;单云波;朱晔涵;陈华昕;杜贤荣;杨吉成
【期刊名称】《中国免疫学杂志》
【年(卷),期】2011(027)008
【摘要】目的:构建IRES介导的携带人肿瘤生长抑制因子4(ING4)和人白介素
24(IL-24)双基因的重组腺病毒共表达载体(简称为Ad-ING4-IRES-IL-24),研究其表达产物对A549肺癌细胞生长的影响.方法:将PCR扩增的IRES、ING4和IL-24基因片段分别插入pAdTrack-CMV载体中构建pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24双基因共表达重组转移载体.按腺病毒载体常规构建方法获得同源重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24,并在QBI-293A包装细胞中进行包装和病毒扩增.将扩增后的Ad-ING4-IRES-IL-24腺病毒感染A549肺癌细胞,并用RT-PCR和Western blot法鉴定ING4和IL-24基因在QBI-293A细胞或
A549肺癌细胞中的表达,MTT法和流式细胞仪检测其对A549肺癌细胞生长抑制和诱导凋亡的功能和抑癌增效作用.结果:DNA测序结果显示pAdTrack-CMV转移载体中插入的ING4、IRES和IL-24片段的序列与GenBank报道的完全一致,Ad-ING4-IRES-IL-24能成功介导ING4和IL-24基因在QBI-293A和A549细胞中表达,不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡(72小时生长抑制率为62.82%±0.65%,凋亡率为19.40%±1.29%),而且与Ad-ING4-IRES(72小时生长抑制率为42.31%±0.43%,凋亡率为13.30%±1.85%)和Ad-IRES-IL-24单基因组(72小时生长抑制率为47.44%±0.39%,凋亡率为12.40%±1.05%)相比具有显著性差异(P＜0.05).结论:成功构建了IRES介导的Ad-ING4-IL-24双基因共表达重组
腺病毒载体,Ad-ING4-IL-24不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡,而且与Ad-ING4和AdIL-24单基因组相比具有抑癌增效作用.
【总页数】8页(P701-708)
【作者】盛伟华;谢宇锋;缪竞诚;顾范博;单云波;朱晔涵;陈华昕;杜贤荣;杨吉成【作者单位】苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室,苏州,215123;苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室,苏州,215123;苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室,苏州,215123;苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室,苏州,215123;苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室,苏州,215123;苏州大学附一院呼吸科,苏
州,215006;苏州大学附一院呼吸科,苏州,215006;苏州大学附一院呼吸科,苏
州,215006;苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室,苏州,215123
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11
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