西洋参含片中总皂甙的测定

西洋参含片中总皂甙的测定
作者：雷艳，巫广华，梁立广
来源：《现代食品》 2019年第16期
◎ 雷?艳1,2,3，巫广华1,2,3，梁立广1,2,3
（1.广东省食品工业公共实验室，广东广州511442；
2.广东省食品工业研究所有限公司，广东广州511442；
3.广东省食品质量监督检验站，广东广州511442）
Lei Yan1,2,3, Wu Guanghua1,2,3, Liang Liguang1,2,3
(1.Guangdong Provincial Public Laboratory of Food Industry, Guangzhou?511442, China;
2.Guangdong Food Industry Institute Co., Ltd., Guangzhou?511442, China;
3.Guangdong Food Quality Supervision and Inspection Station, Guangzhou?511442, China)
摘?要：本文建立了西洋参含片中总皂甙测定的分光光度法。

样品经甲醇提取后，用35 mL 75%甲醇以0.8 mL·min-1的流速对样品进行洗脱后显色测定，外标法定量。

该方法线性范围0～400 μg，相关系数R2为0.998 8，重复性RSD为2.10%，加标回收率为87.60%～95.24%，说明该方法的线性关系、重复性、加标回收率良好，可用于西洋参含片中总皂甙的测定。

关键词：西洋参含片；总皂甙；外标法
Abstract：This paper establish a spectrophotometric method for the determination of total saponins in Panax quinquefolium Buccal Tablets. After the sample was extracted with methanol, the sample was eluted with 35 mL 75% methanol at a flow rate of 0.8 mL·min-1, then determined by color rendering method, and quantified by external standard method. The linear range of the method is 0～400
μg, the correlation coefficient R2 is 0.998 8, the repeatability RSD is 2.10%, and the recovery rate is 87.60%～95.24%. It shows that the method has good linear relationship, repeatability and recovery rate. It can be used for the determination of total saponins in Panax quinquefolium Buccal Tablets.
Key words：Panax quinquefolium buccal Tablets; Total saponins; External standard method
中图分类号：R286
皂甙又称皂素，是广泛存在于植物中的一类特殊甙类，根据皂甙水解后生成皂甙元的结构不同，可分为三萜皂甙与甾体皂甙两大类，具有调节免疫[1]、抗缺氧、抗疲劳[2]、抗氧化、抗致突变等作用。

目前通过科学、先进的工艺技术分离的人参皂甙，由甙元与糖组成，易溶于水、热甲醇、乙醇，难溶于石油醚、乙醚。

由于其具有抗衰老、抗疲劳、增强记忆力、活化皮肤细胞、增强皮肤弹性、减少皱纹等作用，被广泛用于各种保健品中。

目前，对于皂甙的测定多采用比色法[3-5]、薄层色谱法[6]、高效液相色谱法[7-9]等，其中《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）中二十三保健食品中总皂甙的测定是比较常用
的一种方法，但是对于西洋参含片中总皂甙的测定准确性有待提高，本研究通过改进实验过程
中样品的提取、洗脱液的浓度、洗脱流速以及洗脱体积来建立西洋参含片中总皂甙的测定方法。

1?材料与方法
1.1?仪器与材料
T9双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）、HWS-26电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）、梅特勒-托利多ML204/02电子分析天平[梅特勒-托利多
（上海）有限公司]。

人参皂甙Re（纯度≥98%，中国药品生物制品检定所）；Amberliter-XAD-2大孔树脂；中
性氧化铝（层析用，100～200目）；高氯酸、冰乙酸、甲醇、乙醇，均为分析纯，天津市康科
德科技有限公司生产；实验所用的水均为超纯水。

实验所用样品为某西洋参含片，购于当地市场。

1.2?溶液配制
香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100 mL。

2 mg·mL-1人参皂甙Re标准溶液：准确称取人参皂甙Re标准品20 mg，用甲醇溶解并定
容至10.0 mL。

1.3?样品前处理
准确称取1.000 g（可根据样品含量调整）样品于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，超声30 min，定容后摇匀，溶液备用。

1.4?实验方法
1.4.1?层析柱的制备
用10 mL注射器作层析管，填入少量玻璃棉，用少量水润湿，填入约3 cm大孔树脂，上面加入约1 cm中性氧化铝，先用25 mL 70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25 mL水洗柱，弃去洗
脱液，备用。

1.4.2?样品的洗脱
精确加入1.0 mL已处理好的试样溶液，用25 mL水洗柱，弃去洗脱液，再用35 mL 75%甲
醇以0.8 mL·min-1
的流速洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置于水浴锅60 ℃
水溶挥干。

1.4.3?显色
在上述已挥干的圆底烧瓶中准确加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使全部残渣都溶解，再加入0.8 mL高氯酸，混匀后移入5 mL比色管中，60 ℃
水浴加热10 min，取出，冰水浴冷却，加入5.0 mL
冰乙酸摇匀后用1 cm比色皿在560 nm波长处与标准管一起比色。

1.4.4?标准管的制备
准确移取0、25、50、100、150 μL和200 μL人参皂甙Re标准溶液于蒸发皿中，水浴挥干，用2～3 mL
水复溶后加入层析柱，洗脱步骤同试样。

2?结果与分析
2.1?实验条件优化
2.1.1?样品的提取
本实验分别使用水和甲醇对试样进行提取，在相同的条件下进行测定，结果见表1。

从表1可以看出，甲醇的提取效果更佳。

2.1.2?样品的洗脱液
本实验分别使用不同浓度的甲醇和乙醇对样品进行洗脱，结果见表2。

从表2可以看出，75%的甲醇洗脱效果最佳。

2.1.3?洗脱的流速
本实验分别使用0.5、0.8、1.0、1.5 mL·min-1和
2.0 mL·min-1的流速洗脱样品，结果见表3。

从表3可以看出，0.5 mL·min-1与0.8 mL·min-1的流速洗脱样品时样品含量高于1.0 mL·min-1、1.5 mL·min-1、
2.0 mL·m in-1的流速洗脱样品含量，流速越大，整个实验消耗的时间越短，效率越高，0.8 mL·min-1的流速洗脱样品的效率优于0.5 mL·min-1，综合得知0.8 mL·min-1的流速洗脱样品效率最高，效果最好。

2.1.4?洗脱液的体积
本实验分别使用25、30、35、40 mL和45 mL甲醇对样品进行洗脱，结果见表4，从表4可以看出，
25 mL、30 mL甲醇洗脱样品含量比35 mL、40 mL、45 mL甲醇洗脱样品含量低，说明样品没有完全被洗脱干净，而40 mL、45 mL甲醇洗脱样品含量与35 mL甲醇洗脱样品含量相近，综合得知35 mL的甲醇洗脱样品效率最高，且没有残留。

综上所述，优化后的实验条件为使用甲醇提取样品后用35 mL 75%甲醇0.8 mL·min-1的流速对样品进行洗脱。

2.2?方法学实验
2.2.1?线性关系
以吸光度（y）为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标（x），绘制标准曲线，如图1所示。

结果表明在
0～400 μg内，质量浓度与吸光度线性方程为y=0.003 5x
+0.0325，相关系数R2为0.998 8，线性关系良好。

2.2.2?重复性实验
准确称取某样品6份，测定样品总皂甙含量，计算RSD为2.10%，结果见表5，表明重复性良好。

2.2.3?加标回收率实验
准确称取某已知总皂甙含量的样品6份，各加入一定浓度的标准液，测定总皂甙含量，计算得出总皂甙的加标回收率见表6，回收率在87.60%～95.24%，表明加标回收率良好。

3?结论
总皂甙是西洋参含片的功能性成分，对其功能有重要的作用。

本实验建立的方法的线性范围较大，线性关系、重复性及加标回收率良好，可用于西洋参含片中总皂甙的测定。

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