宁夏红枣中总黄酮含量的比较

宁夏红枣中总黄酮含量的比较
摘要:以不同品种的宁夏红枣为材料,比较了不同总黄酮提取方法,并对最优提取方法进行了优化｡结果表明,总黄酮提取效率由高到低分别为超声波提取法>索氏提取法>冷浸提取法｡对超声波提取法的各参数正交试验结果表明,以料液比为1∶8,在40℃下,以70%(V/V)乙醇提取3次,每次30 min,总黄酮提取效果较好｡在该条件下,分析了3种宁夏红枣的总黄酮含量,其中灵武长枣总黄酮含量最高(0.38%),其次为同心圆枣(0.29%),中宁圆枣最低(0.21%)｡
关键词:红枣;总黄酮;正交试验
Comparison of the Contents of Total Flavonoids in Different Jujube from Ningxia Abstract: The total flavonoids extraction methods for three jujubes from Ningxia were optimized. The results showed that ultrasonic extraction was the best one compared with soxhlet extraction and quench extraction. The orthogonal experiment was carried out for optimizing the parameters of ultrasonic extraction, the best extraction method followed as: the sample which its ratios of raw-materials to extracting solution been 1∶8 was extracted with 70%(V/V) alcohol for 30 min and repeated 3 times. Then the total flavonoids in 3 kinds of jujubes from Ningxia were extracted under the optimized conditions. The results indicated that the contents of total flavonoids in the kinds of Lingwu long, Tongxin round and Zhongning round jujube were 0.38%, 0.29% and 0.21%, respectively.
Key words: jujube; total flavonoid; orthogonal experiment
红枣(Zizyphus jujuba Mill.)又名中华大枣､大枣和华枣,是鼠李科枣属植物枣树的果实[1]｡红枣有“百果之王”的美称,其果肉肥厚,色美味甜｡现代药学表明,红枣富含蛋白质､脂肪､糖类､维生素和矿物质等营养素[2,3],其中,总黄酮类化合物是红枣中的活性物质,具有降低毛细管脆性,降低血管胆固醇､血脂､血糖含量和防止心脑血管疾病,治疗高血压和动脉硬化等疾病的功效[4-6]｡
宁夏属于红枣的传统栽培区,灵武长枣､同心圆枣和中宁圆枣等地方品种已有近千年的栽培历史,经长期自然选择,形成了独具特色的区域优良品种｡本文以灵武长枣等特色优势品种为研究对象,分析比较不同品种中的总黄酮含量,为全面了解宁夏红枣提供参考｡
1材料与方法
1.1材料与仪器
红枣样品分别采自宁夏灵武､同心和中宁3个县市,洗净､放入60℃恒温箱烘干､去核､粉碎､过40目筛后,置于保鲜袋密封于冰箱中保存备用｡
95%(V/V)乙醇､氢氧化钠､亚硝酸钠､硝酸铝均为分析纯(天津市科密欧化学试剂有限公司),芦丁标品(中国药品生物制品鉴定所),实验用水为蒸馏水｡
UV-2450紫外-可见分光光度仪(日本岛津公司);KA-250 DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);AL204型电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);RE-52AA型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵(郑州长城工贸有限公司);DZF-6020电热干燥箱(巩义市英峪予华仪器厂)｡
1.2方法
1.2.1标准溶液的制备准确称取芦丁标品0.010 0 g,用95%(V/V)乙醇溶解,并完全溶解后转入50 mL容量瓶中,用95%(V/V)乙醇定容,配成0.20 mg/mL的芦丁标准溶液,备用｡
1.2.2芦丁标准曲线的绘制分别吸取上述芦丁标液0､1､2､3､4､5 mL于10 mL容量瓶中,加入5%NaNO2(m/V)溶液0.5 mL,放置6 min后加入10% Al(NO3)3溶液(m/V)0.5 mL,摇匀,放置6 min,再分别加入4% NaOH溶液(m/V)5 mL,用95%(V/V)乙醇稀释至刻度,摇匀,放置12 min,以第一管为空白对照,第二管为待测样,采用紫外-可见分光光度仪测得其最大吸收波长505 nm,在波长为505 nm下测定不同浓度标准溶液吸光度值,以标准溶液的浓度C(mg/mL)为横坐标,峰面积值Y为纵坐标做标准曲线,得回归方程式:Y=10.271C+0.085 1(R2=0.999 6)｡
1.2.3提取方法的确定以总黄酮得率为考察指标,分别比较超声波法､索氏提取法､冷浸法这3种提取方法,优选出合适的提取方法,并采用L9(34)正交试验法对最佳提取方法的主要影响因素如料液比､提取时间､提取次数进行优化,得到最佳提取工艺｡
1.2.4提取方法研究对最优化的提取方法进行精密度试验､重复性试验､稳定性试验和回收性试验等,进一步验证此方法的可靠性｡
2结果和分析
2.1提取方法的优化
不同总黄酮提取方法的结果如图1所示,正交试验结果如表1､2所示｡
由图1可以看出,虽然索氏提取总黄酮得率最高(0.39%),但提取时间为6 h,而超声则每次只需30 min,且总黄酮得率(0.34%)略低于索氏提取法,综合考虑,最终选择超声法作为提取总黄酮的方法｡
由表2分析可知:影响总黄酮得率的因素由大到小依次为:A>B>D>C,其中,A1B3C3D3,即70%(V/V)乙醇､料液比为1∶8､时间30 min､次数3次为最佳提取工艺,所得总黄酮得率最高,所以采用此工艺条件进行下面的试验｡
2.2提取方法研究
取浓度为0.080 mg/mL芦丁标准溶液,重复测定3次,检验仪器的精密性,葡萄糖标准溶液峰面积的RSD为0;
取灵武长枣3份,按超声波法提取进行重复性试验,提取显色后,总黄酮含量的RSD为4.25%｡
将制备好的灵武红枣样品分别在1､2.5､5.0 h测定进行稳定性实验,结果表明总黄酮含量的RSD为5.41%,样品在5.0 h测定基本稳定｡
称取3份已知总黄酮含量的灵武长枣枣粉,相应地加入一定量的芦丁标准品,按1.2.2方法提取,取一定量的提取液加入显色剂后测定加入芦丁后溶液中的总黄酮总含量,计算加标回收率,平均加标回收率为92.44%,RSD为2.36%,此方法具有较好的回收性｡
2.3样品测定
按照1.2.2方法提取不同品种红枣中的总黄酮,测定结果见图2｡
3小结与讨论
采用5%NaNO2-10%Al(NO3)3-4%NaOH(m/V)显色法测定总黄酮含量,试验证明该法准确可靠,可作为红枣中总黄酮含量测定的方法p
[3] 蔡健. 大枣的营养保健作用及贮藏加工技术[J]. 中国食物与营养,2004(9):16-19.
[4] 曹纬国, 刘志勤, 邵云, 等. 黄酮类化合物药物作用的研究进展[J]. 西北植物研究,2003,23(12):2241-2247.
[5] 霍文兰,刘步明,曹艳萍,等. 陕北红枣总黄酮提取及其抗氧化性研究[J]. 食品科技,2006(10):45-47.
[6] 王玮, 王琳.黄酮类化合物研究进展[J].沈阳医学院学报, 2002,4(2):115-119.。