7 油脂的检测

七油脂检测
1 过氧化值测定
1.1原理
试样溶解在乙酸和异辛烷溶液中，与碘化钾溶液反应，用硫代硫酸钠标准溶液滴定析出的碘。

1.2试剂与溶液
所有试剂和水中不得含有溶解氧。

水应符合GB/T 6682—1992中三级水的要求。

1.2.1 冰乙酸：用纯净、干燥的惰性气体（二氧化碳或氮气）气流清除氧；
1.2.2 异辛烷：用纯净、干燥的惰性气体（二氧化碳或氮气）气流清除氧；
警告：在空气中异辛烷是易燃物。

1.2.3 乙酸与异辛烷混合液（体积比60：40）：将300mL冰乙酸与200mL异辛烷混合；
1.2.4 碘化钾饱和溶液：新配制且不得含有游离碘和碘酸液；
确保溶液中有结晶存在，存放于避光下。

检查：如果在30mL乙酸—异辛烷溶液,中添加0.5mL碘化钾饱和溶液，和2滴淀粉溶液，出现蓝色，并需要硫代硫酸钠溶液{c（Na2S2O3）=0.1mol/L} 1滴以上才能消除，则重新配制此溶液。

1.2.5 硫代硫酸钠溶液：c（Na2S2O3）=0.1mol/L，按GB/T601配制标定；
1.2.6 硫代硫酸钠溶液：c（Na2S2O3）=0.01mol/L，临使用前标定；
由硫代硫酸钠标准滴定溶液：c（Na2S2O3）=0.1mol/L，临使用前稀释。

1.2.7淀粉溶液：5g/L。

将1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合，在搅拌的情况下溶于200mL沸水中，添加250mg水杨酸作为防腐剂并煮沸3min，立即从热源上取下并冷却。

1.3 仪器
使用的所有器皿不得含有还原性或氧化性物质。

磨砂玻璃表面不得涂油。

实验室常用仪器以及250mL锥形瓶，带磨口玻璃塞。

1.4 分析步骤
1.4.1 称样
用纯净干燥的二氧化碳或氮气冲洗锥形瓶（无条件可不做此点），根据估计的过氧化值，按下表称样，装入锥形瓶中。

取样量和称量精确度
1.4.2测定
1.4.
2.1将50mL 乙酸-异辛烷溶液，加入锥形瓶中，盖上塞子摇动至样品溶解。

1.4.
2.2加入0.5mL 饱和碘化钾溶液，盖上塞子使其反应，时间为1min ±1s ，在此期间摇动锥形瓶至少3次，然后立即加入30mL 蒸馏水。

用硫代硫酸钠标准滴定溶液{c （Na 2S 2O 3）=0.01mol/L}滴定上述溶液。

逐渐地、不间断地添加滴定液，同时伴随有力的搅动，直到黄色几乎消失，近终点前加约0.5mL 淀粉溶液，继续滴定，临近终点时，不断摇动使所有的碘从溶剂层中释放出来，逐滴添加滴定液，至蓝色消失，即为终点。

1.4.2.3异辛烷漂浮在水相的表面，溶剂和滴定液需要充分时间混合，当过氧化值≥35m mol/kg （70meq/kg ）时，用淀粉溶液指示终点会滞后15s ～30s 。

为充分释放碘，可加入少量的（浓度为0.5%～1.0%）高效HLB 乳化剂（如Tween60）以缓解反应液的分层和减少碘释放的滞后时间。

1.4.2.4当油样溶解性较差时（如：硬脂或动物脂肪），按下述步骤操作：在锥形瓶中加入20mL 异辛烷，摇动使样品溶解，加30mL 冰乙酸，再按步骤1.4.2.2测定。

1.4.2.5 空白实验
测定需进行空白实验，当空白实验消耗0.01mol/L 硫代硫酸钠溶液{c （Na 2S 2O 3）=0.01mol/L}超过0.1mL ，应更改试剂，重新对样品进行测定。

1.5 结果表示
1.5.1过氧化值P 按式（1）计算：(单位meq/kg) 01000()V V c
P m
-=
．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（１）
式中：
V ——用于测定的硫代硫酸钠溶液的体积， mL ； V 0——用于空白的硫代硫酸钠溶液的体积， mL ； c ——硫代硫酸钠溶液的浓度， mol/L ； m ——试样的质量，g 。

1.5.2过氧化值以毫摩尔每千克表示：
过氧化值P ′按式（2）计算：（单位m mol/kg ）
01000()'2V V c
p m
-=
．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（2）
1.6 重复性
短时间内、同一操作者、采用相同的方法、对于同一份试样、在同一实验室、相同仪器、获得两个独立的测定结果。

在过氧化值小于或等于5m mol/kg （10meq/kg ）时，这两个独立的测定结果的绝对差值大于其平均值的10%的事例，不得超过5%。

2 酸价的测定
油脂中游离脂肪酸用氢氧化钾标准溶液滴定，每克油脂消耗氢氧化钾的毫克数称为酸价。

2.1试剂
2.1.1 酚酞指示液； 2.1.2石油醚-乙醇混合液；
按石油醚-乙醇2：1混合，用0.1mol/L 氢氧化钾溶液中和至对酚酞指示液呈中性。

2.1.3 氢氧化钾标准液0.01mol/L （0.02mol/L ），使用前用0.1mol/L 的氢氧化钠标准溶液准确稀释。

2.2操作步骤
称取3～5g 试样（精确至0.001g ），置于锥形瓶中，加入50mL 中性石油醚-乙醇混合液摇匀静止30min 过滤。

滤渣用20mL 中性石油醚-乙醇混合液清洗，并重复洗一次，滤液合并后加入酚酞指示液2滴～3滴，以0.1mol/L 氢氧化钾标准液滴定，至初显微红色且0.5min 内不退色为终点。

2.3结果计算 按下式计算酸价：
m
c V X 11
.56⨯⨯=
式中：
X ——样品酸价值（KOH ），每克样品中氢氧化钾的毫克数，mg/g ； V ——样品消耗氢氧化钾标准溶液体积数， mL ； c ——氢氧化钾标准溶液浓度， mol/L ； m ——试样质量，g ；
56.11——每毫升1 mol/L 氢氧化钾溶液相当氢氧化钾毫克数。

2.4 重复性
每个样品做两个平行样，结果以算术平均值计算。

3 油脂TBA 值的测定方法 3.1原理
油脂受到光、热、空气中氧的作用，发生酸败反应，分解出醛、酸之类的化合物。

丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA （硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在532nm 波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。

3.2 试剂
3.2.1氯仿（分析纯）；
3.2.2三氯乙酸混合液；
准确称取分析纯三氯乙酸7.5g 及0.1gEDTA ，用水溶解，稀释至100mL 。

3.2.3硫代巴比妥酸溶液（TBA ）0.02mol/L ；
准确称取TBA0.288g 溶于水中，并稀释至100mL （如TBA 不易溶解，可加热至全溶澄清），然后稀释至100mL 。

3.2.4丙二醛标准溶液。

称取0.315g1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000mL ，此溶液每mL 相当于丙二醛100μg ，置于冰箱内保存。

准确吸取10mL ，稀释至100mL ，此溶液每mL 相当于丙二醛10μg ，备用。

3.3测定步骤 3.3.1标准曲线的绘制
准确吸取每相当于丙二醛10μg 的标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL 置于纳氏比色管中，加水至总体积为5mL ，加入5mLTBA 溶液，然后按样品测定步骤进行，测得光密度绘制标准曲线。

3.3.2样品测定
准确称取融化均匀的油脂样品3～10g ，置于100mL 有盖三角瓶内，准确加入50mL 三氯乙酸混合液，在70℃水浴上振摇半小时，趁热用双层滤纸过滤，除去油脂。

滤液重复用双层滤纸过滤一次。

准确移取上述滤液5.00mL 置于25mL 比色管内，加入5.00mLTBA 溶液，混匀，加塞，置于90℃水浴内保温40min ，取出，室温冷却1h ，摇匀，静置2min ，于532nm 波长比色，对照标准曲线得到微克数。

同时作空白试验。

计算
()5
50
/⨯⨯=
m C kg mg 丙二醛含量
式中：C ——从标准曲线查得丙二醛的微克数，μg ；
m ——样品质量，g 。

4 皂化值的测定 4.1 原理
皂化值（皂化价）系指中和1g 油脂中所含全部游离脂肪酸和结合脂肪酸（甘油脂）所需氢氧化钾的毫克数。

油脂与氢氧化钾乙醇溶液共热时，发生皂化反应，剩余的碱可用标准酸液进行滴定，从而可计算出中和油脂所需的氢氧化钾毫克数。

4.2 试剂和溶液 4.2.1 无水乙醇
4.2.2 酚酞指示剂1g/L 4.2.3 盐酸标准溶液0.5mol/L 4.2.4 氢氧化钾乙醇溶液0.5mol/L
称取化学纯氢氧化钾34g ，溶于20～30mL 水中，加无水乙醇980mL ，摇匀，静置1h ，过滤，滤液贮于装有苏打石灰球管的玻璃瓶中）。

4.3 测定步骤
称取2～3g 样品（称准至0.0002g ），准确加入0.5mol/L 氢氧化钾乙醇溶液25.00mL ，在水浴上加热回流30min ，中间摇动3次。

取下冷凝管，冷却后加入数滴酚酞指示剂，用0.5mol/L 的盐酸标准溶液滴定至红色消失。

同时做空白试验。

4.4 结果计算 皂化价按下式计算：
()
m
V V c -⨯⨯=
01.56皂化价
式中：c ——盐酸标准溶液的浓度，mol/L ；
V ——试样耗用盐酸标准溶液之体积，mL ； V 0——空白试验消耗盐酸标准溶液之总体积，mL ； m ——试样的质量，g ；
56.1——与1.0000mol/L 盐酸标准液1.00mL 相当于氢氧化钾的克数。

4.5 皂化率的计算：
理论皂化值
酸值
脂肪皂化值皂化率-=
%
注：豆油酸价一般为：0.7mgKOH/g ，理论皂化值一般为：190-195 mgKOH/g ； 花生油酸价一般为：3.5mgKOH/g ，理论皂化值一般为：188~195mgKOH/g ；
目前市场上的饲料用猪油实际是混合油，虽然它的理论皂化率我们不得而知，但笔者认为应规定它的皂化价≥185mgKOH/g ；
鱼油酸值一般为：0.7mgKOH/g ，理论皂化值一般为：200-210mgKOH/g 一般植物油的皂化价如下：
棉子油189~198，花生油188~195，大豆油190~195，菜子油170~180，芝麻油188~195，葵子油188~194，茶子油188~196。

5 油脂含皂量测定法 5.1原理
油脂中的含皂量，即油脂经过碱炼后，残留在油脂中的皂化物数量(以油酸钠计)。

5.2试剂
5.2.1石油醚（沸点60～90℃）； 5.2.2中性乙醇95％；
5.2.3甲基红乙醇溶液2g/L ；
5.2.4硫酸标准滴定溶液c (1/2H 2SO 4)=0.02mol/L 。

5.3 测定方法
称取混匀试样约10g ，注入干燥的锥形瓶中，加入乙醇10mL 和石油醚60mL ，摇动，使试样溶解后，缓慢加入80℃的蒸馏水80mL ，振摇使成乳状，滴入3滴甲基红指示剂，趁热逐滴加入硫酸标准滴定溶液（c (1/2H 2SO 4)=0.02mol/L ），每加一滴振摇一次，滴至下层的溶液显出微红色为止。

5.4 结果计算
油脂含皂量按下列公式计算：
()W
c V 304
.0%⨯⨯=
含皂量
式中：V ——滴定用去的硫酸溶液体积，mL ；
c ——硫酸标准滴定溶液的浓度，mol/L ； W ——试样重量，g ；
0.304——与1.00mL 硫酸{c(1/2H 2SO 4)=1.000mol/L}相当于油酸钠的克数。

每个样品称取两份试料，以其算术平均值报告结果，结果取至小数点二位。

平行试验结果允许差不超过0.02％。

6 油脂碘价的测定 6.1 适用范围 植物油脂和动物油脂 6.2 试剂与溶液
6.2.1 韦氏液的配制：称取三氯化碘
7.9g 和纯碘
8.7g 分别溶于冰乙酸中，合并两液，再用冰乙酸稀释至1L ，贮于棕色瓶内。

6.2.2 KI 溶液 150g/L ；
6.2.3 硫代硫酸钠标液滴定溶液C （NaS 2O 3）=0.1mol/L ）； 6.2.4 三氯甲烷CHCl 3 AR 。

6.3 步骤
按附表称取试样（准确至0.0002g ）于干燥的碘量瓶中，加20mL CHCl 3溶解试样，加25.00mL 韦氏液立即加塞，以KI 溶液封口，摇匀后，在20±5℃条件下，置黑暗处30min （碘价在130以上时放置1h ），到时立即加入KI 溶液20mL 和水100mL ，用[c （NaS 2O 3）=0.1mol/L]硫代硫酸钠标液滴定至浅黄色时，加入1mL5g/L 淀粉指示剂，滴定至兰色消失。

同样条件做空白两个，取平均值。

6.4 结果的表示和计算 碘价按下式计算
式中：V 1——试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL ；
V 2——空白消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL ； c ——硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L ； m ——试样的质量，g ；
0.1269——与1.00ml 硫代硫酸钠标准溶液[c （NaS 2O 3）=1.000mol/L]的相当的以克表示的碘的质量。

附表： 碘价数值与试样用量
碘价 试样用量范围（g ） 碘价 试样用量范围（g ） 20 0.8461～1.5865 120 0.2115～0.2644 40 0.6346～0.7935 140 0.1813～0.2266 60 0.4231～0.5288 160 0.1587～0.1983 80 0.3173～0.3966 180 0.1410～0.1762 100
0.2538～0.3173
200
0.1269～0.1586
6.5 注意事项
6.5.1称取油脂的质量一定要合适，如果还没有滴定就到终点，则减少称取样品质量，重新测定。

6.5.2每次测定碘价的过程中都要相应的测定空白。

6.5.3韦试液流入锥形瓶的时间要一致。

6.5.4滴定接近终点为淡黄色时，加入淀粉后要剧烈震荡，以保证上三氯甲烷中的碘全部被萃取出来。

6.5.5冬天韦试液会有部分先结冰，此时不能继续使用，需要把韦试液放置在温度25℃的避光环境中操作。

7 油脂中矿物油的定性检测 7.1 原理
油脂可以被碱皂化，生成易溶于水的皂，而矿物油属于烃类，不可被皂化，也不溶于水。

7.2 步骤
取约1mL 样品于干燥的250mL 三角瓶中，加1mL 饱和的NaOH 溶液，30mL 无水乙醇，在电炉上回
流5min ，取下三角瓶，加入50mL 沸水，如溶液出现分层或浑浊现象，可判定样品中含有矿物油
成份。

本法检出限量为0.5%。

8 生物柴油的检验
()1001269.010⨯⨯⨯-=m
c V V 碘价
方法1
将油样100mL移入精馏装置内称重，加热，收集150～250℃的馏分。

方法2
在已烘干恒重的100mL烧杯内加50～60mL油样，称重，将烧杯放到电炉上加热到250℃，并保持20 min，冷却后称重，其加热减重小于1%的为正常，若大于2%则可疑掺假，若在1～2%之间须结合其他方法作进一步检测。

方法3
烟点的差异，在方法2中如在140℃左右油样就开始冒烟则可疑掺假，油脂的烟点（植物和动物油脂）都在190℃以上。

9 混合脂的检测
原理：混合脂溶于水，油脂不溶水。

步骤：50mL油样加50mL水，震荡1min后静止观察分层情况。