蛋白质知识考点整理

蛋白质知识考点整理●水解
●酸水解
色氨酸全部被破坏
●碱水解
产生消旋，色氨酸稳定
●酶水解
●组成
●凯氏定氮法蛋白质含量＝蛋白质含氮量x6.25
平均含氮量16%
●单纯蛋白质+缀合蛋白质（氨基酸+其他化学成分）
球状蛋白质+纤维状蛋白质+膜蛋白
●大小：6000～1×10⁶Da（胰岛素最小）
●有水化层和双电层
●功能
催着氧化着，免一次调节税
●酶（催化）
●调控（遗传调控、基因表达调控、免疫调控）
●信号转导
●运输储存
●结构蛋白（收缩蛋白）
●结构
●一级结构
多肽链中氨基酸的排列顺序
●肽键：两个氨基酸脱水缩合而成（215nm 吸光度最大）
●性质：旋光性、高熔点、双缩脲反应（蛋白质特有）
●常见天然多肽
谷胱甘肽（GSH）参与氧化还原反应放线菌D 脑啡肽
●功能
决定蛋白质功能决定高级结构
●二级结构
多肽链借助氢键形成有规则局部结构
●典型结构模型
●α螺旋
●3.6个氨基酸残基螺旋上升一圈，螺距0.54nm
●每个氨基酸残基上升0.15nm 螺旋
●右手螺旋
●二面角和氢键（氢键与螺旋轴平行）（链间的一NH与一CO）
●多聚赖氨酸、异亮氨基酸、甘氨酸不易形成，脯氨酸不形成
●β折叠片
●氢键和二面角（所有的一NH与一CO）
●平行式与反平行式
●β转角（发夹结构）
甘氨酸和脯氨酸出现多
●Ω环
●无规则卷曲
●超二级结构
若干个相邻的二级结构元件组合在一起
●αα结构
●αβα结构
●ββ结构
●三级结构
●结构域
独立的结构单位独立的功能单位独立折叠单位
●全α蛋白质
●全β蛋白质
●α/β蛋白质
●α+β蛋白质
●富含金属或二硫键蛋白质
●最重要的作用力：疏水作用力
●特点
●含有多种二级结构
●有明显折叠层次
●紧密的球体/椭圆状
●分子表面有活性部位
●疏水基团在内侧
●四级结构
由两个或多个具有独立二级结构的亚基通过非共价键缔合在一起形成聚集体的方式构成的多聚体
●主要作用力：疏水作用力（疏水键、离子键、氢键、范德华力）
●对称性质
●功能优越性
●增强稳定性
●提高遗传经济性和效率
●使催化基团汇聚
●具有协同性和别构效应（多个结合位点）
●折叠历程
大多自发折叠
●快速形成局部二级结构→折叠核协同聚合成结构域→经过熔球态中间体形成蛋白质●蛋白质组
生物体的基因所表达蛋白
●功能与结构关系
●一般规则
●高级结构决定功能
●一级结构决定高级结构，一级结构相似，功能相似
●纤维状蛋白质
●不溶性纤维蛋白质
●角蛋白
α-角蛋白（毛发中）、β-角蛋白
●丝心蛋白和其他β-角蛋白
●弹性蛋白
●胶原蛋白
三股螺旋，右手螺旋，高量甘氨酸和脯氨酸
●可溶性纤维状蛋白质
●肌球蛋白 and 原肌球蛋白
●性质
●酸碱性质 and 等电点 and 等离子点
●胶体性质
●变性与复性
●变性——次级键被破坏
现象：①侧链基团暴露②物理化学性质变化（溶解度↓ 粘度↑ 结晶能力×旋光
值改变等）③生化性质改变
●变性剂尿素盐酸胍
●分离分析方法
●电泳技术
分子量差异
●聚丙烯酰胺凝胶电泳
样品浓缩效应分子筛效应电荷照应
●琼脂糖凝胶电泳
●等电聚焦（IEF）
●电焦聚（EF）
●离心技术
●沉淀技术
●盐析法
蛋白不变形
●盐溶（溶解度↑）
低浓度中性盐
●盐析（溶解度↓）
●有机溶剂沉淀法
甲醇、乙醇、丙醇
●重金属盐沉淀法
PH >PI
●生物碱试剂和某些酸类沉淀法
PH <PI
●加热变性沉淀法
●层析技术
●离子交换层析
●疏水层析
●亲和层析
●高效液相层析
●分离纯化程序
前处理→粗分级分离→细分级分离→结晶●测相对分子量
●通过化学组成测
●渗透压法
●沉降分析测
●凝胶过滤法
●聚丙烯酰胺凝胶电泳法●测蛋白质浓度
●凯氏定氮法
●双缩脲试剂法
●福林一酚法（Lowry 法）
●紫外吸收法
●考马斯亮蓝法
●纯度测定
●电泳
●高效液相层析
●沉淀。