第九篇维生素类药物分析 ppt课件

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掌握重点
►1、维生素A的三氯化锑鉴别反应 ►2、维生素A三点矫正法测定含量的原理、方
法与计算 ►3、维生素E的鉴别试验和游离生育酚的检查 ►4、维生素B1的鉴别试验与含量测定方法 ►5、维生素C的结构与性质，鉴别试验和含量
测定方法
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含量测定
► 采用正相HPLC法 ► 根据样品纯度，ChP采用三种方法 ► 第一法（适用于无VitA醇及其它杂质干扰）
对照品（ D2 、D3 ）+异辛烷→超声助溶，充氮，避 光0℃保存 内标液：邻苯二甲酸甲酯-正己烷溶液 色谱柱：硅胶柱 流动相：正己烷-正戊醇（997：3） 检测波长：254nm
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鉴别
►与硝酸反应——维生素E与硝酸共热，显橙红 色（生育红）
►水解后氧化反应——维生素E在碱性条件下水 解，与联吡啶和三氯化铁作用，显血红色。 在该反应中，维生素E水解游离出生育酚，还 原Fe2+→Fe3+ ，后者与联吡啶生成血红色配 位离子
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杂质检查
►合成型——检查有关物质（GC） ►天然型——检查生育酚 ►生育酚——采用硫酸铈滴定法
►性质：有强紫外吸收，易被氧化，脂溶性
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
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结构特点：
►环己烯+共轭多烯侧链 ►天然VA侧链为全反式 ►天然来源主要是鱼肝油，人工合成醋酸酯，
棕榈酸酯
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鉴别试验
► 三氯化锑反应：维生素A+三氯化锑→显蓝色→ 渐变成紫红色
► 紫外吸收光谱：维生素A的无水乙醇-盐酸溶液 在326nm波长处有单一吸收峰，将该溶液加热 后再测定，在348，367，389nm处出现3个尖 锐吸收峰。这是维生素A在盐酸催化下加热， 发生脱水反应所致
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等吸收差法
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中国药典收载方法
►第一法（维生素A醋酸酯的测定） 将维生素A溶于环己烷，在规定波长测定吸收 度，计算吸收度比值（A/A328 ）
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数据处理
►如果λ max在326-329nm之间，且A/A328比值 未超过规定值的±0.02，可直接按下式计算 含量：
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►人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏 症，而影响人体的正常生理机能。
►例如： VA——夜盲症 VB1——脚气病 VD缺乏——佝偻病
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►按溶解性分类 脂溶性：VA、VD、VE、VK等 水溶性：B族，VC、烟酸、叶酸、 泛酸等
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维生素A的分析
►结构特点：具有共轭多烯侧链的环己烷，有 多种异构体
► 硝酸铅反应——与氢氧化钠共热，分解产生硫化钠， 与硝酸铅生成黑色沉淀
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硫色素反应
►维生素B1在氢氧化钠溶液中，与铁氰化钾作 用，被氧化成硫色素，在正丁醇中显蓝色荧 光，加酸，荧光消失，加碱，荧光又出现
►这是维生素B1的专属反应
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含量测定
► 非水溶液滴定法 用于原料药测定 加醋酸汞消除盐酸干扰 1mol维生素B1与2mol高氯酸相当
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换算因子F的由来
►换算因子F=效价（IU/g）/E1%1cm ►规定1IU=0.334g维生素A醋酸酯 ►则1g维生素A醋酸酯
=1×106/0.344=2907000IU ►维生素A醋酸酯的E1%1cm=1530 ►故F=2907000IU/1530=1900
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数据处理
► 铁、铜离子——采用原子吸收分光光度法测定
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含量测定
►碘量法——维生素C分子中的烯二醇基具有还 原性，能被I2定量的氧化成二酮基
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测定方法
► 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100mL 与稀醋酸10mL，振摇使溶解，加淀粉指示液1mL， 立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色 并持续30秒钟不褪。每1mL碘滴定液（0.1mol/L） 相当于8.806mg的C6H8O6
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糖类性质
►维生素C+HCl（三氯乙酸）→水解成戊糖→ 失水→糠醛+吡咯→蓝色
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杂质检查
► 澄清度与颜色——控制氧化变色产物，以测定一定 波长下吸光度控制有色杂质 原料——溶液应澄清无色，若有色，在420nm处测 定吸光度，不得过0.03 片剂——在440nm处测定吸光度，不得过0.07 注射剂——在420nm处测定吸光度，不得过0.06
维生素D的分析
►为一类抗佝偻病的维生素总称，都是甾醇的衍生 物，ChP收载维生素D2（Ergocalciferol）， D3
►有多个烯键，不稳定，易氧化变质，使毒性增加， 多个手性碳，具旋光性
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鉴别试验
► 显色反应（甾类化合物的反应）
D2+醋酐-浓H2SO4 →黄→红→紫→绿色 D3+醋酐-浓H2SO4 →黄→红→紫→蓝绿→绿色 ► 比旋度[α]tD测定 D2无水乙醇液：+102.5°～+107.5 ° D3无水乙醇液：+105°～+112° ► D2 、D3区别反应 ► 维生素D的醇溶液+85% H2SO4
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是否需用校正值的判断
► 如果：
A325(校正) A325 100% 3% A325
► 不需校正，用A325计算
►则
(
E1% 1cm
)表观

A325/(C L)
IU
/1g

(
E1% 1cm
)表观

F(F
1830)
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讨论
►干扰物质主要由 异构体、氧化产物、合成中间体及溶剂油
M=337.27，沉淀的M=3479.22，由于
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维生素C的分析
结构特点
►二烯醇结构，有强还原性 ►C3显酸性，可成钠盐 ►具共轭双键，有紫外吸收 ►两个手性碳，有旋光性 ►水中易溶，有糖类性质
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鉴别试验
►硝酸银反应——维生素C被氧化，银被还原成 黑色银沉淀
►使高锰酸钾、亚甲蓝褪色 ►与碱性酒石酸铜作用，产生红色氧化铜沉淀 ►二氯靛酚钠反应——二氯靛酚被还原成无色
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含量测定
►紫外分光光度法（三点校正法）
维生素A醋酸酯的环己烷溶液在328nm有最 大吸收，吸收系数E=1530
维生素A醇的异丙醇溶液在325nm有最大吸 收，吸收系数E=1820
由于维生素A中稀释用油和有关杂质也具有紫 外吸收，干扰测定，故采用三点校正法测定 含量
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波长差法
►如果λ max在326-329nm之间，且A/A328 比值超过规定值的±0.02，需按校正公 式计算校正值：
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是否需要校正值的判断
►如果λ max不在326-329nm之间，也用 第二法测定
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第二法（维生素A醇的测定）
►不能用第一法的样品采用第二法测定 方法：维生素A醇→皂化→提取→滤过→浓缩 →干燥→维生素A酯→制成异丙醇溶液，在规 定波长测定吸收度 数据处理：
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测定方法
►光照：使产生前维生素D3，反式维生素D3 ， 速甾醇D3 ，连同维生素D3 ，进行系统适用性 试验
►重复进样，维生素D3的峰值RSD≤2.0% ►分离度R>1.0
采用校正因子法计算维PP生T课件 素D总量
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维生素E分析
►结构特征：具有苯并二氢吡喃结构，苯环上 有1个乙酰化的酚羟基，易被水解、氧化；为 脂溶性维生素。有四种异构体，其中α型活性 最强
► 讨论：滴定前加入稀醋酸可减缓维生素C受空气氧 化，用新沸过的冷水做溶剂，除去水中溶解氧对测 定的影响
► 维生素C片也采用碘量法测定含量，但需过滤除去 辅料
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维生素C注射液含量测定
►精密量取本品适量（约相当于维生素C0.2g） 加水15mL与丙酮2mL，摇匀，放置5min，加 稀醋酸4mL与淀粉指示液1mL，用碘滴定液 （0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30s 不褪。每1mL碘滴定液（0.1mol/L）相当于 8.806mg的C6H8O6
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生育酚限量计算
►规定：0.1g维生素E消耗硫酸铈滴定液 （0.01mol/L）不得过1.0mL
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含量测定
►采用GC法 ►色谱条件
色谱柱：硅酮（OV-17），载气：N2 检测器：FID 内标：正三十二烷（正己烷溶液）
►系统适用性试验
以维生素E峰计算应不低于500（毛细管柱 5000），维生素E与内标的分离度应大于2
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测定方法
► 校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解 并稀释成每1mL中含1.0mg的溶液，摇匀，作为内 标溶液。另取维生素E对照品约20mg，精密称定， 置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10mL，密 塞，振摇使溶解，取1-3L注入气相色谱仪，计算校 正因子
► 样品测定：取本品约20mg，精密称定，置棕色具塞 锥形瓶中，精密加入内标溶液10mL，密塞，振摇使 溶解，取1-3L注入气相色谱仪，计算含量
►：滴定前加丙酮是用来消除注射液中含有的 抗氧剂亚硫酸钠对测定的干扰，丙酮与亚硫 酸钠形成加成物而消除影响
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2,6-二氯吲哚酚法
►以2,6-二氯吲哚酚为滴定剂，终点时，过量 一滴的滴定剂在酸性溶液中显玫瑰红色而指 示终点，无需另加指示剂
►此法较碘量法专属性强，但滴定剂不稳定
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► 紫外分光光度法 片剂、注射剂采用此法 以吸收系数法计算含量
► 硫色素荧光法 对照品对照法计算含量，方法专属，不受氧化产物 干扰
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硅钨酸重量法
►维生素B1+硅钨酸→白色沉淀，趁热过滤 ►沉淀依次用热盐酸、水、丙酮洗涤 ►80℃干燥至恒重 ►样品%=（沉淀重×0.1939）/取样量×100% ►式中0.1939为重量换算因子，维生素B1的
第九章 维生素类药物 的分析
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主要内容
►维生素A ►维生素D ►维生素E ►维生素B ►维生素C
脂溶性 水溶性
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►维生素 维持人体正常生理机能所必须的生
物活性物质
10%油、脂肪
及甜品
10%乳类制品
10%肉类、蛋类 制品
18%蔬菜
12%水果
40%谷类和PPT课麦件 类主食
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►校正公式的推导 假定这些杂质在310-340nm处吸收呈直线， 根据吸收度加和性原则，选择三个波长，用 数学方法，即
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维生素B1的分析
嘧啶环 噻唑环
►又称盐酸硫胺，结构特点： 有两个碱性基团，有紫外吸收，在水中易溶
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► 沉淀反应
鉴别反应
► 氯化物反应——本品为盐酸盐，显氯化物反应