口服肝靶向制剂介导受体ASBT和ASGPR在肝泡型包虫病大鼠模型体内的表达分析

肠末端上皮细胞的一种膜转运蛋白，作为药物吸收的潜在
靶点受到了广泛关注。去唾液酸糖蛋白受体（ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐ
ｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＡＳＧＰＲ）是肝细胞特异性表达的一种内吞型
受体，利用该受体介导的内吞机制可以实现药物或基因的
肝靶向递送［１３］。ＡＳＢＴ、ＡＳＧＰＲ 被证实为有效的口服肝靶
病，在我国畜牧业发达地区流行［１ －４］。治疗手段以手术 造模成功的ＳＤ 大鼠为ＨＡＥ 组，完成后续实验。
切除为主，但ＨＡＥ 的边缘带界限不清，术中难以完全切 １． ４ 动物分组与组织取样 ８ 只ＳＤ 大鼠为正常对照
除，患者的复发率高达７． ７％ ～ ３０％ ［５ －６］。且对于多器 组，８ 只经超声检查造模成功的ＳＤ 大鼠为ＨＡＥ 组（造模
（２００ ±２０）ｇ，购于江苏省南京市江宁区青龙山动物繁殖场，
实验动物生产许可证号：３２０２７８１０２９，实验动物使用许可证
号：ＳＹＸＫ（青）２０１６ －０００１。饲养于青海省包虫病研究重点实
验室，室温（２３ ± ）２ ℃，相对湿度５５％左右，自由进食、饮水。
兔多克隆抗体 、 兔 主要试剂 １． ２
ＡＳＢＴ
ａｂ２பைடு நூலகம்３２０５ ＡＳＧＰＲ
多克隆抗体ａｂ４２４８８ 购于Ａｂｃａｍ 公司；ＨＲＰ 标记山羊抗兔
抗体 、 山羊抗兔抗体 购于 Ｇ２３３０３ ＣＹ３
ＧＢ２１３０３
Ｓｅｒｖｉｃｅｂｉｏ
１ 青海大学医学院，西宁８１０００１；２ 青海省包虫病研究重点实验室，西宁８１０００１
摘要：目的 通过测定顶端钠依赖性胆盐转运体（ ＡＳＢＴ） 和去唾液酸糖蛋白受体（ ＡＳＧＰＲ） 的表达研究，探讨其在肝泡型包虫
方法 病（ ＨＡＥ） 药物治疗方面口服肝靶向制剂设计的可行性。
１８ 只雄性 ＳＤ 大鼠，１０ 只大鼠造模，造模成功的 ８ 只大鼠为 ＨＡＥ
ＡＳＧＰＲ 在正常对照组大鼠肝组织、ＨＡＥ 组大鼠非患病肝组织和 ＨＡＥ 组大鼠肝织病灶边缘带中表达差异有统计学意义（ Ｆ 值分别为
结论 １１０． ６６６、１２８． ２０１、１４３ ８７９，Ｐ 值均 ＜ ０． ００１），其中 ＨＡＥ 组较正常组表达水平高，且越靠近病灶组织表达越高。
ＡＳＢＴ 和 ＡＳＧＰＲ
向制剂介导受体，将其应用于ＨＡＥ 口服肝靶向新剂型，需
验证二者在ＨＡＥ 的表达情况。因此本研究分别对ＨＡＥ 大
鼠模型回肠组织中ＡＳＢＴ 及肝组织中ＡＳＧＰＲ的表达情况进
行检测分析，为后期研发靶向新剂型提供基础依据。
１ 材料与方法
１． １ 实验动物 雄性６ ～ ８ 周龄ＳＰＦ 级ＳＤ 大鼠，体质量
： （ ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ａｐｉｃａｌ ｓｏｄｉｕｍ － ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｂｉｌｅ ｓａｌｔ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ＡＳＢＴ ａｎｄ ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐ
（ ） （ ） ｔｏｒ ＡＳＧＰＲ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｏｒａｌ ｌｉｖｅｒ － ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ａｌｖｅｏｌａｒ ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｏｓｉｓ ＨＡＥ ｂｙ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ， ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＳＢＴ ａｎｄ ＡＳＧＰＲ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １８ ｍａｌｅ Ｓｐｒａｇｕｅ － Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｍｏｎｇ ｗｈｉｃｈ １０ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ （ ） （ ） ， ， ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ＨＡＥ ＨＡＥ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ８ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ ． Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｓｓａｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ， ， ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＡＳＢＴ ｉｎ ｔｈｅ ｉｌｅａｌ ； ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ＨＡＥ ｍｏｄｅｌ ｒａｔｓ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｒａｔｓ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＡＳＧＰＲ ｉｎ ｔｈｅ ｎｏｎ － ｄｉｓｅａｓｅｄ ｌｉｖｅｒ
可作为 ＨＡＥ 潜在的口服肝靶向制剂的介导受体，为设计用于治疗 ＨＡＥ 的口服肝靶向制剂提供理论基础。
关键词：棘球蚴病， 肝； 分子靶向治疗； 顶端钠依赖性胆盐转运体； 去唾液酸糖蛋白受体； 大鼠， Ｓｐｒａｇｕｅ － Ｄａｗｌｅｙ 中图分类号：Ｒ５３２． ３２ 文献标志码：Ａ 文章编号： （ ） １００１ － ５２５６ ２０２１ ０４ － ０８４６ － ０６
官转移、晚期等无法进行手术的患者，药物治疗尤为重 １０ 只，成功８ 只）。分别取正常大鼠回肠组织、肝组织，
要。目前现有的治疗包虫病的药物如苯并咪唑类（Ｂｅｎｚ ＨＡＥ 大鼠回肠组织、其他非患病肝组织、ＨＡＥ 大鼠肝组
）药物 ｉｍｉｄａｚｏｌｅｓ
［７ －
８］主要以口服给药为主，但给药后毒
织病灶边缘带（图１），备用。
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＳＢＴ ａｎｄ ＡＳＧＰＲ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｆｏｒ ｏｒａｌ ｌｉｖｅｒ － ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ
ａｌｖｅｏｌａｒ ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｏｓｉｓ
， ， ， ， ， ， （ ＧＡＯ Ｒｕｉｘｕｅ１ ＨＵ Ｃｈｕｎｈｕｉ１ ＺＨＡＮＧ Ｆａｂｉｎ１ ＧＡＯ Ｐａｎ１ ＧＡＮ Ｘｕｅｈｕｉ１ ＺＨＡＮＧ Ｙａｏｇａｎｇ２ ＪＩＡＮＧ Ｂｏｆａｎ１ ． １． Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｑｉｎｇ ， ， ； ， ， ） ｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｘｉｎｉｎｇ ８１０００１ Ｃｈｉｎａ ２． Ｑｉｎｇｈａｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｈｙｄａｔｉｄ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｘｉｎｉｎｇ ８１０００１ Ｃｈｉｎａ
８４６
临床肝胆病杂志第 卷第期 年月 ， ， ３７ ４ ２０２１ ４ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｈｅｐａｔｏｌ Ｖｏｌ．３７ Ｎｏ．４ Ａｐｒ．２０２１
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口服肝靶向制剂介导受体 ＡＳＢＴ 和 ＡＳＧＰＲ 在肝泡型包虫病 大鼠模型体内的表达分析
高瑞雪１，胡春晖１，张发斌１，高 攀１，甘雪辉１，张耀刚２，姜博１
组，正常组大鼠 ８ 只作为对照。 采用免疫荧光、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ、实时荧光定量 ＰＣＲ 对 ＡＳＢＴ 在 ＨＡＥ 模型大鼠及正常大鼠的回肠组
织的表达分布、蛋白及基因表达水平进行检测分析；采用同样的检测方法分析 ＡＳＧＰＲ 在 ＨＡＥ 大鼠模型的非患病肝组织、肝组织
病灶边缘带及正常大鼠肝组织的表达水平。 符合正态分布的计量资料 ２ 组间比较采用 ｔ 检验，３ 组间比较采用单因素方差分析，
副作用较大，肝局部药物浓度过低［９］，疗效欠佳。因此，
基于ＨＡＥ 的生物学基础，研究新型肝靶向制剂是目前治
疗包虫病的关键。现有的肝靶向制剂的研究主要是基于
粒径效应的注射用被动肝靶向，但注射给药患者依从性
低，因此考虑口服肝靶向制剂。
研究［１０ －１２］表明，顶端钠依赖性胆盐转运体（ａｐｉｃａｌ ｓｏ
， ）是存在于回 ｄｉｕｍ － ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｂｉｌｅ ａｃｉｄ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ＡＳＢＴ
高瑞雪，等． 口服肝靶向制剂介导受体ＡＳＢＴ 和ＡＳＧＰＲ 在肝泡型包虫病大鼠模型体内的表达分析
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肝泡型包虫病（ ， ）
ｈｅｐａｔｉｃ ａｌｖｅｏｌａｒ ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｏｓｉｓ ＨＡＥ
勒超声系统检查，确认造模是否成功。根据超声病灶横
是由多房棘球蚴寄生人体、感染肝脏所致的慢性寄生虫 切面的长、宽，纵切面的宽，确定病灶体积（长× 宽× 宽），
； ， Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｒａｔｓ Ｓｐｒａｇｕｅ － Ｄａｗｌｅｙ
收 基 作 通ＤＯ稿 金 者 信Ｉ：日 项 简 作１０期 目 介 者． ３：：：：９２国 高 张６０９２家 瑞 发／０ｊ．自 雪 斌－ｉｓ０ｓ然（，ｎ９ｑ１．ｈ科９－１ｍ９０１学５ｃ０２—ｚ１；ｆ基ｂ修）－＠金，５回女１２项２５日，６６目主．．期ｃ２（ｏ要０：８ｍ２２１从１０９．２６事０００４６－包．４０１１２虫１）４－；病青２防５海治大与学药省物部研共发建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室自主课题项目（２０１９ － ＺＺ － ０１）
ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｒｇｉｎａｌ ｚｏｎｅ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｌｅｓｉｏｎ ｏｆ ＨＡＥ ｍｏｄｅｌ ｒａｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｒａｔｓ． Ｔｈｅ ｔ － ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ
； ｏｆ ｎｏｒｍａｌｌｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｄａｔａ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ａ ｏｎｅ － ｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｒｅｅ ， ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｅａｓｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｔ － ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓ ， ， ， ｃｅｎｃｅ ａｓｓａｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ ｔｈｅ ＨＡＥ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉ （ ， ， ， ） ｃａｎｔｌｙ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＳＢＴ ｉｎ ｔｈｅ ｉｌｅａｌ ｔｉｓｓｕｅ ｔ ＝ ５ ３０９ ４． １１０ ａｎｄ ２８． ０６０ ａｌｌ Ｐ ＜ ０． ０５ ａｎｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｅｘ （ ， ）（ ， ， ， ） ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＡＳＧＰＲ ｔｈｅ ｃｌｏｓｅｒ ｔｏ ｔｈｅ ｌｅｓｉｏｎ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｆ ＝ １１０ ６６６ １２８． ２０１ ａｎｄ １４３． ８７９ ａｌｌ Ｐ ＜ ０． ００１ ． ， Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＡＳＢＴ ａｎｄ ＡＳＧＰＲ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｆｏｒ ｏｒａｌ ｌｉｖｅｒ － ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＨＡＥ ｗｈｉｃｈ ｐｒｏ
结果 两两比较采用 ＬＳＤ － ｔ 检验。
免疫荧光、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ、实时荧光定量 ＰＣＲ 结果均显示 ＡＳＢＴ 在 ＨＡＥ 组回肠组织的表达较
正常组表达上调（ ｔ 值分别为 ５． ３０９、４． １１０、２８． ０６０，Ｐ 值均 ＜ ０． ０５ ） 。 免疫 荧光、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ、实 时荧 光定 量 ＰＣＲ 结 果均 显示，
ｖｉｄｅｓ ａ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｏｒａｌ ｌｉｖｅｒ － ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＨＡＥ．
： ， ； ； ； Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｏｓｉｓ Ｈｅｐａｔｉｃ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｙ Ａｐｉｃａｌ Ｓｏｄｉｕｍ － Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｂｉｌｅ Ｓａｌｔ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ