血粉复合发酵蛋白替代鱼粉对彭泽鲫的生长性能和肝脏功能的影响

血粉复合发酵蛋白替代鱼粉对彭泽鲫的生长性能和肝脏功能的
影响
陈任孝;李洪琴;罗莉;郭玉阳;朱根廷;罗浩
【摘要】以血粉复合发酵蛋白(Fermented blood meal protein,FBP)分别等量替代对照组日粮中37.5％、62.5％和100％的鱼粉,研究了FBP对彭泽鲫(Carassius auratus)的生长性能和肝脏功能的影响.结果显示,随着替代比例的增加,彭泽鲫的增重率呈下降趋势,饲料系数依次上升,但替代37.5％鱼粉组的增重率和饲料系数与对照组差异不显著；肠道消化酶活性、肝脏谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活
性和GPT/GOP比值随替代比例的增加而下降,碱性磷酸酶活性呈上升趋势.在37.5％替代比例下,彭泽鲫肝脏抗氧化能力与对照组差异不显著.本实验说明,FBP替代鱼粉的比例不宜超过37.5％.%The experiment was conducted to study the effects of replacing fish meal with different proportions of fermented blood meal protein (FBP) in diet on growth performance and liver function of Pengze crucian carp ( Carassius auratus). The equivalent replacement ratio was 37. 5% , 62. 5% and 100% , respectively. The activity of protease, amylase and
li-pase in intestine and GPT, GOT, GPT/GOT in liver decreased with the increasing of replacement ratio, while ALP increased. When the replacement ratio was 37. 5% , liver antioxidant ability of crucian carp had no significaut difference from control group. In conclusion, the replacement ratio should be less than 37. 5%.
【期刊名称】《淡水渔业》
【年(卷),期】2013(043)002
【总页数】6页(P54-59)
【关键词】彭泽鲫(Carassius auratus);血粉复合发酵蛋白(FBP);生长性能;肝脏功
能
【作者】陈任孝;李洪琴;罗莉;郭玉阳;朱根廷;罗浩
【作者单位】新希望集团技术研发中心,成都610041
【正文语种】中文
【中图分类】S963.32+1
近年来，寻求鱼粉适宜替代蛋白源的研究已成为水产饲料研究的热点之一[1-5]。

血粉在非常规动物蛋白质饲料的开发利用中，以其高蛋白、高赖氨酸含量和来源丰富而倍受关注，但由于血粉氨基酸组成平衡性差，导致实际营养价值变低。

因此，许多国家都开展了对血粉加工方法的研究。

目前进行加工处理的方法主要有喷雾干燥法、酶解法、发酵法和膨化法等[6]。

其中，发酵法生产的血粉具有投入低、能
耗省的特点，应用较广泛[7]。

在畜禽上以发酵血粉替代鱼粉的多项研究表明，发
酵血粉代替进口鱼粉是安全可行的[8-11]，而在水产上仅见发酵血粉饲喂虹鳟(Oncorhynchus mykiss)的报道，以10%、15%和20%的发酵血粉部分替代鱼粉，替代组虹鳟鱼的增重率和饲料效率均优于对照组[12]。

血粉复合发酵蛋白(Fermented blood meal protein，FBP)是以血粉为主，搭配
水解羽毛粉、菜粕、棉粕、DDGS和麸皮等杂粕和糟渣等动植物蛋白源组分，经
发酵成的生物发酵蛋白，其粗蛋白含量高达68.18%。

本试验采用FBP替代彭泽鲫(Carassius auratus)饲料中的鱼粉，研究其对彭泽鲫的生长性能和肝脏功能的影响，以期科学评价FBP的替代效应，为FBP替代鱼粉的应用提供理论依据。

1 材料与方法
1.1 试验日粮和试验设计
根据鲫鱼的营养参数[13]，以鱼粉、豆粕、棉粕、菜粕、小麦、米皮糠等为主要原料配制基础日粮。

对照组含16%的鱼粉，试验组分别以6%、10%和16%的FBP 等量替代基础日粮中的鱼粉，相当于替代鱼粉总量的37.5%、62.5%和100%(B-37.5%、B-62.5%和 B-100%)。

将预处理后的原料粉碎过60目筛，按配方称重后均匀混合，挤压成粒径为1.5 mm，风干成含11%水分的颗粒饲料，置于-18℃冰箱保存备用。

试验日粮组成及营养水平见表1和表2，各日粮组等蛋白、等脂肪、等有效磷、等赖氨酸和等蛋氨酸。

图1 血粉、FBP和鱼粉的必需氨基酸模式比较Fig.1 Comparison of amino acid patterns between blood meal,FBP and fish meal
血粉与鱼粉的相关系数γ=0.67，FBP与鱼粉相关系数γ=0.84
表1 FBP和鱼粉的营养组成比较Tab.1 Comparison of nutrient composition between FBP and fish meal %样品氨基酸总量粗蛋白粗脂肪粗灰分钙磷鱼粉60.5364.55.611.43.812.83FBP65.4968.183.925.250.360.74
表2 基础日粮组成及营养水平(风干基础)Tab.2 Composition and nutrient levels of basal diet (air-dry basis) %成分对照组B-37.5%B-62.5%B-100%鱼粉
16.0010.006.000.00FBP0.006.0010.0016.00豆粕 20.0020.0020.0020.00棉粕14.0013.8013.6013.40菜粕14.0013.8013.6013.40小麦
20.0020.0020.0020.00米皮糠10.0010.0010.0010.00磷酸二氢钙
2.202.152.102.05大豆油0.701.001.301.60膨润土1.0551.0951.1551.195沸石粉1.0551.0951.1551.195矿物质预混料1)0.500.500.500.50维生素预混料
2)0.100.100.100.10氯化胆碱(60%) 0.150.150.150.15VC磷酸酯
(35%)0.030.030.030.03抗氧化剂0.020.020.020.02防霉剂0.100.100.100.10包
膜赖氨酸(93%)0.090.140.170.22包膜蛋氨酸(50%)-0.020.020.04合计
100.00100.00100.00 100.00营养水平3)粗蛋白 35.2535.2735.2335.25粗脂肪5.375.325.385.32有效磷0.630.640.610.64赖氨酸2.022.042.002.01蛋氨酸
0.640.660.620.63
1)矿物质预混料为每千克日粮提供：Fe 150 mg；Cu 3.2 mg；Zn 34.1 mg；Mn 13.0 mg；I 5.7 mg；Se 0.3 mg；Co 12.4 mg。

2)维生素预混料为每千克日粮提供：VA 2000.0 IU；VD 2000.0 IU；VE 100 mg；VK3 10.0 mg；VB1 5.0 mg；VB2 10.0 mg；烟酸100.0 mg；VB6 10.0 mg；
泛酸钙40.0 mg；叶酸5.0 mg；VB12 0.02 mg；生物素1.0 mg。

3)营养水平均为实测值。

1.2 试验鱼与饲养管理
试验鱼购自重庆市北碚区歇马渔场，在室内循环水养殖系统中进行养殖。

挑选体格健壮，体重(9.00±0.50) g的鲫鱼，用基础饲料驯养15 d，待摄食正常后开始正式试验。

生长试验分为4个组，每组3个重复，每个重复放养50尾鱼，每天投喂4次(8：00、11：30、15：00、18：30)，日投喂量为体重的3%～5%，根据试验鱼的增重情况，每隔10天调整一次投饲率。

每个试验桶容积330 L(有效体积)。

饲养期间水温22～28℃，DO>8.0 mg/L，氨氮含量<0.10 mg/L，pH 6.6～7.0，亚硝酸盐<0.1 mg/L。

光周期与自然周期相同。

正式试验期56 d。

1.3 样品采集与制备
试验开始前取饲料主要原料和各组饲料样品进行主要营养成分分析。

饲养试验结束，鱼禁食24 h后称重，记录饲料投喂量。

并随机取出10尾鱼，取出肠道和肝脏，
分别称重后剪碎，按1∶9(g∶mL)加入鱼用生理盐水(4 ℃)，迅速转入玻璃匀浆器
冰浴匀浆，匀浆液离心(4 ℃，3500 r/min)15 min，取上清液即得粗酶液，置于-80 ℃冰箱中保存。

1.4 测定指标及方法
1.4.1 试验原料和饲料样品的分析
样品的水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量按国际标准方法(AOAC，1995)[14]测定。

氨基酸采用酸水解法测定，色氨酸由于酸水解过程中被破坏，未测定到，所用仪器为日立835-50型氨基酸自动测定分析仪。

1.4.2 生长指标计算公式
增重率(WG)=(Wt-W0)×100%/W0；
饲料系数(FCR)=F/(Wt-W0)；
饲料效率(FER)=(Wt-W0) ×100%/F
式中：W0为鱼初始尾均重(IBW，g)；Wt为鱼终末尾均重(FBW，g)；F为平均摄食饲料总量(g)。

1.4.3 肠道消化酶活性的测定
蛋白酶活性采用福林—酚法[15]测定；淀粉酶活性采用淀粉—碘显色法[16]测定；脂肪酶活性采用聚乙烯醇橄榄油乳化液水解法[15]测定。

1.4.4 肝脏常规指标的测定
肝脏常规指标均采用南京建成生物研究所研制的相应试剂盒和752型分光光度计测定。

总蛋白(TP)含量采用考马斯亮蓝法测定，谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性采用赖氏法、碱性磷酸酶(AKP)活性采用比色法超氧化物歧化酶(SOD)活性采用黄嘌呤氧化酶法、丙二醛(MDA)含量采用TBA法。

1.5 数据处理
采用SPSS13.0统计软件进行单因子方差分析(One-way ANOVA)，同时进行Duncan氏多重比较，P<0.05为差异显著，所有数据均以“平均值±标准差(Mean±SD)”表示。

2 结果
2.1 不同比例FBP替代鱼粉对彭泽鲫生长及饲料利用的影响
彭泽鲫的生长试验结果见表3，对照组WG、FER均最高，FCR最低。

随着替代比例的增加，WG和FER依次下降，FCR依次升高。

B-37.5%组的WG、FCR和FER与对照组差异不显著。

试验鱼成活率100%。

结果表明FBP以37.5%比例替代鱼粉对彭泽鲫生长性能和饲料利用无影响。

表3 FBP替代鱼粉对彭泽鲫生长性能的影响Tab.3 Effects of substituting fish meal with FBP on growth performance of Pengze crucian carp组别初始均重/g结束均重/g增重率/%饲料系数饲料效率/%成活率/%对照组
8.61±0.2327.05±0.43b214.29±6.84b1.80±0.08a55.49±2.35c100B-
37.5%8.61±0.1226.79±0.38b211.13±7.41b1.88±0.03ab53.26±0.80bc100B-62.5%8.68±0.0526.26±0.43ab202.55±4.97ab1.99±0.03bc50.29±0.76ab100 B-100%8.70±0.0625.45±0.79a192.54±9.70a2.10±0.10c47.84±2.31a100注：同一列小写字母不同者差异显著(P<0.05)，小写字母相同者差异不显著(P>0.05)，下表同。

2.2 不同比例FBP替代鱼粉对彭泽鲫肠道消化酶活性的影响
从表4看出，FBP替代鱼粉对彭泽鲫肠道消化酶活性有显著影响。

肠道蛋白酶活性、脂肪酶活性和淀粉酶活性均随替代水平的升高呈下降趋势。

除B-37.5%组淀粉酶活性与对照组差异不显著外，其他各组酶活性均显著低于对照组。

FBP全部替代鱼粉时，肠道蛋白酶活性、脂肪酶活性和淀粉酶活性分别比对照组下降24.83%、24.36%和26.66%。

表4 FBP替代鱼粉对彭泽鲫肠道消化酶活性的影响Tab.4 Effects of substituting fish meal with FBP on digestive enzyme of Pengze crucian carp组别蛋白酶/(U/g prot)脂肪酶/(U/μg prot)淀粉酶/(U/mg prot)对照组
631.24±7.28d534.56±15.18b503.03±26.29bB-
37.5%554.20±14.08c421.94±52.74a477.50±19.06bB-
62.5%505.40±10.62b426.67±53.33a391.50±34.53aB-
100%474.51±5.21a404.34±15.65a368.90±35.50a
2.3 不同比例FBP替代鱼粉对彭泽鲫肝脏功能的影响
2.3.1 FBP对彭泽鲫肝脏功能常规指标的影响
从表5可得，随着替代比例的增加，GPT、GOT活性和GPT/GOT比值均呈下降
趋势；各替代组酶活性显著低于对照组，其中，替代组GOT活性组间差异不显著。

AKP活性呈升高趋势，替代组依次比对照组高14.94%、27.16%和51.93%。

表5 FBP替代鱼粉对彭泽鲫肝脏功能指标的影响Tab.5 Effects of substituting fish meal with FBP on hepatopancreas function index of Pengze crucian carp组别GPT(U/gprot)GOT(U/gprot)GPT/GOTAKP(U/gprot)对照组
143.78±3.34d38.00±0.47b3.78±0.01a110.07±1.02aB-
37.5%115.96±6.25c35.96±1.28a3.22±0.01b126.51±2.29bB-
62.5%108.66±1.53b35.89±0.78a3.03±0.01c139.96±3.03cB-
100%87.78±0.31a34.94±1.61a2.51±0.02d167.23±4.00d
2.3.2 FBP对彭泽鲫肝脏抗氧化能力指标的影响
从表6可知，彭泽鲫肝脏SOD活性随替代比例的增加而下降，MDA活性依次升高。

37.5%和 62.5%比例替代鱼粉时，SOD活性与对照组差异均不显著；37.5%
比例替代时，MDA含量与对照组差异均不显著。

结果表明，FBP替代鱼粉比例在37.5%时不影响彭泽鲫的肝脏抗氧化能力。

表6 FBP替代鱼粉对彭泽鲫肝脏抗氧化能力的影响Tab.6 Effects of substituting fish meal with FBP on hepatopancreas antioxidant capacity of juvenile Pengze crucian carp组别对照组B-37.5%B-62.5%B-
100%SOD/(U/mL)106.15±4.61b99.83±3.50b96.86±5.59b80.80±3.94aMDA/
(nmol/mgprot)39.35±0.92a40.67±2.08a49.49±1.58b50.94±2.20b
3 讨论
血粉蛋白质含量在80%左右，含有丰富的赖氨酸、精氨酸、蛋氨酸、亮氨酸等，
是一种重要的饲料蛋白来源，但其适口性差、氨基酸不平衡、消化率和生物学价值低、外观颜色不佳、过量添加导致腹泻[17]等因素，致使在畜禽、水产动物饲料中较少使用。

血粉发酵后消化率提高[18]，部分替代鱼粉饲喂肉鸡[8]、蛋鸡[19]、虹鳟[12]、肉猪[10]等均能降低饲料成本。

血粉的必需氨基酸模式(EAAI)与鱼粉的相关系数为0.67，而与水解羽毛粉、棉粕、菜粕等复合发酵后的血粉复合发酵蛋白(FBP)与鱼粉EAAI的相关系数达到0.84，说明必需氨基酸的平衡性得到提高。

本试验采用的FBP粗蛋白含量和氨基酸总量高于秘鲁鱼粉，但是替代后饲养彭泽
鲫的实际生产效果并不能超过鱼粉，替代比例为37.5%时，不影响彭泽鲫的生长
性能和饲料利用率。

其原因就在于各替代组试验日粮中氨基酸含量不同，虽然在制定试验日粮配方时，根据原料检测结果特别调平了两种限制性氨基酸的含量，但与鱼粉相比，FBP的其他必需氨基酸并不平衡。

而鱼体增长，蛋白质的利用与必需、非必需氨基酸的种类、含量及平衡有关[20]，氨基酸的平衡性越差，动物对其利用率越低[21]。

FBP替代鱼粉的比例越大，氨基酸不平衡的缺陷越明显。

鱼类肠道的消化酶活性可以适应饲料性质，或者说饲料性质可以影响消化酶活性[20-24]；本试验饲料中添加FBP后，彭泽鲫肠道消化酶活性显著降低，可能是FBP在发酵过程中使用了消化率低于鱼粉的棉粕、菜粕等杂粕，以及杂粕的抗营
养因子未完全去除[25-26]。

肝细胞中 GOT和GPT活性反映鱼类肝组织细胞受损的重要敏感指标。

当肝中毒
发生病变或因大面积损伤引起细胞膜通透性增加时，细胞内GOT 和 GPT大量外
泄渗漏到血液中，致使细胞内酶活性下降，血液中酶活性上升。

本试验中替代组肝脏的GOT、GPT及GPT/GOT比值均下降，且显著低于对照组，提示替代组彭泽
鲫的肝脏可能存在损伤，而因肝细胞损伤导致代谢紊乱也可能是生长受到抑制的原因之一。

从数据上也可看出GPT及GPT/GOT比值的变化规律与生长的变化规律
一致。

AKP是可以催化各种含磷化合物水解的酶类，在动物机体的骨化[27]，营养的吸收、转运与利用[28]，解毒体系[29]和免疫反应[30]中都可发挥作用。

本试验结果，肝脏AKP活性呈升高趋势，可能与FBP发酵过程中有益菌的代谢产物低聚糖、寡糖等的参与以及小肽等未知促生长因子的作用有关。

如饲料中添加寡糖有提高动物生产性能、增强免疫力等作用[31]；饲料中添加植物活性小肽可以提高史氏鲟(Acipenser schrenckii)稚鱼的摄食量，提高饲料转化率和免疫力[32]等。

正常情况下机体自由基的产生与清除处于一种动态平衡，当自由基产生过多而清除物质过少时，就会对机体造成氧化损伤[33]。

SOD对体内自由基的清除具有重要
作用，其含量可以反映机体对自由基的清除能力[34]；MDA 作为自由基与生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的代谢产物，其含量可反映自由基的产生量和生物膜的损伤程度[35]。

替代鱼粉比例为37.5%时，对彭泽鲫肝脏抗氧化能力和生长性能无显著影响，表明彭泽鲫的肝脏抗氧化能力和生长性能也有一定的相关性。

4 结论
饲料中FBP替代鱼粉的比例小于37.5%时，对彭泽鲫的生长性能和饲料利用率无
显著影响；超过37.5%后对彭泽鲫的生长性能、饲料利用率有显著影响。

在37.5%替代比例下，彭泽鲫肠道消化酶活性、肝脏代谢功能和肝脏抗氧化能力均下降，故实际生产中，FBP替代鱼粉的比例不宜超过37.5%或以更低的比例替代使用，同
时必须考虑其他潜在的限制因子和氨基酸平衡的影响。

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