实验四 碱性蛋白与总体蛋白的定位
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实验四碱性蛋白与总体蛋白的定位
一、目的要求
了解固绿染色法的原理及操作程序，制片观察碱性蛋白与总体蛋白在细胞内的分布二、原理
pH＜pI 是阳离子pH＝pI pH﹥pI是阴离子固绿是一种酸性染料。
它对碱性物质的亲和力较强，利用各种蛋白质在一定的酸碱条件下因等电点不同而产生的与酸性染料结合能力的差异，显示碱性蛋白质在细胞内所在部位。
三、材料与用具
1、材料：洋葱鳞茎的表皮细胞
2、试剂A 10％福尔马林溶液 B 0.2％固绿水溶液 C 0.05 的NaCO3 D 0.13mol/L HCl
（1）染酸性蛋白质的染液:试剂B+D（1:1）为1％pH=2.2 固绿染液
（2）染碱性蛋白质的染液:试剂B+C（1:1）为1％pH=8 固绿染液
（3）5％三氯醋酸溶液
四、操作
取表皮2片加10％中性福尔马林溶液固定15min 蒸馏水冲洗数次
5％三氯醋酸溶液（5~10ml）5％三氯醋酸溶液90℃恒温水浴15min
冲洗分两组染色
（1）取一片表皮与载玻片上pH=2.2 固绿染液染色5-15min 蒸馏水冲洗
展开盖玻片观察
（2）取一片表皮与载玻片上pH=8 固绿染液染色5-15min
展开盖玻片观察
五、结果
六、（1）pH=2.2时，酸性蛋白质与碱性蛋白质部位呈绿色
（2）pH=8时，碱性蛋白质部位呈浅绿色。