阿托伐他汀对CLP大鼠模型的保护作用

阿托伐他汀对CLP大鼠模型的保护作用
曲茂兴;于健;李春树;吕慧怡
【摘要】目的探讨阿托伐他汀对脓毒症大鼠血浆一氧化氮(NO)和肝组织匀浆丙二醛(MDA)含量的影响.方法将75只健康雄性大鼠随机分为3组:对照组行假手术;脓毒症组行盲肠结扎穿孔术(CLP);阿托伐他汀组,用40 mg/kg阿托伐他汀灌胃,行CLP.分别在术后0 h、2 h、6 h、10 h、24 h时间点检测血浆NO和肝脏组织匀浆MDA的含量.术后24 h取心脏、肺、肝脏、空肠标本,光镜下检查组织病理学变化.结果脓毒症组、阿托伐他汀组血浆NO的浓度,在术后6 h、10 h、24 h时间点差异有统计学意义(P<0.01).脓毒症组、阿托伐他汀组肝组织匀浆MDA的含量,在术后2 h、6 h、10 h、24 h比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).光镜下对照组无明显病理改变,脓毒症组有炎细胞浸润,组织充血、坏死、渗出,阿托伐他汀组病理改变介于两者之间.结论阿托伐他汀可能降低脓毒症大鼠模型NO与MDA的含量,减轻炎症反应.%Objective To investigate the influence of atorvastatin on nitric oxide (NO) and malondialdehyde (MDA)of the sepsis rats. Methods A total of 75 male rats were randomized into three groups. The control group was treated with sham-operation. The sepsis group was made with cecal ligation and puncture( CLP). The atorvastatin group was feeded on 40 mg/kg atorvastatin, then the rats were made with CLP. The blood and hepatic tissue samples were separately colleced in postoperative 0 h,2 h,6 h,10 h,24 h in three groups,and the levels of NO and MDA were measured through the spectrophotometera. The specimens of the heart, lung, liver and jejunum of rats were dyed and the tissue pathology was observed under light microscope at 24 h after operation.
Results In atorvastatin group,the concentration of NO significantly decreased ( P < 0. 01 ) in comparison to the sepsis group after 6 h, 10 h and 24 h, and the MDA were also significantly decreased in comparison to the sepsis group( P <0. 05 or P <0. 01). There was no pathological change in control group under the light microscope. In sepsis group,the specimens of the heart,lung,liver and jejunum were all immersed by different inflammatory cells ,and hyperemia, necrosis and exudate were shown in the specimen tissue. Conclusion Atorvastatin may postpone the rising velocity of NO and MDA in sepsis rats, and reduce inflammatory reaction.【期刊名称】《实用药物与临床》
【年(卷),期】2011(014)005
【总页数】4页(P361-364)
【关键词】脓毒症;阿托伐他汀;一氧化氮;丙二醛;盲肠结扎穿孔术
【作者】曲茂兴;于健;李春树;吕慧怡
【作者单位】大连医科大学附属第二医院重症医学科,ICU,大连,116027;大连医科大学附属第二医院重症医学科,ICU,大连,116027;大连医科大学附属第二医院重症医学科,ICU,大连,116027;大连医科大学附属第二医院药剂科,大连,116027
【正文语种】中文
脓毒症(Sepsis)是由感染引起的全身炎症反应，发病率有逐年上升趋势，是ICU患者死亡的主要原因之一［1］。

阿托伐他汀是临床常用的调脂药，大规模临床试验
证明，它可显著降低心血管疾病的致残率和死亡率［2－5］，同时具有抗炎［6－11］、改善内皮细胞功能和NO活性等作用［12－14］。

本实验采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症大鼠模型，观察阿托伐他汀对大鼠血浆一氧化氮(NO)和肝组织匀浆丙二醛(MDA)的影响，探讨阿托伐他汀的临床应用价值。

1 材料和方法
1.1 仪器设备 DS－88型电子秤(武汉自动化仪表厂)，TG16WS高速台式离心机(长沙科学仪器厂)，UV－2100 Spectrophotometer紫外/可见分光光度计(日本
岛津公司)，XW－80A旋涡混合器(上海青浦沪西仪器厂)，HH－W21－600电热恒温水浴箱(上海医用恒温设备厂)。

1.2 试剂和材料阿托伐他汀(辉瑞制药有限公司生产，批号:081128);一氧化氮(NO)，微量丙二醛(MDA)试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.3 动物分组及给药 75只健康雄性SD(Sprague－Dawley)大鼠，体质量184～202 g，购于大连医科大学实验动物中心。

按照随机排列表法分为3组，每组25只。

对照组用食用淀粉40 mg/kg加入2mL生理盐水，制成混悬液，连续灌胃5 d，第6日行假手术。

脓毒症组同样用食用淀粉灌胃，第6日行CLP，用丝线结扎盲肠总长度的30%［15］，在盲肠游离端选2个相距3mm点分别刺穿盲肠，术后置笼内活动，不禁饮食。

阿托伐他汀组，用阿托伐他汀40 mg/kg［16］溶于
2mL生理盐水，制成混悬液，连续灌胃5 d，第6日行CLP。

1.4 标本收集及检测分别在术后0、2、6、10、24 h时间点眼眶采血，肝素抗凝
管静置30min，4℃、3000 r/min离心15min，取血浆于－20℃冰箱中保存。

剪取肝脏组织在冰冷的生理盐水中漂洗，滤干，称湿重约0.1 g倒入玻璃匀浆管中，加入1mL 0.86%冷生理盐水研磨，使组织匀浆化，4℃、2000 r/min离心15min，取上清于－20℃冰箱中保存。

用分光光度计检测血浆NO、肝脏组织匀浆MDA的含量。

24 h时间点取心脏、肺、肝脏、空肠标本，置10%甲醛溶液中固定，依次
常规脱水，石蜡包埋，制成切片，苏木精－伊红(HE)染色，光镜下检查组织病理学改变。

1.5 统计学方法采用SPSS 11.5统计软件，计量资料以表示，正态分布变量多组间比较用方差分析，3个处理组均数的两两比较用LSD－t检验法，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果
2.1 各组血浆NO的比较 2 h时对照组与脓毒症组(P=0.029)和阿托伐他汀组
(P=0.038)比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。

脓毒症组在术后6 h明显升高，24 h达到峰值(329.04±21.15)μmo l/L;阿托伐他汀组在术后10 h明显升高，在24 h达到峰值(209.53±10.68)μmol/L。

在0 h和2 h时间点，阿托伐他汀组与脓毒症组比较，差异无统计学意义(P ＞0.05)，在 6 h、10 h、24 h时间点，阿托伐他汀组与脓毒症组比较，差异有统计学意义(P＜0.01)，见图1。

图1 各组血浆NO浓度的比较
2.2 各组肝组织匀浆MDA的比较脓毒症组和阿托伐他汀组MDA含量在术后2 h 升高，6 h、10 h无明显变化，于24 h再度回升并分别达到峰值
(8.22±0.54)nmol/m gprot和(6.32±0.35)fnmol/mgprot。

在 2 h、6 h、10 h、24 h，阿托伐他汀组MDA含量均低于脓毒症组，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。

见图2。

图2 各组肝组织匀浆丙二醛水平的比较
2.3 光学显微镜检查心脏:对照组无明显病理改变或间质血管充血(图3A)。

脓毒症组部分心肌变性，血管充血明显(图3B)。

阿托伐他汀组少量心肌变性，间质血管充血(图3C)。

肺:对照组肺泡间隔无增宽，无炎性细胞浸润(图4A)。

脓毒症组肺泡间隔明显增宽，淋巴细胞、浆细胞浸润，血管扩张充血，其周围炎细胞浸润明显(图4B)。

阿托伐他汀组肺泡间隔略增宽，少量淋巴细胞、浆细胞浸润(图4C)。

空
肠:对照组肠粘膜正常(图5A)。

脓毒症组肠粘膜部分上皮脱落，重度炎症(图5B)。

阿托伐他汀组肠粘膜中度炎症(图5C)。

肝脏:对照组无明显病理改变或肝细胞轻度
水肿，汇管区少量淋巴细胞浸润(图6A)。

脓毒症组肝细胞高度水肿、变性(图6B)。

阿托伐他汀组肝血管略充血，肝细胞水肿较轻(图6C)。

3 讨论
本次试验采用CLP复制脓毒症大鼠模型［17－18］。

CLP模型操作简单，通过外科处理使动物腹腔存在失活组织的同时，少量持续溢入混有多种细菌的肠内容物，引起腹腔感染，与临床上阑尾炎穿孔形成的憩室炎极为相似［19－20］，既可以
使脓毒症得到充分发展，也可以保证脓毒症大鼠模型在24 h内的存活率。

进入腹腔的细菌释放，刺激单核细胞、巨噬细胞和内皮细胞等产生多种促炎细胞因子，可迅速活化不同组织器官的细胞，导致机体代谢、激素水平和神经内分泌改变，造成细胞功能异常和器官功能衰竭。

内毒素也激活生理状态下没有活性的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)并大量表达，产生过量的NO，促使大量的中性粒细胞活化，引起“呼吸爆发”，产生大量的氧自由基，促进炎性渗出和组织损伤。

MDA是体内自由基代谢产生的脂质过氧化产物，可以反映脂质过氧化自由基的存在及反应的程度［21］。

他汀类药物能抑制iNOS的表达，下调NO的合成，从而改善脓毒症的
预后。

本次试验中，脓毒症组血浆NO浓度在术后6 h显著升高，24 h达到峰值(329.04±21.15)μmol/L。

在阿托伐他汀干预后，血浆NO的浓度在术后10 h才
显著升高，术后24 h达到峰值(209.53 ±10.68)μmol/L。

在6 h、10 h、24 h时间点，阿托伐他汀组大鼠血浆中NO的浓度较脓毒症组明显降低(P＜0.01)。

阿托
伐他汀可以降低脓毒症大鼠血浆中NO的浓度。

在脓毒症组，术后24 h肝组织匀浆MDA含量的峰值为(8.22±0.54)nmol/mgprot，阿托伐他汀组为
(6.32±0.35)nmol/mgprot，在术后 2 h、6 h、10 h、24 h，阿托伐他汀组肝组
织匀浆MDA含量均低于脓毒症组(P＜0.05或P＜0.01)，说明阿托伐他汀也可以
降低脓毒症大鼠肝组织匀浆中MDA的含量。

与脓毒症大鼠高浓度的NO和MDA 相对应，24 h后光镜下检查发现，脓毒症组心脏﹑肺﹑肝脏﹑空肠有明显病理改变，炎细胞浸润，组织充血、坏死、渗出，表现为重度炎症，提示脓毒症时心脏﹑肺﹑肝脏﹑空肠都可能受累。

阿托伐他汀干预后，心脏﹑肺﹑肝脏﹑空肠光镜下的病理改变较脓毒症组有一定程度的改善。

说明阿托伐他汀可能减轻脓毒症大鼠模型的炎症反应，因此，推测在脓毒症患者中应用他汀类药物可能具有一定的临床意义。

图3 光学显微镜下大鼠心脏24 h病理改变(HE×400)
图4 光学显微镜下大鼠肺脏24 h病理改变(HE×200)
图5 光学显微镜下大鼠空肠24 h病理改变(HE×200)
图6 光学显微镜下大鼠肝脏24 h病理改变(HE×200)
“拯救脓毒症战役”(SSC)会议推荐早期集束化治疗:液体复苏，血管活性药物，控制血糖，小剂量激素，机械通气以及重组人体活化蛋白 C(rhAPC)用于治疗脓毒症休克等，但目前仍没有特效治疗方法。

虽然FDA批准他汀类药物仅作为调脂及抗
动脉粥样硬化使用，也许它的保护作用可以给我们新的启发和思路。

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