实验_维生素B1片含量测定的方法验证

30.0
60.0
…
…
…
…
…
…
60.0
0.3%
…
…
…
<2.0%
…
…
…
…
…
…
稳定性试验
•目的：
•考察样品溶液制备后多少时间内稳定
•要求
•要有一定的时间间隔，如：在0、15、30、45、60min
时间点分别测定样品的A246；在0、1、2、4、8、12h 分别测定样品的峰面积。
•RSD < 2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定； •RSD > 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到
•的程度
•要求
•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制
备三份供试品溶液进行测试，计算回收率
•RSD < 2.0%
加样回收试验
98~102%
序号
称样量 （g）
待测组分 含量
（mg）
对照品加 入量
（mg）
测得量 （mg）
回收率 （%）
平均加样 回收率 （%）
RSD （%）
1
0.2511
2
0.2500
15.0
12.0
27.2
100.1
3
0.2512
4
0.2509
5
0.2500
15.0
15.0
29.8
98.6
6
0.2500
7
0.2504
8
0.2500
15.0
18.0
33.1
100.0
9
0.2510
取含量测定时一半的称样量，0.5g/2
撰写方法学验证论文
• 线性与范围: 设计对照品溶液的浓度 • 精密度试验 • 稳定性试验 根据实验测定数值进行计算 • 重复性试验 • 加样回收试验: • 设计称样量、对照品加入量 • 含量测定：根据实验测定数值进行计算
RSD < 2.0%，否则要尽快测定
稳定性试验(示例)
• 同批、同法
序号
时间 信号值
(min)
1
0
0.505
2
15
0.507
3
30
0.509
4
45
0.513
5
60
0.525
6
90
0.548
7
120 0.567
平均 信号值
0.507
RSD
RSD
（%） （%）
(< 2.0%) (> 2.0%)
加样回收率试验
实验八 维生素B1片含量测定的方法验证
设计性实验
药物分析实验
实验原理
•维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），
化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐
H3C
N
N
NH2
H2 C
N+
CH2CH2OH
Cl- HCl
CH3
性质
• 溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶 • 硫色素反应：
特征性鉴别
• 紫外吸收特性：Amax=246nm • 与生物碱沉淀试剂反应 含量测定 • 氯化物特性：
氯化物检查
原理
• 特征性鉴别——硫色素反应
维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素， 色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现 于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物 分析》第六版，P258）
0.236
0.336
0.436
4 0.05000 0.536
0.7 0.6 0.5 0.4 A246 0.3 0.2 0.1
0 0
y = 8x + 0.136 R2 = 1
0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 C(mg/ml)
5 0.06250 0.636
精密度试验
• 含量测定
维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，
E1% 1cm

421
实验方法
1. 鉴别反应
取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解， 加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇 2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的 蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱 使成碱性，则荧光复现。
•要求
•至少5份系列浓度的对照品溶液，高、低浓度之间要
有明显差距，最好能有一定的比例关系。
•线性相关系数符合规定，如UV-Vis法，r > 0.99；
HPLC法，r > 0.999
•列出回归方程、相关系数和线性图
序号
浓度 （mg/ml）
测定值
线性关系考察(示例）
1
2
3
0.01250
0.02500
0.03750
2. 含量测定
如何计算出所需要的量？
精密称取片粉适量，相当于维生素B125mg，置
100ml量瓶中 → 加盐酸溶液（9→1000）约70ml，
摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇
稀释倍数？
匀 →干燥滤纸过滤→精密量取续滤液1.0ml，置
25ml量瓶中，共2份，盐酸溶液（9→1000）定容
样回收率试验
•含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。
分析方法的验证
1 线性关系和范围 2 精密度试验 3 重现性试验 4 加样回收试验 5 稳定性试验
线性与范围
•目的
•范围：达到一定精密度、准确度和线性、测定方法适
用的高低限浓度或量的区间
•线性：测试结果与试样中被测物的浓度或量直接呈正
比关系的程度
•目的
•检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可
信程度
•要求
•用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶
液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要
在线性范围内
• RSD < 2.0%
……仪器分析
精密度试验（示例 ）
实验 序号
1 2 3 4 5 6
信号值
0.512 0.508 0.511 0.509 0.510 0.509
至刻度，摇匀 → 测 A246， 用吸光系数计算浓度。
实验内容与要求
•鉴别试验
•吸收波长选择
•精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算
RSD%
如何引用？
•重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光
度）计算标示量%，计算RSD%
•稳定性试验：考察样品溶液1h内的稳定性，计算
RSD%
•加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加
平均值
RSD
0.510
0.2% (<2.0%)
重现性试验
•目的
•考察样品溶液制备方法的可靠程度
•要求
•同批样品按相同方法制备样品溶液，至
少6份,浓度与信号值均要在线性范围内
•RSD < 2.0%
……仪器分析
重现性试验(示例)
试验 序号
1 2 3 4 5 6
称样量 （g）
0.5000
测定值 含量 平均含量 RSD （mg） （mg/g） （ mg/g ） （%）