胰酪大豆胨琼脂培养基比对研究

2024年3月第14卷第5期
·药物研究·
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通讯作者
胰酪大豆胨琼脂培养基比对研究
梁　谋 庞逸辉 刘　欢 王　霞 宣　泽 江志杰▲北京市药品检验研究院　国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室
中药成分分析与生物评价北京市重点实验室,北京　102206
[摘要]目的 研究5个不同品牌胰酪大豆胨琼脂培养基产品信息标识差异，分析适用性检查结果，为提高检验检测效率，规范培养基生产和管理提供研究依据。

方法 比对5个不同品牌，各3个批号的胰酪大豆胨琼脂培养基内外包装信息标识和自检项目，并按照《中华人民共和国药典》2020版四部和《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》（GB 4789.28-2013），对培养基适用性进行研究分析。

结果 5个品牌胰酪大豆胨琼脂培养基内外包装标识信息存在较大差异，自检报告使用的检验依据和具体检测项目以及适用性判定标准都不相同，5个品牌胰酪大豆胨琼脂培养基适用性检查结果均符合相关标准要求，但相同品牌不同批号间的检查结果均一性存在差异。

结论 培养基质量控制标准有待规范和完善，有利于培养基生产和使用。

[关键词]胰酪大豆胨琼脂培养基；质量控制；适用性试验；比对研究
[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2024）05-0073-04DOI:10.20116/j.issn2095-0616.2024.05.16
Comparative study on the tryptose soya agar
LIANG　Mou PANG　Yihui LIU　Huan WANG　Xia XUAN　Ze JIANG　Zhijie
Beijing Institute for Drug Control, NMPA Key Laboratory for Quality Evaluation of Traditional Chinese Medicine (Traditional Chinese Patent Medicine), Beijing Key Laboratory of Analysis and Evaluation on Chinese Medicine, Beijing 102206, China
[Abstract] Objective To study the differences in product information labeling among 5 different brands of tryptose soya agar, analyze the suitability test results, and provide a research basis for improving inspection and detection efficiency, and standardizing culture media production and management. Methods The exterior and interior packaging information labeling and self-inspection items of tryptose soya agar of 5 different brands and 3 batches were compared, and research and analysis were conducted on the suitability of the culture media following the Volume Ⅳof Pharmacopoeia of the People’s Republic of China (2020 Edition), and the National Food Safety Standard-Food Microbiological Examination-Quality Requirements of Culture Media and Reagents (GB 4789.28-2013). Results There were significant differences in the labeling information of the exterior and interior packaging of the 5 brands of tryptose soya agar. The inspection basis, specific testing items, and suitability judgment standards used in the self-inspection report were different. The suitability test results of the 5 brands of tryptose soya agar met the relevant standard requirements, but there were differences in the uniformity of the test results between different batches of the same brand. Conclusion The quality control standards for culture media need to be standardized and improved, which is beneficial for the production and use of culture media.[Key words] Tryptose soya agar; Quality control; Suitability test; Comparative study
培养基是微生物试验的基础，其质量优劣直接影响微生物试验结果的准确性和可靠性[1]。

《中华人民共和国药典》2020版四部中，《药品微生物实验室质量管理指导原则》明确要求对商品化培养基建立接收标准并进行符合性验收，验收内容包括产品名称、批号、数量、生产单位、外观性状等[2]。

《药品生产质量管理规范（2010年修订）》第二百二十六条，要求对培养基进行质量控制与保证[3]。

《食品安
全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量
要求》（GB 4789.28-2013）[4]
明确了培养基性能测
试的方法和判定标准。

培养基的质量管理和控制是相关行业和法规重点关注的内容。

1　材料与方法1.1　仪器和耗材
LRH-250生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；Ⅱ级A2型生物安全柜（赛默飞世尔苏州仪器有限公司）；一次性接种环1 μl（JET，批号：
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20190905）；一次性L 型涂布棒（Fisher brand，批号：180301230）。

1.2　培养基
培养基比对研究使用的胰酪大豆胨琼脂培养基（以下简称培养基）分别为5家国内培养基生产商，分别用A（批号Ⅰ：20201105；批号Ⅱ：20210111；批号Ⅲ：20210215），B（批号Ⅰ：20201130；批号Ⅱ：20210106；批号Ⅲ：20210107），C（批号Ⅰ：20201109；批号Ⅱ：20201202；批号Ⅲ：20201107），D（批号Ⅰ：K2173Y；批号Ⅱ：L0072Y；批号Ⅲ：L0118Y），E（批号Ⅰ：210110-4；批号Ⅱ：201216-5；批号Ⅲ：201118-1）代表。

1.3　试验菌株
金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、铜绿假单胞菌CMCC（B）10104、枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501、黑曲霉CMCC（F）98003、白色念珠菌CMCC （F）98001、大肠埃希氏菌ATCC29212和粪肠球菌ATCC25922。

1.4　试验方法
对5个品牌培养基的内外包装和产品标识信息进行比对分析，并根据《中华人民共和国药典》2020版四部通则1105培养基适用性检查方法[2]和《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的
质量要求》（GB 4789.28-2013）[4]
商品化培养基质
量控制测试方法对每个品牌各3个批号的培养基进行分析。

2　结果
2.1　培养基包装标识差异
5个品牌培养基内外包装标识信息存在以下差异：培养基产品规格标示的单位不同；5个品牌标示的警示信息和备注信息的内容侧重点不同；3个品牌有效期对应生产日期缩减1 d，2个品牌有效期对应生产日期没有缩减天数。

见表1。

2.2　培养基厂检报告差异
5个品牌培养基自检报告使用的检验依据和具体检测项目以及适用性判定标准都不相同。

见表2。

2.3　培养基适用性检查
根据《中华人民共和国药典》2020版四部通则1105，对5个品牌培养基进行比对测试，培养基适用性检查结果，均符合要求，菌落平均数的比值在0.6～1.4。

见表3。

根据《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》（GB 4789.28-2013）对5个品牌培养基性能进行比对测试。

5个品牌培养基均符合标准要求，G 值结果在7.1～14.5。

见表4。

表1 培养基产品包装标识比对结果
项目A B C D E 产品规格-9 cm -90 mm 90 mm 包装规格10皿/包10块/包10块/包10块/包10块/包包装形式三层真空无菌包装三层真空无菌包装
三层真空无菌包装
三层无菌包装三层真空包装储存条件2～25℃，避光2～25℃2～25℃2～25℃2～25℃有效期标识有效期对应
生产日期缩减1 d 有效期对应生产日期没有缩减天数
有效期对应生产日期缩减1 d 有效期对应生产日期
缩减1 d 有效期对应生产日期没有缩减天数警示信息如发现涨袋，请勿使用无警示信息如发现涨袋，请勿带入洁净区请尽量选择接近使用环境的温度存放包装破损严禁使用备注信息
本品参照GB 标准
γ射线辐照灭菌；符合EP/USP/Chp/GB
标准
伽马射线照射灭菌
A 级灌装，辐照灭菌；干燥剂除湿；30 ml 装置，
可以长时间暴露
通过ISO9001、ISO13485质量体系认证及CE 认证
注　“-”代表无数据
表2 培养基产品自检项目比对结果
项目A B
C D
E 出厂检验依据μ无出厂检验依据CP
Q/HKSJ03，CP/USP/EP CP
理化指标检验项目外观、强度
pH 值、澄清度、装量、
培养基颜色
外观、pH 值、无菌性
pH 值、平板厚度、无菌及持水性
外观、颜色、厚度、软硬度、无菌性
适用性测试使用菌株
大肠埃希氏菌（CMCC）、金黄色葡萄球菌（CMCC）、铜绿假单胞菌（CMCC）、枯草芽孢杆菌（CMCC）、白色念珠菌（CMCC）、黑曲霉（CMCC）大肠埃希氏菌（CMCC）、金黄色葡萄球菌（CMCC）、铜绿假单胞菌（CMCC）、枯草芽孢杆菌（CMCC）、白色念珠菌（CMCC）、黑曲霉（CMCC）、乙型副伤寒沙门菌（CMCC）大肠埃希氏菌（CMCC）、金黄色葡萄球菌（CMCC）、铜绿假单胞菌（CMCC）、枯草芽孢杆菌（CMCC）、白色念珠菌（CMCC）、黑曲霉（CMCC）大肠埃希氏菌（ATCC）、金黄色葡萄球菌（ATCC）、铜绿假单胞菌（ATCC）、枯草芽孢杆菌（ATCC）、白色念珠菌（ATCC）、黑曲霉（ATCC）
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉适用性测试判定标准菌落回收率≥70%
菌落回收率≥70%
菌落回收率
0.7～2.0
菌落回收率0.5～2.0
菌落回收率0.5～2.0
2024年3月第14卷第5期·药物研究·表3 培养基适用性检查结果
品牌代号批号
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的
菌落平均数的比值（0.5～2.0）
金黄色
葡萄球菌
铜绿假
单胞菌
枯草芽
孢杆菌
黑曲霉
白色
念珠菌
A批号Ⅰ0.8 1.0 1.0 1.0 1.0批号Ⅱ 1.2 1.4 1.10.9 1.0
批号Ⅲ0.8 1.00.80.80.9 B批号Ⅰ 1.2 1.20.9 1.00.9批号Ⅱ0.9 1.20.8 1.00.8
批号Ⅲ 1.1 1.0 1.2 1.0 1.0 C批号Ⅰ0.9 1.0 1.3 1.0 1.0批号Ⅱ0.90.70.80.80.8
批号Ⅲ 1.1 1.0 1.4 1.0 1.0 D批号Ⅰ0.9 1.40.9 1.1 1.2批号Ⅱ0.8 1.20.8 1.30.8
批号Ⅲ0.6 1.2 1.20.8 1.2 E批号Ⅰ 1.10.70.8 1.1 1.2批号Ⅱ0.8 1.00.8 1.2 1.1
批号Ⅲ 1.10.7 1.1 1.0 1.2
表4 培养基适用性检查结果
品牌代号批号
生长指数（G≥6）
大肠埃希氏菌粪肠球菌
A批号Ⅰ11.911.0
批号Ⅱ12.710.8
批号Ⅲ9.18.5
B批号Ⅰ8.89.8
批号Ⅱ10.39.7
批号Ⅲ7.411.7
C批号Ⅰ7.010.1
批号Ⅱ9.313.6
批号Ⅲ7.414.5
D批号Ⅰ7.412.6
批号Ⅱ7.110.6
批号Ⅲ7.713.4
E批号Ⅰ8.48.3
批号Ⅱ8.713.1
批号Ⅲ10.710.9
3　讨论
3.1　培养基质量管理规范化的必要性
目前，我国培养基质量控制标准多为行业标准，缺乏系统全面的国家标准。

药品检验和食品生产检测培养基使用验收有相应标准。

此外，还有卫生行业标准和进出口行业标准等[5-7]。

现行培养基质量控制标准存在培养基应用领域不明确，适用性待提高，质量控制依据不完备等问题。

3.2　培养基比对研究发现的主要差异
首先，培养基包装及其信息标识存在差异。

关于有效期标识，有效期对应生产日期应该缩减天数。

包装警示信息方面，除了标示一般警示信息外，不同用途培养基应当有针对性的警示内容。

再次质量控制标准差异较大。

有1个品牌没有注明出厂检验依据，给培养基的使用带来一定困惑。

pH值是微生物生长繁殖重要的环境指标之一，一般来说，细菌适合pH值在7.0～7.5[8]，在比对中发现，有2个品牌没有进行pH值检测。

适用性测试方面，品牌B的出厂检验报告，没有写明菌落回收率的具体测试数值，只写明结果范围，其余4个品牌菌落回收率都有明确数值。

通过研究发现，5个品牌培养基适用性测试，都符合相关标准要求，但相同品牌不同批号之间均一性存在差异。

3.3　培养基质量管理的意见和建议
培养基使用前的验收很有必要，使用者应该认真执行培养基验收制度，建立适合自身应用领域培养基验收工作文件[9-12]，特别是在更换培养基供应商时，应最大限度保证培养基质量的一致性[13]。

应当建立培养基通用质量标准，适用于不同微生物检测领域的培养基质量基本要求[14-16]，培养基生产商应该加强培养基质量管理和控制，对质量控制标准予以明确和完善，从而更加符合现行行业标准。

综上所述，目前市场上使用的培养基的包装标识和质控标准存在较大差异，不利于培养基后期的管理和使用，应当进行改进和完善。

因条件限制只对市场上5家培养基厂商进行比较，此外，因实际检验能力的原因未对5种品牌培养基的pH值、硬度、水分流失、厚度等参数做定量分析，因此研究结果存在一定局限性，有待后续研究进行深入分析与研讨。

[参考文献]
[1] 谢文，赵宏大，范文平.药品检验用营养琼脂培养基
的质量评价[J].中国药房，2014，25（1）：57-60. [2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].2020
版.北京：中国医药科技出版社，2020：160-162. [3] 中华人民共和国卫生部.药品生产质量管理规范（2010
年修订）[EB/OL].（2011-01-17）[2022-06-16].https://www.
/xxgk/fgwj/bmgzh/20110117120001434.html. [4] 国家卫生和计划生育委员会.GB 4789.28-2013，食品
安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求[S].北京：中国标准出版社，2013：17-18.
（下转第80页）
2024年3月第14卷第5期
·医药教育·
47（5）：1144-1152.
[11] 马新飞，宿树兰，申俊龙，等.中药资源与开发
专业本科人才培养体系构建的思考[J].药学教育，2015，31（6）：1-5.
[12] 魏胜利，王文全，刘勇，等.简论中药资源专业人
才培养与中药资源产业发展趋势的对接[J].中国现代中药，2014，16（11）：877-880.
[13] 中国中医药网.2019年贵州中药材产业的“十大关
键词”[EB/OL].（2023-08-01）.https:///2020-01/20/content_33495798.htm.
[14] 山东省人民政府.山东省“十四五”中医药发展规
划[EB/OL].（2021-09-06）[2023-07-01]./art/2021/9/6/art_307620_10330534.html.[15] 山东省卫生健康委员会.关于印发《山东省中医药
产业发展规划（2022-2025年）》的通知[EB/OL].（2021-11-30）[2023-07-01]./zwgk/zcwj_x/wfqt/202112/t20211227_4206551.html.[16] 邓亚利，刘金金，林芳花.农业院校与中医院校“中
药资源与开发”专业培养模式的比较研究[J].惠州学院学报，2021，41（3）：109-113.
[17] 汪丽波，李孟珂.中药资源与开发专业建设与人才
培养的思考——以普洱学院为例[J].普洱学院学报，2022，38（3）：118-121.
[18] 吴清华，裴瑾，万德光，等.构建以“学生为主体”
的中药资源与开发专业立体化实践教学体系的思考[J].中药与临床，2021，12（6）：62-66.
[19] 王艳芳，杨世海，王义，等.农业院校中药资源
与开发专业人才培养体系创新[J].科技创新导报，2017，14（33）：208-210.
[20] 韦妍妍，冯娴婧，焦杨，等.“双导师制”在中
药资源与开发专业创新创业教育教学改革中的探索[J].创新创业理论研究与实践，2021，4（9）：47-49.
[21] 范国敏，王彩红，蒋蓉.对应用型本科院校一流专
业课程建设的思考[J].科学咨询（科技·管理），2021（6）：28-29.
[22] 牛颜冰，王向英，乔永刚，等.具有山西中药资源
特色的生物科学专业建设的思考与实践[J].轻工科技，2015，31（5）：165-167.
（收稿日期：2023-08-25）
（上接第75页）
[5] 中华人民共和国卫生部.WS/T232-2002，商业性微生
物培养基质量管理检验规程[S].北京：中国标准出版社，2002：1-2.
[6] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.SN/
T1538.1-2016，中华人民共和国出入境检验检疫行业标准，培养基制备指南.第1部分：实验室培养基制备质量保证通则[S].北京：中国标准出版社，2016：1-3.
[7] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.SN/
T1538.2-2016，中华人民共和国出入境检验检疫行业标准，培养基制备指南.第2部分：培养基性能测试实用指南[S].北京：中国标准出版社，2016：1-3.[8] 李勤，余彩霞，邓林.微生物培养基的设计优化探讨[J].
轻工科技，2020，36（4）：5-6.
[9] 解慧，路立京，曹晓云.市售《中国药典》2015年版
非无菌产品微生物限度检查用培养基质量评价[J].天津药学，2016，28（5）：18-22.
[10] 马群飞.GB4789.28-2013《食品安全国家标准食
品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》应用现状[J].中国卫生标准管理，2019，10（16）：1-3.[11] 解伟嘉.微生物检验中不同领域培养基质量控制及
管理[J].中国医药指南，2019，17（14）：297-298.[12] 孙良广，黄文靖.微生物检验中不同领域培养基质量
控制及管理[J].轻工科技，2018，34（3）：94-95.[13] 戴宇婷，赵晓星，张金玺.药品检验用计数培养
基配制、灭菌及贮藏研究[J].中国卫生标准管理，2020，11（1）：94-97.
[14] 曹风娥，赵丹.微生物检验培养基质量控制方法研
究[J].医技与临床，2022，26（7）：118-120，150.[15] 杨淑宏，聂春丽.关于食品微生物检验中培养基
的质量控制分析[J].现代食品，2020（15）：188-189，204.
[16] 邵明娟.食品微生物检验培养基质量控制路径探
析[J].食品安全导刊，2023（7）：56-58.
（收稿日期：2023-07-20）。