苯酚硫酸法测定补肾口服液中多糖含量

苯酚硫酸法测定补肾口服液中多糖含量
汤韶明;刘玲;陶松;侯雄军
【摘要】目的建立补肾口服液中多糖的含量测定方法.方法采用苯酚-硫酸法测定补肾口服液中多糖含量.结果本次试验补肾口服液中多糖含量测定结果为
9.0139mg/ml.结论苯酚硫酸法测定多糖含量,结果准确且重现性好,可控制补肾口
服液的质量.
【期刊名称】《江西医药》
【年(卷),期】2012(047)010
【总页数】3页(P925-927)
【关键词】苯酚-硫酸法;补肾口服液;多糖
【作者】汤韶明;刘玲;陶松;侯雄军
【作者单位】330006南昌,江西省人民医院药剂科;330006南昌,江西省人民医院
药剂科;330200南昌,江西省南昌县人民医院药剂科;330006南昌,江西省人民医院
药剂科
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
多糖(polysaccharides，PS)又称多聚糖，由 10 个以上的单糖分子通过苷键聚合
而成，是一类大分子化合物。

多糖是中药活性成分之一，在生物体内作为能量物质，存在于一切细胞膜结构中，参与细胞的各种生理活动[1]。

多糖作为重要的生物活
性物质具有调节免疫、抗肿瘤、降低糖脂、延缓衰老等活性，在医疗保健、食品、动物养殖等领域有着广阔的应用前景[2]。

补肾口服液是由补益名方“五子衍宗方”[3]加淫羊藿、韭菜子、桑葚子而组成的经验方，该方由枸杞子、菟丝子、五味子、车前子、覆盆子及淫羊藿等8味中药
组成，其中枸杞子、菟丝子为方中君药，主要活性成分为枸杞多糖、菟丝子多糖，为加强该制剂的质量控制，本研究采用苯酚-硫酸法测定补肾口服液中多糖含量[4-6]，该方法简便，且重复性和稳定性好，可操作性强。

现报告如下。

1 仪器与试药
UV-1206紫外分光光度计 (日本岛津公司)；TDE5-WS多管架自动平衡离心机 (长沙湘仪离心机仪器有限公司)；岛津AUW220十万分之一电子天平；AB104－N
型万分之一天平(梅特勒－托利多)；KDM型调温电热套 (山东鄄城华鲁电热仪器有限公司)；所用玻璃仪器均为天玻牌A级。

补肾口服液(批号：20120721，20120725，20120728，自制)；无水乙醇、苯酚、硫酸(均为分析纯)；D-无水葡萄糖对照品 (批号：110833-200503，含量测定用，中国药品生物制品检定所)；10ml具塞试管。

2 方法与结果
2.1 制备对照品溶液精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标品8.35mg置于
100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含葡萄糖标品
0.0835mg的标准工作溶液。

2.2 制备供试品溶液精密吸取样品溶液1ml，加无水乙醇4ml，离心
(4000r/min)10min，弃去上清液，沉淀用80%乙醇溶液洗涤2-3次，每次8ml，离心10min，弃去洗液，残渣用沸水提取5次，每次5ml，合并提取液至50ml
容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即得。

2.3 选择测定波长精密吸取0.8ml葡萄糖对照品溶液(0.0835mg/ml)于10ml具
塞试管中，分别加水补至2.0ml，再分别加入6%苯酚1.0ml，摇匀，再迅速沿壁
滴加浓硫酸5.0 ml，摇匀，沸水浴中加热15min，取出，迅速冷却至室温(冰水浴中)。

以试剂为空白，进行比色测定，在400-800nm范围内扫描，结果在490nm 处有最大吸收。

本试验以490nm作为测定波长。

2.4 绘制标准曲线精密吸取标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5ml，置
于 10ml具塞试管中，分别加水补至2.0ml，再分别加入6%苯酚1.0ml，摇匀，
再迅速沿壁滴加浓硫酸5.0 ml，摇匀，沸水浴中加热15min，取出，迅速冷却至
室温(冰水浴中)。

以试剂为空白，于490nm波长处测吸光度A，以葡萄糖溶液浓
度(mg/ml)为横坐标，吸收度A为纵坐标，绘制标准曲线，求得标准曲线的回归
方程为A=55.041X+0.0251，相关系数r=0.9999；结果表明，葡萄糖在0.0021-0.0157mg/ml范围内与吸收度具有良好的线性关系，结果见表1。

2.5 精密度试验按“2.2”项下方法，制备补肾口服液供试品溶液1份，参照标准
曲线绘制项下的方法进行测定，连续测定6次，记录其吸光度值，结果平均吸光
度为0.274，RSD=0.33%，表明仪器精密度良好。

表1 线性范围考察结果序号标准溶液浓度(mg/ml) A1 A2 平均A值1234560.00210.00420.00630.00840.01040.01570.1370.2540.3780.4860.599 0.8880.1390.2530.380.4850.6010.8860.1380.2540.3790.4850.6000.887
2.6 显色稳定性试验精密吸取供试品溶液0.2ml，置于10ml具塞试管中，分别加水补至2.0ml，再分别加入6%苯酚1.0ml，摇匀，再迅速沿壁滴加浓硫酸5.0 ml，摇匀，沸水浴中加热15min，取出，迅速冷却至室温(冰水浴中)。

另以2.0 ml蒸
馏水作为空白对照同上平行操作，每隔5min于490nm波长处测定吸光度值，连续测定30min考察显色稳定性，结果表明样品在30min内吸光度基本不变，RSD 为1.13%，显色稳定性良好。

2.7 重复性试验取同一批号样品，按“2.2”项下制备供试品溶液6份，参照标准
曲线绘制项下的方法测定吸光度，平均值为9.0139 mg/ml，RSD=1.98%，表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率考察精密移取已知多糖含量(9.0139mg/ml)成品溶液1ml各6份，按样品含量与加入对照品含量 (1:1)的比例加入葡萄糖对照品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按标准曲线的测定条件测定吸光度，计算加样回收率，见表2。

表2 补肾口服液中多糖加样回收率(n=6)编号样品中多糖含量(mg)葡萄糖对照品
加入量(mg)多糖测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%)
RSD(%)1234569.01399.01399.01399.01399.01399.01399.009.009.009.009.0 09.0018.010318.085918.209218.108417.982417.820499.96100.8102.17101. 0599.6597.85100.25 1.47
2.9 样品含量测定分别取3批补肾口服液样品(批号：20120721、20120725、20120728)，“2.2 ”项下方法制备供试品溶液，按标准曲线的绘制项下方法测定其吸光度值，并带入回归方程中计算多糖的含量，结果补肾口服液中总多糖平均含量为9.0139 mg/ml，RSD=1.15%，见表 3。

3 讨论
本研究采用苯酚-硫酸显色法，以葡萄糖计测定了补肾口服液中多糖含量。

其原理
是根据多糖及其衍生物在浓硫酸水合产生的高温下迅速水解，生成单糖；单糖在强酸条件下与苯酚反应生成橙黄色衍生物，在490nm波长处有特征吸收峰，且其它成分无干扰，由此可通过比色法测定其含量，结果表明，葡萄糖质量浓度在
0.0021-0.0157mg/ml范围内与吸光度呈现良好的线性关系，平均回收率为100.25%，RSD为1.47%，实验条件易控制，操作简单，重复性好，可作为测定
多糖类化合物的常用方法，为建立补肾口服液的质量标准提供了理论依据。

表3 总多糖含量测定结果(n=6)?
参考文献
【相关文献】
[1]王彦军.中药多糖研究进展.医学理论与实践，2009，22(3):279.
[2]刘洁，李文香，王文亮，等.生物多糖研究进展.山东农业科学，2011，5:98.
[3]张泰，窦桂芳，王学美，等.RP-HPLC法同时测定加味五子衍宗方汤剂3种活性成分的含量.药
物分析杂志，2011，31(1):22.
[4]王宏洁，李鹏跃，刘婷，等.苯酚-硫酸法测定清开灵注射液中总多糖的含量.中国实验方剂学杂志，2009，15(11)：3.
[5]魏慧珍，饶毅，邱伟华，等.六味地黄方不同剂型中多糖含量的比较研究.时珍国医国药，2010，21(11)︰2759.
[6]夏永刚，梁军，杨炳友，等.苯酚-硫酸法测定麻黄多糖含量研究.中医药信息，2011，28(1)：33.。