香附总黄酮的提取技术分析

香附总黄酮的提取技术分析
作者：徐猛潘福东
来源：《中国科技博览》2013年第24期
论文摘要：目的优选香附总黄酮的提取工艺。

方法以乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数为考察因素，以总黄酮含量为测定指标，采用正交试验优化香附总黄酮的最佳提取工艺。

结果香附总黄酮的最佳提取工艺为乙醇体积分数70%、料液比1∶15、提取时间45 min、提取次数为2次。

结论该提取工艺稳定，适合香附总黄酮的提取。

主题词：香附总黄酮提取
中图分类号：TL212
香附为莎草科多年生草本莎草（Cyperus rotundus L.）的干燥根茎，性辛、微苦、微甘、平，归肝、三焦经，具有疏肝理气、调经止痛的功效。

香附主要含有挥发油、黄酮类化合物、三萜类化合物、甾醇类、生物碱、糖类、酚类等化学成分。

现有研究已证明黄酮类化合物在治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病等方面有显著效果，还具有抑菌、抗癌等作用，且无副作用，已开发出许多种药品和保健食品。

已有的文献资料未见有关香附黄酮类物质提取工艺的研究报道，故本试验对香附总黄酮的提取工艺以及含量进行初步研究，为香附总黄酮的进一步研究开发提供资料。

一、仪器与试药
1、仪器
Agilent8453E型紫外-可见分光光度计（美国安捷伦公司）；BP211D电子分析天平（德国Sartorius）；KQ-500超声仪（昆明市超声仪器有限公司，功率500 W，频率40 kHZ）；层析柱（2.5 cm×14 cm）。

2、试药
香附药材购自安徽亳州药材市场，经湖北医药学院附属人民医院药学部雷龙副教授鉴定为莎草科植物（Cyperus rotundus L.）的干燥根茎；芦丁对照品（批号：10080-200306）购自中国药品生物制品检定所；聚酰胺（30～60目，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；二、方法与结果
1、供试品溶液的制备
取香附粉末（过2号筛）3.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚（60～90 ℃）50 mL，超声提取30 min，弃去石油醚液，待样品中残留的石油醚全部挥去后，按实验要求加入
不同体积乙醇（不同体积分数）超声提取不同时间、次数，放凉后滤过，滤液置80 ℃水浴锅上浓缩至适量。

称取聚酰胺3 g，以样品溶液拌样后置80 ℃水浴锅上加热至无醇味，装入层析柱中。

用蒸馏水100 mL、20%（体积分数）乙醇50 mL、60%（体积分数）乙醇300 mL依次进行洗脱，收集60%（体积分数）乙醇洗脱液，置水浴锅上浓缩，用60%（体积分数）乙醇定容至25 mL，即得。

2、对照品溶液的制备
精密称取已干燥至恒重的芦丁对照品20.08 mg，置10 mL容量瓶中，加60%（体积分数）乙醇溶解至刻度，摇匀，即得。

3、测定波长的选择
取供试品溶液和对照品溶液各1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入5%（质量浓度）NaNO2 溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min，再加入10%（质量浓度）Al（NO3）3溶液0.3 mL，摇匀，再放置6 min，加入4%（质量浓度）NaOH溶液4 mL，加60%（体积分数）乙醇定容到10 mL，放置15 min，即得。

用紫外分光光度计进行扫描，结果两者在499.9 nm处均有最大吸收，故选择500 nm作为测定波长。

4、线性关系考察
分别精密量取芦丁对照品溶液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL置25 mL容量瓶中，按照“3、”项下自“加入5%（质量浓度）NaNO2 溶液0.3 mL ”起进行操作，于500 nm处测定其吸光度。

以吸光度（A）为纵坐标，芦丁质量浓度（ρ）为横坐标进行线性回归，得回归方程为
A=27.455ρ+0.018 7，r=0999 0。

结果表明芦丁对照品的质量浓度在0.040 16～0401 6 mg·mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系。

5、单因素考察
以乙醇体积分数、料液比、提取时间为考察因素，考察其对总黄酮提取率的影响。

结果见图1。

[PSa6381〗A.乙醇体积分数；B.料液比；C.提取时间图13个因素对总黄酮提取率的影响Figure 1The effect on the extraction yield of 3 factors由图1可知，乙醇体积分数在80%时香附总黄酮提取率最高，当乙醇体积分数继续提高，总黄酮提取率反而下降；总黄酮提取率随着料液比的增大而升高，当料液比为1∶15时达到最大值；提取时间为40 min时总黄酮提取率最高。

6、正交试验
在单因素考察的基础上，选择乙醇体积分数（A）、料液比（B）、提取时间（C）、提取次数（D） 4个因素为考察因素，以总黄酮提取率为指标，采用L9（34）正交试验表安排试验，确定香附总黄酮的最佳提取工艺。

结果见表1-3。

由表2、3可知，各个因素对香附总黄酮
提取率影响程度从大到小依次为：乙醇体积分数>提取次数>提取时间>料液比，4个因素对提取率的影响均无统计学意义。

结合实际生产的需要，选择最佳提取工艺条件为A1B2C2D2，即乙醇体积分数70%，料液比为1∶15，提取时间为45 min，提取2次。

表1因素水平表表2正交试验结果与直观分析表3正交试验方差分析表
7、验证试验
分别取3份同一产地香附粉末，精密称定，按上述确定的最佳工艺进行提取，测定总黄酮提取率。

结果表明，3份香附总黄酮平均提取率为 0.352 15%，RSD=2.11%，表明该提取工艺合理、稳定。

三、讨论
1、在试验中尝试把样品用石油醚脱脂后直接将醇提液进行显色后再扫描，结果提取液在500 nm处并无最大吸收，可能是其他成分对黄酮测定干扰较大所致。

而用聚酰胺富集纯化香附总黄酮类物质后其乙醇洗脱液经扫描，最大吸收波长为500 nm，与芦丁显色后的最大吸收波长一致。

2、在考察聚酰胺柱洗脱溶剂时，采用了水、体积分数分别为20%、40%、60%、70%、80%的乙醇液进行洗脱，测定各洗脱液中总黄酮含量。

结果表明用60%（体积分数）乙醇洗脱时总黄酮含量最高，体积分数为70%和80%乙醇的洗脱液中几乎检测不到总黄酮，故选择的洗脱程序为：先用100 mL 水洗去无机盐离子，再用20%（体积分数）乙醇50 mL洗去酚类成分，最后用60%（体积分数）乙醇300 mL进行洗脱，收集60%（体积分数）乙醇洗脱液。

3、正交试验结果提示，本次试验所考察各因素对提取率的影响均无统计学意义，推测与各因素选择范围过窄有关。

可否进一步降低乙醇体积分数或（和）延长提取时间，以使香附总黄酮被最大限度地提取出来，尚需继续开展实验研究，从而保证最终确定的提取工艺的实用性和科学性。

参考文献
1、曹玫，张洪，正交试验法优化香附总黄酮提取工艺，论文网，2011，07
2、谢明杰，宋明，邹翠霞，等.超声波提取大豆异黄酮[J].大豆科学，2004，23（1）：27
.3、黄险峰，彭国平.香附化学成分及药理研究进展[J].中药材，2003，26（1）：65.。