液相色谱-质谱联用测定血中氟乙酸类鼠药

液相色谱-质谱联用测定血中氟乙酸类鼠药
陈学国;朱昱;张婷;许英健
【摘要】目的建立血中氟乙酸类鼠药液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析方法.方法血样经甲醇沉淀蛋白后离心,上清液用氮气吹干,流动相定容过滤膜,滤液直接进行液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用分析.结果血中氟乙酸根在0.050 μg/mL～2.0 μg /mL之间具有良好的线性关系,最低检出限为0.020 μg/mL.结论本文建立的方法快速、灵敏、操作简便,适用于刑事案件中该类氟乙酸类鼠药的快速检验,具有一定的实用价值.
【期刊名称】《刑事技术》
【年(卷),期】2010(000)006
【总页数】3页(P22-24)
【关键词】法医毒物分析;氟乙酸根;液相色谱-质谱;血;鼠药
【作者】陈学国;朱昱;张婷;许英健
【作者单位】中国刑警学院法医系,辽宁,沈阳,110854;中国刑警学院法医系,辽宁,沈阳,110854;中国刑警学院法医系,辽宁,沈阳,110854;中国刑警学院法医系,辽宁,沈阳,110854
【正文语种】中文
【中图分类】DF795.4
氟乙酸类鼠药是一类剧毒杀鼠剂,主要包括氟乙酸钠、氟乙酸和氟乙酰胺3种,其毒
性、中毒症状与毒鼠强相当,而且容易引起二次中毒,该类鼠药所造成的投毒、中毒案件时有发生,并给人民生命财产造成巨大危害[1]。

因此,氟乙酸类鼠药已经成为刑事中毒案件中最常见的毒物之一。

随着分析科学相关技术的快速发展,氟乙酸类鼠药分析检测方法也在不断的更新,除了化学显色法[1]、薄层色谱法(TLC)[1]等传统方法外,气相色谱法(GC)[2]、气相色谱-质谱联用法(GC/MS)[3]、离子色谱法[4]、液相色谱法(LC)[5]、液相色谱-质谱联用(LC/MS)[6]、毛细管电泳法(CE)[7]、核磁共振法[8]等也已经被用于该类鼠药的分析与检测。

但是,由于氟乙酸类鼠药进入生物体内后,很快代谢产生氟乙酸根阴离子(FCH2-COO-),所以生物检材中该类鼠药的分析主要是氟乙酸根负离子的测定。

本文结合液相色谱分离效果好与质谱检测灵敏度高等特点,建立了血中氟乙酸根液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析方法。

实验结果表明,该方法快速、灵敏、实用、可靠,适用于该类鼠药的快速检验,具有一定的实用价值,介绍如下。

1 实验部分
1.1 试剂
甲醇(一级色谱纯,天津市四友生物医学技术有限公司);氨水(分析纯,沈阳无机化工厂试剂分厂);氟乙酸钠标准品(含量大于98%,公安部物证鉴定中心);去离子水。

氟乙酸根标准溶液(0.10 mg/m L)的配制：准确称取1.0 mg氟乙酸钠标准品于10 m L容量瓶中,少量甲醇溶解后,用甲醇定容至刻度。

1.2 仪器
Finnigan Surveyo r液相色谱仪,配有电喷雾离子源,LXQ线性离子阱质谱仪(美国,Thermo Fisher公司);色谱柱：Thermo Gold ODS(150 mm×2.1
mm,5μm);80-2型离心机(上海手术机械厂);XW-80A微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器有限公司)。

1.3 实验条件
色谱条件：柱温,30℃;流动相,甲醇-0.1%氨水水溶液(80∶20,v/v);流速,0.20 m
L/m in;进样体积,10μL。

质谱条件：电喷雾离子化源(ESI),负离子方式检测,全离子扫描模式;毛细管温
度,250℃;毛细管电压,42 V;源电压,5.0 KV;鞘气(N2),30 arb。

1.4 实验方法
准确量取待测血样0.50 mL,加入1.50 m L甲醇稀释,涡旋混合2 min,5000 r/min
离心5 min,上清液N2吹干,加入0.50 m L流动相溶解,过0.45μm有机系滤膜,滤
液供LC/MS测定。

2 结果与讨论
2.1 质谱条件优化
根据待测组分氟乙酸根的结构特征,本文选择负离子化模式(ESI-)作为检测模式。

用蠕动泵以0.010 mL/min的流速,注射氟乙酸根标准溶液进ESI电离源,在负离子扫
描方式下进行一级质谱分析,得到分子离子峰,确定定性和定量子离子为m/z 77,然
后优化仪器参数使其响应值最大。

2.2 色谱条件优化
由于待测组分极性较大,以有机相和水为流动相时,色谱峰形差。

本文通过考察甲醇、乙腈和氨水作为流动相,优化得到氟乙酸根测定最佳色谱条件为：甲醇-0.1%氨水溶液(80∶20,v/v)。

图1所示为最佳分析条件下,按照“1.4样品处理”操作,处理后的血中氟乙酸根分析色谱图和质谱图。

2.3 线性范围与最低检出限
将分别添加0.050、0.10、0.30、0.50、1.0、1.5和2.0μg/mL 7个不同浓度氟乙酸根血样,按照“1.4”方法进行操作后进样分析,以氟乙酸根浓度对峰面积作曲线,
得到线性方程为：Y=10.12X-1.64,R2=0.9974。

由此可知,采用该定量方法检测氟
乙酸根浓度在0.050μg/mL～2.0μg/mL之间具有良好的线性关系。

以信噪比等于3为标准,测得血中氟乙酸根最低检出限为0.020μg/m L。

2.4 精密度
分别取添加0.050μg/m L、0.50μg/m L和2.0 μg/mL的氟乙酸根血样,按照1.4
项方法进行操作,每一浓度同一天内提取3次并连续提取测定3天,分别得到日内精密度为5.68%,日间精密度为6.69%。

2.5 回收率
分别取添加0.050μg/mL、0.50μg/m L和2.0 μg/m L的氟乙酸根血样,按照“1.4”方法进行操作,每一浓度提取3次,检测并计算回收率。

实验结果表明：3个浓度的
平均回收率分别为78.14%、82.45%、83.78%。

图1 优化分析条件下血中氟乙酸根分析色谱图(上)和质谱图(下)
表1 血中氟乙酸根回收率及精密度测定待测组分浓度(μg/mL)回收率(%)精密度(%)日内日间0.050 78.14氟乙酸根0.50 82.45 5.68 6.69 2.0 83.78
3 案例应用
2008年11月,某市韩某先后两次向自家果树地里投放拌有鼠药的玉米粒,造成他人饲养的五只羊中毒死亡,办案人员送来该涉嫌投毒案件的检材,要求检验果树地里提
取的玉米粒、羊胃内容物和血检材中是否含有常见鼠药成分。

按照本文建立的提取与检测方法,在送检检材中均检出氟乙酸类鼠药成分,其中血检材中氟乙酸根浓度为0.46μg/mL。

本文结合液相色谱分离效果好与质谱检测灵敏度高的特点,建立了血中氟乙酸根液
相色谱-电喷雾离子阱质谱分析方法,具有快速、灵敏等优点。

根据氟乙酸类鼠药代谢特点,本文建立的方法可以用于中毒检材中3种氟乙酸类鼠药的检测,因此,该方法能够满足司法鉴定工作的要求,具有一定的实用价值。

【相关文献】
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