乌兰十味散中大叶茜草素的含量测定

乌兰十味散中大叶茜草素的含量测定
李雨生
【摘要】目的:确定鸟兰十味散中茜草含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法.结果:回归方程为Y=4713137.1X=27194.8.线性范围为0.1600μg～
1.6000μg(r=0.9999).样品含量为0.37mg/ml.结论:方法简便、准确,重现性好,专属性强,能够有效控制乌兰十味散内在质量.
【期刊名称】《北方药学》
【年(卷),期】2010(007)002
【总页数】2页(P41-42)
【关键词】乌兰十味散;高效液相色谱含量测定;大叶茜草素
【作者】李雨生
【作者单位】内蒙古鄂尔多斯市药品检验所,东胜,017000
【正文语种】中文
【中图分类】R291.2
乌兰十味散为多年临床实践的传统蒙药验方。

由诃子、紫草茸、茜草、紫草、红花等十味药组成，主要用于治疗肺热、肺结核、肺脓肿、胸背刺痛，痰中带血和脓及各种肺病。

方中的茜草为主药，茜草主要成分为大叶茜草素（C17H15O4）。

标准制定过程中，以活性成分大叶茜草素作为测定指标，采用高效液相色谱法对处方中的茜草建立了含量测定方法，参照文献（1）方法进行实验摸索，确定了理想的色谱条件，并经过方法学考察及阴性对照实验，表明该方法操作简单，重现性好，
专属性强，方中其它组分对大叶茜草素的检出无干扰，可作为乌兰十味散含量测定方法。

1.1 仪器：岛津LC-10AT泵、岛津SPD-10A检测器、岛津CLASS-V P色谱工作站。

岛津u v-2450型紫外分光光度仪。

Sartorius BP211D型电子分析天平、Precisa 92S M-202A型电子分析天平。

1.2 试剂与试药：大叶茜草素对照品（批号110884-200604），中国药品生物制
品检定所提供；乌兰十味散供试品三批（批号分别为090115、090318、090731），由鄂尔多斯市鄂托克前旗蒙医院提供；甲醇、乙腈为色谱纯，水为高
纯水，其它试剂均为分析纯。

2.1 色谱条件
2.1.1 色谱柱：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本实验研究采用Phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）及 Kromasil ODS 柱
（250mm ×4.6mm，5μm）。

2.1.2 流动相的选择：参照文献[1]的流动相比例进行流动相条件摸索，样品具有良好的峰形，并具有合适的保留时间。

故将流动相定为甲醇－水－四氢呋喃（310:90:3）。

2.1.3 柱温：采用30℃柱温，可降低流动相粘度，降低柱压，故将柱温定为30℃。

2.1.4 检测波长的选择：取大叶茜草素对照品溶液，于紫外可见分光光度仪上，自200nm～700nm做光谱扫描，结果见图1，从图中可见，大叶茜草素在
246.6nm的波长处有最大吸收，结合文献 [1]选用250nm作为检测波长。

2.2 提取方法的选择及提取效率的考察：
文献[1]以甲醇作为提取溶剂浸泡后进行超声处理，实验中考察了浸泡8小时与浸
泡过夜后对提取效率的影响，结果可见，浸泡8小时与浸泡过夜后再超声处理30
分钟，对供试品中大叶茜草素的含量没有太大的影响，结合文献[1]将浸泡时间定
为浸泡过夜。

大叶茜草素对光不稳定，操作过程应避光操作。

2.3 专属性对照品溶液的制备:
精密称取大叶茜草素对照品适量，加甲醇制成每1m l含80μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粉末约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25m l，称定重量，浸泡过夜，超声处理（功率300W，频率50k H z）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。

取续滤液，即得。

空白阴性对照试验：按上述方法制备供试品溶液和对照品溶液。

另取按处方比例并以相同工艺制备的缺茜草的阴性对照供试品，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。

在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各10μl,分别注入液相色谱仪，测得结果为：阴性对照色谱图中在与大叶茜草素对照
品以及供试品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其它组分对大叶茜草素的测定无干扰。

取大叶茜草素对照品约4m g，精密称定，置50m l量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过（含大叶茜草素80μg/m l），然后吸取上述溶液2μl、4μl、8μl、12μl、16μl、20μl 分别进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对大叶茜草素的浓度进行回归分析，结果大叶茜草素在 0.1600μg～1.6000μg范围内呈良好的
线性关系。

回归方程为Y=4713137.1X－27194.8，r=0.9999。

2.5 稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别于0h、2h、4h、8h、10h、12h 进样测定，结果从数据可见，大叶茜草素在12小时内的峰面积积分值基本稳定不变。

RSD为0.72%。

2.6 重复性试验：
取同一批号（批号090731）供试品6份，各约3g，精密称定，分别按专属性项
下方法操作，测定每份供试品含量，结果见表1。

2.7 准确度
加样回收试验：取供试品（批号090731，含量0.363m g/g）9 份，各约 1.5g，精密称定，其中 1、2、3号各精密加入用甲醇配置的大叶茜草素对照品溶液（大叶茜草素浓度 0.546m g/m l）0.5m l，4、5、6 号各精密加入上述对照品溶液1.0m l，7、8、9号各精密加入上述对照品溶液1.5m l，分别按专属性项下方法操作，测定每份供试品含量，计算回收率，结果平均回收率为104.78%，RSD为3.0%。

2.8 耐用性试验：换不同厂家、不同型号的色谱柱，取重复性试验中的已知含量的两份供试品及对照品分别进样，测定含量，结果两份供试品Diamonsil C18柱与Kromasil ODS柱大叶茜草素相对误差分别为0.42%与1.23%。

取本品按专属性项下的方法处理并测定，三批样品的测定结果见表2。

取3批不同的茜草药材粉末（过三号筛），各约0.2g，精密称定，按专属性项下含量测定的方法处理并测定，3批茜草药材中大叶茜草素的含量（m g/g）测定结果分别为3.223，4.234，4.058。

5.1 大叶茜草素对光极不稳定，实验过程应严格注意控制提取操作条件，低温避光操作。

5.2 考虑到乌兰十味散中茜草药材不同产地、采收时间对大叶茜草素的含量影响及大叶茜草素对光及温度敏感等特点。

故建议本制剂贮藏应注意密闭、防潮并在投料之前严格进行茜草药材把关。

5.3 考察中发现个别制剂室不投料、少投料或投劣药。

因此本文将大叶茜草素作为含量测定指标是很必要的，可有效控制乌兰十味散内在质量。

【相关文献】
[1]国家药典委员会，《中华人民共和国药典》（一部）[S].科学工业出版社.2005.。