抗坏血酸的测定方法综述

可加入硼酸， 硼酸与脱氢抗坏血酸结合生成硼酸脱氢抗坏血 酸螯合物， 此螯合物不能与邻苯二胺反应生成荧光化合物； 而硼 酸不与丙酮酸反应， 丙酮酸仍可发生上述反应。 因此， 加入硼酸后 测出的荧光值即为空白的荧光值。荧光法受干扰的影响较小， 且 结果不包括二酮古乐糖酸， 故准确度较高， 重现性好， 灵敏度同肼 。 比色法基本相同， 但操作较复杂【&】
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滴定分析法
-’- 直接碘量法
抗坏血酸分子中的烯二醇基具有还原性，与 >0 反应 定 量 地 被氧化生成二酮基。反应式如下：
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（ 第 $% 卷）第 & 期 !""# 年
医药卫生
甘肃科技纵横
显色剂体系测定抗坏血酸的方法也进行了研究，与此同时还有， ； 磷钼钨三元杂多酸 利用磷钼二元杂多蓝测定抗坏血酸的方法【!】 钼 蓝 比 色 法 测 定 抗 坏 血 酸【""】 等各种杂多 测 定 抗 坏 血 酸 光 度 法【"#】 酸法。 $%& 紫外分光光度法 用定量过量的碘酸钾溶液， 在弱酸性条件下， 与碘化钾生成 抗坏血酸将一部分 ’()还原， 剩余的 ’()用紫外分 ’()的显色反应， 光光度计来测得， 根据这些关系建立了紫外分光光度法测定抗坏 血酸【"$】 。 $%* 催化动力学光度法 对氨基苯磺酸与亚硝酸根进行重氮化反应生成重氮盐， 抗坏 血酸对重氮盐得分解有催化作用。利用加入 +) 羟基喹啉 与 该 重 氮盐反应生成偶氮染料来终止反应。在波长 &!*,- 处， 用 ".- 比 色皿以水作参比测定其吸光度， 吸光度与空白体系的差值 !/ 与 抗坏血酸的质量浓度成线 性 关 系【"(】 利用抗坏血酸的吸光度 / 与 建立了药物中抗坏血酸的双波长 浓度 0 及照射波长之间的关系， 紫外分光光度测定法【"&】 。 $%1 流动注射 23’/4光度法 在 56$78 的盐酸介质中 9 抗坏血酸与 3:2"4 与邻菲 啉混 合 （# ） 与邻菲 啉形成有色络合物， 其吸光值同抗 液 反 应 9 生 成 3: 【8】 坏血酸的浓度成正比 。 将其与流动注射分析 23’/4相结合 9 建立的 抗坏血酸的流动注射分 测 定 抗 坏 血 酸 的 流 动 注 射 23’/4 光 度 法 ； 甜橙、 药片和 尿 液 中 抗 析 )$ ， 8 二氯吲哚酚光度法可以测量饮料、 【"*】 。 坏血酸
（$ ） "! % 【"( 】李建平， 曹香玉 % 抗坏血酸的催化动力学光度法测定 % 分析测试学报， （& ） $##" ， $# % 【"& 】 陶 锦 清 % 双 波 长 光 度 法 测 定 抗 坏 血 酸 的 研 究 % 淮 海 工 学 院 学 报 ， （& ） "!!+ ， 1 % 【"* 】马惠昌， 冯建章， 曹勃阳 % 饮料、 甜橙、 药片和尿液中维生素 0 的流动 注射分析 )$ ， （$ ） 8 二氯吲哚酚光度法 % 分析化学， " 灵敏、 简便、 快速等优点， 是上述几 种方法中最先进、 可靠的方法。但是在一般实验室却受到仪器的 限制， 不能普及。 *%" 纸色谱和薄层色谱 早期纸色谱在抗坏血酸测定方面应用很多， 而且多在显色方 法 和 溶 剂 洗 脱 上 进 行 研 究 。 比 如 用 ;<=>-=, ?@ " 滤 纸 和 酸 性 A0? 区分抗坏血酸和脱氢 抗 坏 血 酸 ， 用 浸 过 偏 磷 酸 的 滤 纸 并 用 将抗坏血酸洗脱后用 $ ， 酚 )乙酸溶液展开， 8)二氯靛酚或 $ ， &)二 硝基苯肼的方法再进行测定等。在定量测定抗坏血酸方面， 薄层 色谱比纸色谱用的更加广泛。 （B0 ） *%$ 气相色谱 尽管气相色谱在提高有机痕量化合物中的灵敏度和选择性 方面起了很大作用， 可是抗坏血酸这种极性化合物不能直接采用 这种技术。为了能用气相色谱测定抗坏血酸， 一般是将其在六甲 的吡啶溶剂中进行三甲基硅醚 基二硅氨烷和三甲基氯硅烷 （$ ： "） 衍生化， 增加其挥发性。 （C0 ） *%( 液相色谱 液相色谱在抗坏血酸的分析中得到了极广泛的应用。 方法不 仅灵敏度高， 选择性好而且快， 无需对样品进行衍生化。 可见， 抗坏血酸的测定方法发展较为迅速， 从常量测定发展 到微量测定， 从简单的定量分析发展到精密仪器分析， 测定方法 的准确度、 选择性、 灵敏度等， 都有了较大的提高。今后随着科学 的不断发展， 新的更灵敏、 更准确、 更高效的分析方法还将有进一 步的发展。
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荧光分析法
样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸， 再与 邻苯二胺反应生成有荧光的喹喔啉。在一定条件下， 喹喔啉之荧 光强度与脱氢抗坏血酸浓度成正比， 反应式如下：
当食物中含有丙酮酸时， 也与邻苯二胺反应生成一种荧光物 质， 干扰测定。
【! 】 陈 玉 銮 ， 肖景娴， 周 祝 敏%磷 钼 钨 三 元 杂 多 酸 光 度 法 测 定 药 物 中 的 抗 坏血酸 % 分析测试技术与仪器， （( ） "!!* ， " % 【"# 】 王 占 文 ， 陈 玉 銮%磷 钼 杂 多 酸 光 度 法 测 定 药 物 和 食 品 中 的 抗 坏 血 酸 分析化学 %"!!" ， （( ） "! % 【"" 】关学良， 邱书伟， 刘振 % 钼蓝比色法测定新疆果品中抗坏血酸的含量 % 新疆大学学报 （自然科学版） ， （( ） "!!* ， "$ % 【"$ 】 孙国良， 陈金媛， 汤斌华 % 软饮料中 D. 含量的测定 % 食 品 科 学 ， "!!+ ，
参考文献： 【" 】张洪渊 % 生物化学教程 % 成都： 四川大学出版社， "!!&% 【$ 】刘云%食品、 生物样品和药物中抗坏血酸的检测%化学试剂， （*） "!!&， "8 % 【( 】蔡明招 % 实用工业分析 % 广州： 华南理工大学出版社， "!!!% 【& 】大连轻工业学院等八大院校编 % 食品分析 % 中国轻工业出版社， "!!&% 【* 】夏静， 刘琼霞 % 双光束剩余染料差减比色法测定蔬菜中的抗坏血酸含 量 % 安徽农业科学， "!!1% 【8 】 马 勇 ， 杨 建 男%流 动 注 射 光 度 法 测 定 食 品 中 的 抗 坏 血 酸%化 学 世 界 ， （"" ） "!!# ， (" % 【1 】于瑞珠%药物中抗坏血酸的快速分光光度测定%淮海工学院学报， "!!&， "% 【+ 】程湘东， 杨玉珍 % 一种分析抗坏血酸的灵敏方法 % 食品科学， "!+! ， (%
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分光光度法
用活性炭将还原性抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，然后与
0’- 0 ， 4@二硝基苯肼比色法
可 0， 4@二硝基苯肼作用生成红色的肼。在浓硫酸的脱水作用下， 转变为橘红色的无水化合物—— —双 @0 ， 4@二硝基苯。在硫酸溶液 中显色稳定， 最大吸收波长为 :0&;+ 。吸光度与总抗坏血酸含量 成正比， 故可进行比色测定。肼比色法测得的是抗坏血酸和脱氢 抗坏血酸的总量。 肼比色法操作复杂， 特异性较差， 易受共存物质 的影响， 结果包括二酮古乐糖酸， 故测定值往往偏高。 而且活性炭 对抗坏血酸的氧化作用，是基于其表面吸附的氧进行界面反应， 加入量过低， 氧化不完全， 测定结果偏低， 加入量过高， 对抗坏血 】:】 。 酸有吸附作用， 使结果也偏低【4【 0’0 金属离子法 方法的实质是氧化还原反应， 是将金属离子还原， 使之产生 （" ） ， 稳定的有色溶液。最通用的是抗坏血酸将 ABC!D 还原成 AB 加入螯和剂后， （" ） 即显色， 在络和物最大吸光处测定吸光度。 AB （" ） 螯和剂是 其吸光值同抗坏血酸的浓度成正比。最常用 的 AB 【9】 ， （F2G） 。该法用于血清 #， #E@ 联吡 啶【6】 0， 4， 6@ 三 吡 啶 基 均 三 嗪 中的抗坏血酸和脱氢抗坏血酸含量的同时测定， 脱氢抗坏血酸用 二硫苏糖醇还原成抗坏血酸， 通过还原前后吸光值的差值对两种 物质定量。测定尿样时需预先将铁沉淀， 用活性炭处理以除去干 。抗坏血酸对铜有较专一的还原作用， 新铜试剂灵 （0 ， 扰物【0】 .@二 ，与 !H0%的络合作用产生溶解于水的黄色物 甲基 @- ， -&@菲罗啉） 质的原理， 建立了新铜比色法测定抗坏血酸【I】 。 0’( 杂多酸法 -.I. 年， JHKL,MNKMOP;L 等人利用抗坏血酸还原磷钨钒杂多黄 的特性， 建立了测定抗坏血酸的方法， 国内学者利用杂多酸作为
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故可用于抗坏血酸的定量 -+?, 抗坏血酸与 -+?,> 定量反应， 测定。以淀粉作指示剂， 用碘标准溶液滴定至溶液呈稳定的蓝色 为终点， 此方法常用作食品或药剂中抗坏血酸含量的测定。方便 。 实用， 但准确度不高， 误差较大【(】 -’0 0 ， 6@二氯靛酚滴定法 抗坏血酸可还原染料 0 ， 6@ 二氯靛酚。该染 料 在 酸 性 溶 液 中 呈粉红色 （在中性或碱性溶液中呈蓝色） ， 被还原后颜色消失。还 原性抗坏血酸还原染料后， 本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有 杂质干扰时， 一定量的样品提取液还原标准染料液的量， 与样品 中抗坏血酸的含量成正比。反应式如下：
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医药卫生
（ 第 $% 卷）第 & 期 !""# 年
抗坏血酸的测定方法综述
杨芳芳
（桂林矿产地质研究院， 广西 桂林
摘要： 抗坏血酸 （又称维生素 ! ） 是存在于新鲜水果及其他食 品中并为人体必需的营养物质之一。本文综述了近年来食品、 生 物样品和药品中抗坏血酸的各种检测方法。 关键词： 抗坏血酸 测定方法 综述 抗坏血酸是一种酸性的己糖衍生物， 是烯醇式己糖酸内脂。 立 但只有 # 型有生 体结构与糖类相似， 有 " 型和 # 型两种异构体， 理功效， 可发生氧化与还原互变。氧化型和还原型都有生物活性。 故抗 分子中第二、 三两位碳上烯醇羟基的氢容易生成 $% 而释出， 坏血酸虽然不含自由羟基， 仍具有有机酸的性质。其分子式如下：
该方法常用于食品、 饮料、 血清中抗坏血酸含量的测定。 其中 （"!>2） 是测定抗坏血酸的标准试剂， 该法分析速 0， 6@ 二 氯 靛 酚 度快， 所需仪器设 备 简 单 ， 但 "!>2 法 的 局 限 性 在 于 特 效 性 较 差 ， 且染料不稳定， 许多化合物如酚巯基、 丙糖还原酮以及许多离子， 如亚铁离子、 亚铜离子、 亚硫酸根离子， 全能还原此试剂， 需要在 】4【 】:】 反应前用硫醇盐除去重金属离子的方法减少干扰【0【 。
抗坏血酸在水中的溶解度为 &’() * +,。熔点 -.&/-.01 。2$3 其电离常数 28-34’-9 ， 4 时氧化还原电位 5&3&’-667。 2803--’:9 。 （酸性） 与 06:;+ （中性） 。 在碱性与酸性介质 最大吸收波长 04:;+ 中均能迅速被氧和金 属 离 子 氧 化 成 脱 氢 抗 坏 血 酸 （"$<< ） ， 脱氢 【0】 抗坏血酸可进一步氧化成二酮古乐糖酸 （"8= ） 。 抗坏血酸 （维 生 素 ! ） 是维持机体正常生理功能的重要维生 素之一。 它广泛参与机体氧化、 还原等复杂代谢过程。 常作为抗氧 剂、 营养强化剂等添加于食品药物中。抗坏血酸还能与抗氧化剂 的反应产物反应， 使氧化剂再生， 因而抗坏血酸也是一种重要的 。新鲜水果及蔬菜中含有 丰 富 的 抗 坏 血 酸 ， 抗氧化剂的增效剂【0】 。所以抗 尤其是橙子、 橘子、 番茄以及鲜枣和松针等含量最丰富【-】 坏血酸是水果蔬菜中的一项非常重要的营养指标。 抗坏血酸在人体内能促进胶原蛋白和粘多糖的合成， 增加微 血管的致密性， 降低其通透性及脆性， 增加机体抵抗力。缺乏时， 引起造血机能障碍、 贫血、 微血管壁通透性增加， 脆性增强和血管 容易破裂出血， 严重时肌肉、 内脏出血死亡， 这些症状在临床上通 常称为坏血病。抗坏血酸是人体所必须的由外界提供的营养物 质。鉴于抗坏血酸对人类的重要性， 近年来发展了一系列新的测 定方法， 而且经典方法也得到了许多改进。 本文对食品、 药物及生 物样品中抗坏血酸的测定方法， 如滴定分析法、 分光光度法、 电化 学法、 色谱法等， 在最近十几年的进展进行了总结。