一种从西红花中制备西红花总苷的方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810338914.7
(22)申请日 2018.04.16
(71)申请人 湖州耕香生物科技有限公司
地址 313200 浙江省湖州市德清县阜溪街
道长虹东街926号1幢（莫干山国家高
新区）
申请人 浙江工业大学
(72)发明人 王平　童应鹏　江瑜　
(74)专利代理机构 杭州丰禾专利事务所有限公
司 33214
代理人 王晓峰
(51)Int.Cl.
A61K 36/88(2006.01)
C07H 15/20(2006.01)
C07H 1/08(2006.01)
A61K 133/00(2006.01)
(54)发明名称
一种从西红花中制备西红花总苷的方法
(57)摘要
本发明提供一种从西红花中制备西红花总
苷的方法：将西红花与固相试剂都投入球磨机中
球磨至均匀，取出球磨粉末，向所述球磨粉末中
加入水，搅拌充分混匀，过滤，取上清液，上大孔
树脂层析柱，先用30％乙醇水溶液洗脱除杂，再
用60％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去
溶剂，干燥，得到西红花总苷。

本发明基于机械化
学反应的提取技术，所用的固相试剂能选择性结
合西红花中多糖等杂质，达到初步除杂目的。

与
传统提取技术相比，产品提取率和纯度可提高10
～20个百分点。

权利要求书1页 说明书5页CN 108553556 A 2018.09.21
C N 108553556
A
1.一种从西红花中提取西红花苷类成分的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：将西红花与固相溶剂投入球磨机中球磨至均匀，取出球磨粉末，向所述球磨粉末中加入水，搅拌充分混匀，过滤，取上清液，上大孔树脂层析柱，用30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用60％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花苷类成分；
其中：所述的西红花为含水率不大于12％的干燥药材或药材碎末；所述固相溶剂为氢氧化钠、氢氧化铝、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氯化钙、氢氧化钾、氧化钙、磷酸氢二钠中的一种或两种以上任意组合；所述的西红花与固相试剂质量比为1:0.1～3；所述的球磨粉末与所加入的水的质量比为1:5～40。

2.如权利要求1所述的从西红花中提取西红花苷类成分的方法，其特征在于：所述球磨机的球磨时间为5～60min。

3.如权利要求1所述的从西红花中提取西红花苷类成分的方法，其特征在于：所述的球磨粉末中加入水后，搅拌时间为5～60min。

4.如权利要求1所述的从西红花中提取西红花苷类成分的方法，其特征在于：所述球磨粉末中加入水，控制温度为5～90℃条件下搅拌混合。

5.如权利要求1所述的从西红花中提取西红花苷类成分的方法，其特征在于：所述大孔树脂为HPD -100a、HPD -100、HPD -450、HPD -600、D101、AB -8中的一种。

6.如权利要求1所述的从西红花中提取西红花苷类成分的方法，其特征在于：所述30％乙醇水溶液用量为2～8倍柱体积。

7.如权利要求1所述的从西红花中提取西红花苷类成分的方法，其特征在于：所述60％乙醇水溶液用量为2～10倍柱体积。

8.如权利要求6所述的从西红花中提取西红花苷类成分的方法，其特征在于：所述30％乙醇水溶液用量为4～6倍柱体积。

9.如权利要求7所述的从西红花中提取西红花苷类成分的方法，其特征在于：所述60％乙醇水溶液用量为4～8倍柱体积。

10.如权利要求1所述的从西红花中提取西红花苷类成分的方法，其特征在于：所述方法按照如下步骤进行：将含水率不大于12％的干燥西红花药材或药材粉末与固相试剂按质量比为1:0.1～1:1一起投入球磨机中，球磨15～45min；取出球磨粉末，向所述的球磨粉末中加入质量为所述球磨粉末质量10～30倍的水，在20～50℃下搅拌20～50min；过滤，取上清液，上HPD -100、HPD -100a、D -101或AB -8大孔树脂层析柱，先用4～6倍柱体积的30％乙醇水溶液除杂，再用4～8倍柱体积的60％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花苷类成分；所述的固相试剂为碳酸钠、碳酸氢钾、氧化钙中的一种或两种以上的任意组合。

权　利　要　求　书1/1页CN 108553556 A
一种从西红花中制备西红花总苷的方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种从西红花中制备西红花总苷的方法
背景技术
[0002]西红花是一种昂贵的中药材，具有治疗精神类疾病、神经退行性疾病、学习记忆障碍、心血管疾病、动脉粥样硬化、高血脂、糖尿病、高血压、胃溃疡、脂肪肝、癫痫、惊厥等多种活性，其物质基础以西红花苷类(crocins)、西红花苦苷(picrocrocin)和藏花醛(safranal)为代表，并以西红花总苷含量最大。

[0003]西红花中的西红花苷类等具有较好的水溶性和醇溶性，一般采用水、醇或不同醇浓度溶液进行提取，提取方法包括回流法、静置法和超声法等，然后再采用硅胶色谱柱法、结晶法、两相溶剂萃取法和大孔树脂法进行纯化，制备过程一般需要较高温度或较长时间，生产成本较高，产业化困难。

[0004]机械力辅助提取技术是一门新型的无溶剂提取技术，是将机械化学反应的原理和方法引入到动植物有效成分的提取中而形成的一门技术。

机械力辅助提取的过程大致是，将生物组织和固相试剂混合，在机械力诱发下，特定成分与固相试剂发生化学反应或吸附，形成某种易溶或不溶于某种溶剂的物质，从而使特定成分得到分离或去除，从而获得目标有效成分。

与传统的提取方法相比，机械力辅助提取具有选择性好、提取率高、工艺简单、操作方便、环境友好等优点。

机械力辅助提取技术有望彻底取代传统的提取技术，目前还未见采用该技术提取西红花总苷的报道。

发明内容
[0005]本发明解决了西红花总苷提取工艺中存在的问题，提供一种选择性好、提取率高、工艺简单、操作方便、环境友好、易于实现工业化生产的西红花总苷提取方法。

[0006]本发明采用机械力辅助提取技术从西红花中提取西红花总苷。

其基本原理是：在高能机械力的作用下，西红花的细胞壁破裂，西红花苷类、西红花苦苷等活性物质释放出来，多糖等杂质与固相试剂形成特定的复合物而被除去，经分离纯化，分别得到西红花总苷。

[0007]本发明采用的技术方案是：
[0008]一种从西红花中提取西红花总苷的方法，所述方法为：将西红花与固相溶剂投入球磨机中球磨至均匀，取出球磨粉末，向所述球磨粉末中加入水，搅拌充分混匀，过滤，取上清液，上大孔树脂层析柱，用30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用60％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷。

所述的西红花为含水率不大于12％的干燥药材或药材碎末；所述固相溶剂为氢氧化钠、氢氧化铝、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氯化钙、氢氧化钾、氧化钙、磷酸氢二钠中的一种或两种以上任意组合；所述的西红花与固相试剂质量比为1:0.1～3；所述的球磨粉末与所加入的水的质量比为1:5～40。

[0009]进一步，本发明推荐所述球磨机的球磨时间为5～60min，优化为15～45min。

[0010]本发明优选的西红花与固相溶剂质量比为1:0.1～1:1。

[0011]本发明优化的固相试剂为碳酸钠、碳酸氢钾、氧化钙中的一种或两种以上的任意组合。

[0012]本发明推荐所述的球磨粉末中加入水后，搅拌时间为5～60min，优选为20～50min。

[0013]本发明所述球磨粉末中加入水，控制温度为5～90℃条件下搅拌混合，最优为20～50℃。

[0014]本发明优选所述大孔树脂为HPD-100a、HPD-100、HPD-450、HPD-600、D101、AB-8中的一种，特别优选的大孔树脂为HPD-100a、HPD-100、D101、AB-8中的一种。

[0015]本发明所述30％乙醇水溶液用量为2～8倍柱体积，优选为4～6倍柱体积。

[0016]本发明所述60％乙醇水溶液用量为2～10倍柱体积，优选为4～8倍柱体积。

[0017]本发明所述的西红花为含水量不大于12％的干燥药材或药材粉末，可以通过烘干或晒干至含水率不大于12％制得。

[0018]本发明的优选方案为：
[0019]所述提取方法按照如下步骤进行：将含水率不大于12％的干燥西红花药材或药材粉末与固相试剂按质量比为1:0.1～1:1一起投入球磨机中，球磨15～45min；取出球磨粉末，向所述的球磨粉末中加入质量为所述球磨粉末质量10～30倍的水，在20～50℃下搅拌20～50min；过滤，取上清液，上HPD-100、D-101或AB-8大孔树脂层析柱，先用4～6倍柱体积的30％乙醇水溶液除杂，再用4～8倍柱体积的60％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷；所述的固相试剂为碳酸钠、碳酸氢钾、氧化钙中的一种或两种以上的任意组合。

[0020]与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
[0021](1)本发明所采用的是基于机械化学反应的提取技术，所用的固相试剂能选择性结合西红花多糖类杂质，起到了初步除杂目的。

与传统提取技术相比，产品提取率和纯度可提高10～20个百分点。

(2)本发明大孔树脂30％乙醇水溶液除杂溶液以西红花苦苷为主要成分，经过进一步纯化后，可制备得高纯度西红花苦苷。

(3)本发明提取过程所用的溶剂主要是水，降低了生产成本，对环境污染小，是一种绿色的提取工艺。

(4)本发明提取温度低、提取时间短，能够防止西红花总苷的降解。

(5)本发明操作简单，工艺路线短，缩短了生产周期。

[0022]综上所述，本发明具有成本低、环境友好、产品纯度好、生产周期短等优点，是一种具有广阔应用前景的西红花总苷的提取方法。

具体实施方式
[0023]下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
[0024]以下实施例中所述产品中西红花中西红花总苷的检测方法及计算方法为：[0025]定量分析：以西红花苷-1为对照440nm下紫外分光光度法测量
[0026]产品得率(％)＝产品质量/西红花质量*100
[0027]产品纯度(％)＝提取物中西红花总苷的质量/西红花质量*100
[0028]实施例1
[0029]将1g含水率9％的干燥西红花药材与1g碳酸氢钠一起投入球磨机中，球磨20min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入40g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.27g，产品得率为27％，纯度为90％。

[0030]实施例2
[0031]将1g含水率9％的干燥西红花药材与1g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨20min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入40g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.29g，产品得率为29％，纯度为91％。

[0032]实施例3
[0033]将1g含水率9％的干燥西红花药材与1g氧化钙一起投入球磨机中，球磨20min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入40g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.25g，产品得率为25％，纯度为88％。

[0034]实施例4
[0035]将1g含水率9％的干燥西红花药材与1g氢氧化钠一起投入球磨机中，球磨20min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入40g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.20g，产品得率为20％，纯度为78％。

[0036]实施例5
[0037]将1g含水率9％的干燥西红花药材与1g磷酸氢二钠一起投入球磨机中，球磨20min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入40g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.22g，产品得率为22％，纯度为84％。

[0038]实施例6
[0039]将1g含水率9％的干燥西红花药材与1g氢氧化铝一起投入球磨机中，球磨20min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入40g水，在50℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.24g，产品得率为24％，纯度为87％。

[0040]实施例7
[0041]将1g含水率9％的干燥西红花药材与1g氯化钙一起投入球磨机中，球磨20min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入40g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大
孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.25g，产品得率为25％，纯度为85％。

[0042]实施例8
[0043]将1g含水率9％的干燥西红花药材与0.5g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨20min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入30g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.27g，产品得率为27％，纯度为90％。

[0044]实施例9
[0045]将1g含水率9％的干燥西红花药材与0.5g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨20min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入20g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.26g，产品得率为26％，纯度为89％。

[0046]实施例10
[0047]将1g含水率9％的干燥西红花药材与0.5g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨20min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入45g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.29g，产品得率为29％，纯度为92％。

[0048]实施例11
[0049]将1g含水率9％的干燥西红花药材与0.5g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨20min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入60g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.29g，产品得率为29％，纯度为88％。

[0050]实施例12
[0051]将1g含水率9％的干燥西红花药材与0.5g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨30min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入45g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.28g，产品得率为28％，纯度为87％。

[0052]实施例13
[0053]将1g含水率9％的干燥西红花药材与0.5g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨40min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入45g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上AB-8大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.29g，产品得率为29％，纯度为87％。

[0054]实施例14
[0055]将1g含水率9％的干燥西红花药材与0.5g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨40min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入45g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上HPD-100a大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.29g，产品得率为29％，纯度为93％。

[0056]实施例15
[0057]将1g含水率9％的干燥西红花药材与0.5g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨40min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入45g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上HPD-100大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.29g，产品得率为29％，纯度为90％。

[0058]实施例16
[0059]将1g含水率9％的干燥西红花药材与0.5g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨40min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入45g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上D101大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.29g，产品得率为29％，纯度为86％。

[0060]实施例17
[0061]将1g含水率9％的干燥西红花药材与0.5g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨40min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入45g水，在30℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上HPD-100a大孔树脂层析柱，先用6倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.22g，产品得率为22％，纯度为95％。

[0062]实施例18
[0063]将1g含水率9％的干燥西红花药材与0.5g碳酸钠一起投入球磨机中，球磨40min；取出球磨粉末，向所得球磨粉末中加入45g水，在50℃下搅拌50min；过滤，取上清液，上HPD-100a大孔树脂层析柱，先用4倍30％乙醇水溶液洗脱除杂，再用6倍柱体积的60wt％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩蒸去溶剂，干燥，得到西红花总苷0.28g，产品得率为28％，纯度为91％。