精选综合实训4革兰阴性需氧和兼性需氧杆菌资料
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多数菌株生长都需要盐；大多数氧化酶都为阳性； 具有一端单一鞭毛。
TCBS平板上菌落 含亚碲酸钾的4号平板
特征 氧化酶 葡萄糖发酵 O/129敏感性 肌醇产酸 甘露醇产酸 明胶液化 TCBS生长 需要Na+
弧菌属 + + +/+ + + +
气单胞菌属 邻单胞菌属 假单胞菌属
+
+
+
+
+
-
-
+
-
-
猪霍乱沙门菌
+
—
— +/— — + — +
伤寒沙门菌
+ + — + + — —/+ — + — —
肠炎沙门菌
+
—
— +++ — + — —
KIA:K/A-+,H2S阳性,赖氨酸脱羧酶阳性,IMVC:-+-+,MIU:+--
1
一、原理
用已知的标准诊断菌液【伤寒杆菌：菌体
（O）抗原、鞭毛（H）抗原；副伤寒甲、乙、
2、培养特性：专性需氧，4℃不生 长42 ℃生长，在血平板上经35— 37℃，18—24h培养可表现为：菌 落大而扁平、湿润、边缘不齐,有金 属光泽,有生姜样芳香气味,菌落周围 有宽大的兰绿色透明溶血环。
3、生化鉴定：氧化酶阳性，触酶阳性，O-F 试验氧化型、木糖产酸不产气，液化明胶， 还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，甲基红阴 性、VP阴性、利用枸橼酸盐，精氨酸双水解 酶阳性。
肠道非致病菌
发酵乳糖
1、形态观察（革兰染色） G –杆菌 2、菌落观察 （1）埃希菌在肠道 选择性培养基上发酵乳糖产酸，在SS和MAC
平板上为红色或粉红色菌落 (2)志贺菌属：将本菌接种在SS和MAC平板上经35℃孵育18～24h。
由于志贺菌不分解乳糖，宋内志贺菌某些菌株可迟缓发酵乳糖， 故其在SS平板和MAC平板上形成无色透明的、中等大小的菌落。 除宋内志贺菌菌落外均为光滑型菌落。 (3)沙门菌属：将本菌接种在SS、MAC平板上经35℃孵育18～24h。 由于本菌不分解乳糖并产碱，故在SS和MAC平板上形成无色、 半透明、光滑湿润、凸起的小菌落，产生H2S的菌落可在SS平板 上形成中心带黑褐色的小菌落。
2 需做的实验：
革兰染色、O/F、氧化酶、触酶、IMVC、精 氨酸双水解酶、硝酸盐还原实验
丙鞭毛（H）抗原共5种】与受检血清作试管凝集
试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价，
以协助伤寒、副伤寒疾病的诊断。
二、器材及试剂
标准诊断菌液（5种抗原：10ml/瓶）、生理 盐水（N.S）、待检血清（兔血清）、试管、试 管架、加样枪或移液管（5mL、2mL、0.5mL每 组3支）、一次性塑料滴管等。
平分为5管，每 管0.5ml：得5 管1:40稀释倍数
的血清
0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20 伤寒O抗原 1:20 1:40 1:80
1:160 1:320 1:640 1:1280
伤寒H抗原 1:20 1:40 1:80
1:160 1:320 1:640 1:1280
细菌学诊断
› 标本：
胃肠炎取粪便呕吐物或可疑食物 肠热症在病程不同阶段采取不同标本；
发病1周取血；发病1-3周取骨髓液 发病2 周取粪便；发病3周取尿
微生物学检查 细菌学诊断
肠热症
第1周取静脉血
标本
第1-3周取骨髓液 第2周起取粪
第3周起取尿
食物中毒 可疑食物
呕吐物 粪
败血症 血
SS平板
七、注意事项
1.应在光亮处先观察管底凝集状态，后轻摇 判
定结果。
2.使用前摇匀菌液，菌液有摇不散的凝集块时 不能使用。
弧菌科(Vibrionaceae)是一群氧化酶阳性，具 有端极鞭毛，菌体短小、直或微弯的革兰阴性杆 菌。分为弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发 光杆菌属等四个菌属。
弧菌属特征：耐碱不耐酸，营养要求不高。生长 迅速, 在pH8.8~9.0的碱性蛋白胨水/碱性琼脂平 板上生长良好。在TCBS平板上为黄色菌落; 在含 亚碲酸钾的平板上形成中心灰褐色的菌落。
肠粘膜上皮细胞 固有层淋巴结
肝脏 脾脏 胆囊 肾脏 骨髓
肝脾-肿大
并发症
胆囊-肠道-排菌(2周） 肠穿孔
肾脏-尿-排菌（3周) 肠出血
肠系膜淋巴结
典型病例病程为3-4W
胸导管 进入血液 再次进入血液
第一次菌血症 发热,不适,全身疼痛
第二次菌血症（1周） 高热、外周白细胞下降、肝脾肿大、
表情冷漠、玫瑰疹、相对缓脉
副甲H抗原 1:20 1:40 1:80
1:160 1:320 1:640 1:1280
副乙H抗原 1:20 1:40 1:80
1:160 1:320 1:640
1:1280
副丙H抗原 1:20 1:40 1:80
1:160 1:320 1:640 1:1280
四、凝集结果判断（上清液、沉淀）
“＋＋＋＋”：强，完全凝集，液体澄清，轻摇大片凝 集块。
1）、“O”高“H”不高：感染早期，伤寒沙门菌 “O”抗 原有交叉反应，建议一周后复查。
2）、“H”高“O”不高：疾病晚期、预防接种、非 特异 性回忆反应。
3.伤寒、副伤寒甲、乙有部分共同的O抗原，如 O抗体效价增高，只能推断为伤寒类疾病，不 能区别伤寒或副伤寒。
4.阴性反应：未感染，感染轻，应用有效抗菌药 物，接受皮质激素治疗者，患者过于衰弱等。
3、生化反应 4、血清学实验
• 革兰阴性杆菌，有周身鞭毛。 • 发酵多种糖类，多数能发酵乳糖，产酸产气
IMViC试验为+ + - -，MIU:++-, KIA:AA+-不产H2S
• 大肠杆菌血清型以O：K：H
A2志贺菌
是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌， 通称痢疾杆菌dysentery bacteria
3+ 2+ 2+ + -
六、临床意义
1.正常值：正常人血清中可能有低效价的抗体存在， 其值高低存在地区差异，一般伤寒沙门菌 “O”>1:80,“H”>1:160,副伤寒沙门菌 “H”>1:80，有临床意义；或者进行疾病早期、中 后期两次血清效价比较，后者增高4倍/4倍以上有诊 断价值。
2. “O”抗体出现早、消失快、主要为IgM类；“H” 抗体出现迟、可持续阳性数年，主要为IgG类，O、 H凝集效价都超过正常值，意义较大。
“＋＋＋”：大部分凝集，液体轻度浑浊，凝集块 小。
“＋＋”：中强，部分凝集，液体半澄清，凝集块 颗粒状。
“＋”：弱，少量凝集，液体浑浊。
“－”：不凝集，液体浑浊，和对照相同。
++++
++
+++
五、效价判断
能出现明显凝集（++）的血清最高稀释度。
例： 测定某病人“O”凝集效价结果如下： 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 4+ 3+
三、实验方法
1. 冰箱中取出诊断菌液平衡至室温。 2. 将待检血清作1：20、1：40、…..1：1280 （每管0.5ml，每个稀释倍数5管）稀释，对照管
加N.S 0.5ml,然后逐管加入混匀后诊断菌液1d， 充分振荡混匀，标记（时间、班级、组号）， 35~37°C放置16-20h观察结果。
（配液管：0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20）
双糖发酵等
血清学鉴定
生化反应
玻片凝 集试验
菌
动 葡 乳 麦 甘 蔗 硫 吲 甲 VP 枸
力 萄糖芽露糖化哚基
橼
名
糖
糖醇
氢
红
酸
盐
甲型副伤寒沙门菌 +
—
— —/+ — + — —
乙型副伤寒沙门菌 +
—
— +++ — + — ±
鼠伤寒沙门菌
+
—
— +++ — + — +
丙型副伤寒沙门菌 +
—
—+ —+ —+
+
+
-
+
-
+/-
-
-
-
-
-
-
不发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱 杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌 属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土 壤杆菌属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等。
假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚 膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性。代表 菌株为铜绿假单胞菌。
1、形态观察：G- 杆菌，多形性， 有鞭毛、菌毛、荚膜，无芽孢,产 荧光素和绿脓素
革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌
革兰阴性菌初步分群
革兰阴性杆菌
F O-F试验 o/－
氧化酶试验 非发酵菌
+
－
弧菌科
肠杆菌科
A肠杆菌科共同特性
1、相似的形态染色 中等大小，G –杆菌，无芽胞，多数 有动力
2、简单的培养条件
3、活泼的生化反应 乳糖发酵试验
初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌
肠道致病菌
不发酵乳糖
3. 5/6个同学一组，第二天中Fra bibliotek1:30观察结果。
0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20
2.5mlN.S 2.5mlN.S
伤寒O抗原
2.5ml 2.5ml
1:20 1:40 1:80 余2.5ml 余2.5ml
1:160 1:320 1:640 1:1280
平分为5管，每管 0.5ml：得5管 1:20稀释倍数的 血清
形态 无鞭毛，有菌毛
生化反应
能分解葡萄糖，产酸不产气，
不分解乳糖,除宋内志贺菌 IMViC试验为-+ - -，MIU:---,
KIA:KA--,不产H2S
对理化因素的抵抗力 低于其他肠道杆菌，对酸敏感 血清学：根据生化反应特征和O抗原分为4群
A3伤寒、副伤寒的致病过程
伤寒沙门菌和甲型副伤寒杆菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌
TCBS平板上菌落 含亚碲酸钾的4号平板
特征 氧化酶 葡萄糖发酵 O/129敏感性 肌醇产酸 甘露醇产酸 明胶液化 TCBS生长 需要Na+
弧菌属 + + +/+ + + +
气单胞菌属 邻单胞菌属 假单胞菌属
+
+
+
+
+
-
-
+
-
-
猪霍乱沙门菌
+
—
— +/— — + — +
伤寒沙门菌
+ + — + + — —/+ — + — —
肠炎沙门菌
+
—
— +++ — + — —
KIA:K/A-+,H2S阳性,赖氨酸脱羧酶阳性,IMVC:-+-+,MIU:+--
1
一、原理
用已知的标准诊断菌液【伤寒杆菌：菌体
（O）抗原、鞭毛（H）抗原；副伤寒甲、乙、
2、培养特性：专性需氧，4℃不生 长42 ℃生长，在血平板上经35— 37℃，18—24h培养可表现为：菌 落大而扁平、湿润、边缘不齐,有金 属光泽,有生姜样芳香气味,菌落周围 有宽大的兰绿色透明溶血环。
3、生化鉴定：氧化酶阳性，触酶阳性，O-F 试验氧化型、木糖产酸不产气，液化明胶， 还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，甲基红阴 性、VP阴性、利用枸橼酸盐，精氨酸双水解 酶阳性。
肠道非致病菌
发酵乳糖
1、形态观察（革兰染色） G –杆菌 2、菌落观察 （1）埃希菌在肠道 选择性培养基上发酵乳糖产酸，在SS和MAC
平板上为红色或粉红色菌落 (2)志贺菌属：将本菌接种在SS和MAC平板上经35℃孵育18～24h。
由于志贺菌不分解乳糖，宋内志贺菌某些菌株可迟缓发酵乳糖， 故其在SS平板和MAC平板上形成无色透明的、中等大小的菌落。 除宋内志贺菌菌落外均为光滑型菌落。 (3)沙门菌属：将本菌接种在SS、MAC平板上经35℃孵育18～24h。 由于本菌不分解乳糖并产碱，故在SS和MAC平板上形成无色、 半透明、光滑湿润、凸起的小菌落，产生H2S的菌落可在SS平板 上形成中心带黑褐色的小菌落。
2 需做的实验：
革兰染色、O/F、氧化酶、触酶、IMVC、精 氨酸双水解酶、硝酸盐还原实验
丙鞭毛（H）抗原共5种】与受检血清作试管凝集
试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价，
以协助伤寒、副伤寒疾病的诊断。
二、器材及试剂
标准诊断菌液（5种抗原：10ml/瓶）、生理 盐水（N.S）、待检血清（兔血清）、试管、试 管架、加样枪或移液管（5mL、2mL、0.5mL每 组3支）、一次性塑料滴管等。
平分为5管，每 管0.5ml：得5 管1:40稀释倍数
的血清
0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20 伤寒O抗原 1:20 1:40 1:80
1:160 1:320 1:640 1:1280
伤寒H抗原 1:20 1:40 1:80
1:160 1:320 1:640 1:1280
细菌学诊断
› 标本：
胃肠炎取粪便呕吐物或可疑食物 肠热症在病程不同阶段采取不同标本；
发病1周取血；发病1-3周取骨髓液 发病2 周取粪便；发病3周取尿
微生物学检查 细菌学诊断
肠热症
第1周取静脉血
标本
第1-3周取骨髓液 第2周起取粪
第3周起取尿
食物中毒 可疑食物
呕吐物 粪
败血症 血
SS平板
七、注意事项
1.应在光亮处先观察管底凝集状态，后轻摇 判
定结果。
2.使用前摇匀菌液，菌液有摇不散的凝集块时 不能使用。
弧菌科(Vibrionaceae)是一群氧化酶阳性，具 有端极鞭毛，菌体短小、直或微弯的革兰阴性杆 菌。分为弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发 光杆菌属等四个菌属。
弧菌属特征：耐碱不耐酸，营养要求不高。生长 迅速, 在pH8.8~9.0的碱性蛋白胨水/碱性琼脂平 板上生长良好。在TCBS平板上为黄色菌落; 在含 亚碲酸钾的平板上形成中心灰褐色的菌落。
肠粘膜上皮细胞 固有层淋巴结
肝脏 脾脏 胆囊 肾脏 骨髓
肝脾-肿大
并发症
胆囊-肠道-排菌(2周） 肠穿孔
肾脏-尿-排菌（3周) 肠出血
肠系膜淋巴结
典型病例病程为3-4W
胸导管 进入血液 再次进入血液
第一次菌血症 发热,不适,全身疼痛
第二次菌血症（1周） 高热、外周白细胞下降、肝脾肿大、
表情冷漠、玫瑰疹、相对缓脉
副甲H抗原 1:20 1:40 1:80
1:160 1:320 1:640 1:1280
副乙H抗原 1:20 1:40 1:80
1:160 1:320 1:640
1:1280
副丙H抗原 1:20 1:40 1:80
1:160 1:320 1:640 1:1280
四、凝集结果判断（上清液、沉淀）
“＋＋＋＋”：强，完全凝集，液体澄清，轻摇大片凝 集块。
1）、“O”高“H”不高：感染早期，伤寒沙门菌 “O”抗 原有交叉反应，建议一周后复查。
2）、“H”高“O”不高：疾病晚期、预防接种、非 特异 性回忆反应。
3.伤寒、副伤寒甲、乙有部分共同的O抗原，如 O抗体效价增高，只能推断为伤寒类疾病，不 能区别伤寒或副伤寒。
4.阴性反应：未感染，感染轻，应用有效抗菌药 物，接受皮质激素治疗者，患者过于衰弱等。
3、生化反应 4、血清学实验
• 革兰阴性杆菌，有周身鞭毛。 • 发酵多种糖类，多数能发酵乳糖，产酸产气
IMViC试验为+ + - -，MIU:++-, KIA:AA+-不产H2S
• 大肠杆菌血清型以O：K：H
A2志贺菌
是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌， 通称痢疾杆菌dysentery bacteria
3+ 2+ 2+ + -
六、临床意义
1.正常值：正常人血清中可能有低效价的抗体存在， 其值高低存在地区差异，一般伤寒沙门菌 “O”>1:80,“H”>1:160,副伤寒沙门菌 “H”>1:80，有临床意义；或者进行疾病早期、中 后期两次血清效价比较，后者增高4倍/4倍以上有诊 断价值。
2. “O”抗体出现早、消失快、主要为IgM类；“H” 抗体出现迟、可持续阳性数年，主要为IgG类，O、 H凝集效价都超过正常值，意义较大。
“＋＋＋”：大部分凝集，液体轻度浑浊，凝集块 小。
“＋＋”：中强，部分凝集，液体半澄清，凝集块 颗粒状。
“＋”：弱，少量凝集，液体浑浊。
“－”：不凝集，液体浑浊，和对照相同。
++++
++
+++
五、效价判断
能出现明显凝集（++）的血清最高稀释度。
例： 测定某病人“O”凝集效价结果如下： 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 4+ 3+
三、实验方法
1. 冰箱中取出诊断菌液平衡至室温。 2. 将待检血清作1：20、1：40、…..1：1280 （每管0.5ml，每个稀释倍数5管）稀释，对照管
加N.S 0.5ml,然后逐管加入混匀后诊断菌液1d， 充分振荡混匀，标记（时间、班级、组号）， 35~37°C放置16-20h观察结果。
（配液管：0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20）
双糖发酵等
血清学鉴定
生化反应
玻片凝 集试验
菌
动 葡 乳 麦 甘 蔗 硫 吲 甲 VP 枸
力 萄糖芽露糖化哚基
橼
名
糖
糖醇
氢
红
酸
盐
甲型副伤寒沙门菌 +
—
— —/+ — + — —
乙型副伤寒沙门菌 +
—
— +++ — + — ±
鼠伤寒沙门菌
+
—
— +++ — + — +
丙型副伤寒沙门菌 +
—
—+ —+ —+
+
+
-
+
-
+/-
-
-
-
-
-
-
不发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱 杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌 属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土 壤杆菌属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等。
假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚 膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性。代表 菌株为铜绿假单胞菌。
1、形态观察：G- 杆菌，多形性， 有鞭毛、菌毛、荚膜，无芽孢,产 荧光素和绿脓素
革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌
革兰阴性菌初步分群
革兰阴性杆菌
F O-F试验 o/－
氧化酶试验 非发酵菌
+
－
弧菌科
肠杆菌科
A肠杆菌科共同特性
1、相似的形态染色 中等大小，G –杆菌，无芽胞，多数 有动力
2、简单的培养条件
3、活泼的生化反应 乳糖发酵试验
初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌
肠道致病菌
不发酵乳糖
3. 5/6个同学一组，第二天中Fra bibliotek1:30观察结果。
0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20
2.5mlN.S 2.5mlN.S
伤寒O抗原
2.5ml 2.5ml
1:20 1:40 1:80 余2.5ml 余2.5ml
1:160 1:320 1:640 1:1280
平分为5管，每管 0.5ml：得5管 1:20稀释倍数的 血清
形态 无鞭毛，有菌毛
生化反应
能分解葡萄糖，产酸不产气，
不分解乳糖,除宋内志贺菌 IMViC试验为-+ - -，MIU:---,
KIA:KA--,不产H2S
对理化因素的抵抗力 低于其他肠道杆菌，对酸敏感 血清学：根据生化反应特征和O抗原分为4群
A3伤寒、副伤寒的致病过程
伤寒沙门菌和甲型副伤寒杆菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌