食品中大肠菌群的测定PPT课件PPT培训课件
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食品中大肠菌群检测PPT课件
食品卫生监督中的应用
餐饮业卫生监督
在餐饮业卫生监督中，大肠菌群 检测是重要的检测指标之一，用 于评估餐饮企业的卫生状况和食
品安全水平。
超市食品安全检测
超市食品安全检测中，大肠菌群 检测是必检项目之一，用于检测 食品是否符合国家食品安全标准。
食品进出口检验
在食品进出口检验中，大肠菌群 检测是重要的检测指标之一，用 于评估食品的卫生状况和安全性，
自动化检测技术
利用机器人和自动化设备进行样品处理和数据分析，提高检测效 率。
快速检测技术
开发新型培养基和试剂，缩短检测时间，提高检测速度。
基因检测技术
利用基因测序和生物信息学技术，提高检测准确性和特异性。
提高检测效率和准确性的方法
标准化操作流程
01
制定统一的大肠菌群检测标准，规范操作流程，减少误差。
05
大肠菌群检测的挑战和未来发展
当前面临的挑战
检测方法不统一
目前大肠菌群检测方法多样，缺乏统一的标准， 导致检测结果存在差异。
检测效率低下
传统检测方法过程繁琐，耗时长，无法满足快速、 大批量检测的需求。
检测准确性不高
由于操作复杂和干扰因素多，传统检测方法容易 出现假阳性或假阴性结果。
技术发展与未来趋势
检测步骤
采集样品、增菌培养、分 离培养、生化鉴定和计数。
培养法检测
传统培养法
将样品接种在选择性培养 基上，通过培养后观察菌 落形态、染色和生化反应 等特征进行鉴定。
自动化培养法
利用自动化仪器进行样品 接种、培养和检测，提高 检测效率和准确性。
培养法优缺点
培养法准确度高，但检测 周期较长，需要专业人员 操作。
确保食品的安全进出口。
食品中大肠菌群测定(一)课件
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
➢ （5）根据对样品污染状况的估计，按上述操作，
依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀 释1 次，换用1 支1mL无菌吸管或吸头。从制备 样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min 。
2、 初发酵试验 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
一、目的 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
1、 了解大肠菌群的定义及食品中大肠菌 群测定在食品卫生检验中的意义。
2、练习并掌握大肠菌群的检验方法 。
二、原理 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
➢1、大肠菌群
➢大肠菌群系指一群在37℃、24小时能发酵乳 糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性 无芽孢杆菌。
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➢（2） 液体样品
✓ 以无菌吸管吸取25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲 液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无 菌玻璃珠）中，充分棍匀，制成1:10 的样品匀液。
✓ （3） 样品匀液的pH 值应在6.5-7.5 之间，必要时分 别用1mol/L 氢氧化钠（NaOH ）或1 mol/L 盐酸 （HCI ）调节。
M
产气
不产气
P
BGLB肉汤
大肠菌群阴性NFra bibliotek(36±1)℃48h±2h
检 不产气
产气
验 大肠菌群阴性 流
大肠菌群阳性
程
查MPN表
报告
第一法 大肠菌群MPN计数法 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
大肠菌群检验PPT课件
四、应用茜素-β-D-半乳糖苷快速检验食品中的大肠菌群
1、检测步骤 0.1g×2 样品 0.01g × 2 0.001g × 2
Aliz-gal琼脂37 ℃ 24hr
计数紫色和红色菌落，乘以稀释倍数报告
大肠菌群β-D-半乳糖苷酶 茜素-β-D-半乳糖苷 茜素—Fe.NH4.Al.K（紫色和红色）
调调ph74ph741322试验情况简介试验情况简介alizalizgalgal检测食品中大肠菌群可在检测食品中大肠菌群可在18182424hh内显示出半内显示出半乳糖苷酶反应乳糖苷酶反应在同类性质的酶底物中在同类性质的酶底物中alizalizgalgal的的用量较低用量较低做倾注培养时在琼脂深层菌落特征较明做倾注培养时在琼脂深层菌落特征较明由于采用测定由于采用测定半乳糖苷半乳糖苷酶的方法易于检出迟缓发酶的方法易于检出迟缓发酵乳糖的大肠菌群和厌氧大肠杆菌酵乳糖的大肠菌群和厌氧大肠杆菌
样品
0.1g×2
0.01g × 2
0.001g × 2
结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）37 ℃ 24hr
计数紫红色菌落，乘以稀释倍数报告
3、ISO关于大肠菌群的定义（ISO9308-1：2000）
（ISO：INTERNATIONAL STARDIZATION ORGANIZATION国际标准化组织）
茜素-β-D-半乳糖苷琼脂 （Alig-gal琼脂）： Aliz-gal 50mg 蛋白胨20g 无水磷酸氢二钾2.75g 无水磷酸二氢钾2.75g 氯化钠5g 月桂基硫酸钠0.1g 异丙基硫代半乳糖苷0.03g 硫酸铝钾0.5g 柠檬酸铁铵0.5g 琼脂15g 蒸馏水1000mL。 调Ph7.4
（1）最近拟数法（MPN）（GB4789.2-1994）
最新大肠菌群检验幻灯片
大肠菌群是革兰氏阴性、无芽孢、氧
化酶阴性的杆状细菌，可需氧或兼性厌 氧地生长在含胆盐（或其他具有同样抑 制生长性能的表面活性剂）的培养基上， 当在36 ±2℃培养时，通常能于48hr内发 酵乳糖产酸和醛。它们还具有ß-半乳糖 苷酶。
4、依据ß-半乳糖苷酶快速测定大肠菌群的原理
➢ 大肠菌群产生的ß-半乳糖苷酶可分解培养基中的酶底物（即色 基与ß-半乳糖的结合物），使带色基团游离而显色或发荧光。该 反应灵敏快速。
（1）最近拟数法（MPN）（GB4789.2-1994）
0.1g×3
样品
0.01g × 3
0.001g × 3
乳糖胆盐发酵管 37 ℃ 24hr
产酸产气管
伊红美蓝平板（分离）
37 ℃ 24hr可疑菌落
乳糖发酵管（证实）
37 ℃ 24hr
根据经证实的乳糖胆盐发酵管 阳性管数，查MPN表。
（2）平板直接计数法（SN0169-92）
➢ 以自制MUGal肉汤与LST肉汤比较检测66份样 品中大肠菌群，其24h阳性检出率是LST肉汤 48h的1.5倍，但延长LST肉汤培养时间至96小 时后，两者结果逐步接近。表明MUGal多检出 的阳性部分多为受伤生长缓慢或迟缓发酵乳糖 的大肠菌群类菌株所致。
➢ 将MUGal肉汤阳性管中的可疑菌株进行触酶、 氧化酶和硝酸盐还原试验，并任选其中18株用 API 20E鉴定。证明95.1%的MUGal肉汤阳性 管中含有大肠菌群。
大肠菌群检验
二、大肠菌群的定义及检测方法
1、大肠菌群的传统定义 大肠菌群（Coliform group）系指一群需氧
及兼性厌氧，在37 ℃24小时能发酵乳糖产酸产 气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
包括肠杆菌科的艾希氏菌属、柠檬酸杆菌 属、肠杆菌属和克雷伯菌属。其中以艾希氏菌 属为主，称为典型大肠杆菌，其它三属习惯上 称为典型大肠杆菌。 2、大肠菌群检验的标准方法
化酶阴性的杆状细菌，可需氧或兼性厌 氧地生长在含胆盐（或其他具有同样抑 制生长性能的表面活性剂）的培养基上， 当在36 ±2℃培养时，通常能于48hr内发 酵乳糖产酸和醛。它们还具有ß-半乳糖 苷酶。
4、依据ß-半乳糖苷酶快速测定大肠菌群的原理
➢ 大肠菌群产生的ß-半乳糖苷酶可分解培养基中的酶底物（即色 基与ß-半乳糖的结合物），使带色基团游离而显色或发荧光。该 反应灵敏快速。
（1）最近拟数法（MPN）（GB4789.2-1994）
0.1g×3
样品
0.01g × 3
0.001g × 3
乳糖胆盐发酵管 37 ℃ 24hr
产酸产气管
伊红美蓝平板（分离）
37 ℃ 24hr可疑菌落
乳糖发酵管（证实）
37 ℃ 24hr
根据经证实的乳糖胆盐发酵管 阳性管数，查MPN表。
（2）平板直接计数法（SN0169-92）
➢ 以自制MUGal肉汤与LST肉汤比较检测66份样 品中大肠菌群，其24h阳性检出率是LST肉汤 48h的1.5倍，但延长LST肉汤培养时间至96小 时后，两者结果逐步接近。表明MUGal多检出 的阳性部分多为受伤生长缓慢或迟缓发酵乳糖 的大肠菌群类菌株所致。
➢ 将MUGal肉汤阳性管中的可疑菌株进行触酶、 氧化酶和硝酸盐还原试验，并任选其中18株用 API 20E鉴定。证明95.1%的MUGal肉汤阳性 管中含有大肠菌群。
大肠菌群检验
二、大肠菌群的定义及检测方法
1、大肠菌群的传统定义 大肠菌群（Coliform group）系指一群需氧
及兼性厌氧，在37 ℃24小时能发酵乳糖产酸产 气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
包括肠杆菌科的艾希氏菌属、柠檬酸杆菌 属、肠杆菌属和克雷伯菌属。其中以艾希氏菌 属为主，称为典型大肠杆菌，其它三属习惯上 称为典型大肠杆菌。 2、大肠菌群检验的标准方法
大肠菌群检测操作规范培训51页PPT
大肠菌群检测操作规范培训
56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们Байду номын сангаас就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话 ，那么 法律作 为一件 无用之 物自己 就会消 灭。— —洛克
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢谢！
60、人民的幸福是至高无个的法。— —西塞 罗
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们Байду номын сангаас就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话 ，那么 法律作 为一件 无用之 物自己 就会消 灭。— —洛克
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢谢！
60、人民的幸福是至高无个的法。— —西塞 罗
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
2020实验六_食品中大肠菌群的检验课件
LST结果判断
大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充 满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。如 果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时，可以 用手轻轻打动试管。
5）复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培
养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 管中，36 ℃±1℃培养48 h±2 h，观察产气 情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。
食品中大肠菌群数以每g（mL）样品中大肠菌 群的最可能数来表示，即为大肠菌群MPN值。
需要用到的培养基
（1）LST肉汤培养基：月桂基硫酸盐胰蛋白胨 成分：胰蛋白胨或胰酪胨（Tryticase）20g，NaCL
5.0g，乳糖5.0g，K2HPO4 2.75g，KH2PO4 2.75g，月桂基硫酸钠0.1g，蒸馏水1000mL。 制法：将各成分溶解于蒸馏水中。分装到有倒立发酵 管的20mm×150mm试管中，每管10mL。 121℃高压灭菌15min。最终pH6.8±0.2。
食品中大肠菌群的检验
1. 食品微生物检验的意义
有害微生物对人类和生产的影响：
引起食品变质 引起食物中毒 导致人体患病
1. 食品微生物检验的意义
是衡量食品卫生质量的重要指标,也是判定 被检食品能否食用的科学依据
可以判断食品加工环境及食品卫生的情况, 为卫生管理工作提供科学依据
可以有效地防止或减少食物中毒和人畜共 患病的发生
保证产品的质量,避免不 必要的损失
2. 食品微生物检验的范围
食品加工、储藏、销售 储环节的检验
原辅料的检验
食品的检验
生产环境的检验
3. 食品卫生标准中的微生物指标
指示菌
概念:在常规安全卫生监测中，用以指示检 样卫生状况及安全性的指示性微生物
大肠菌群测定演示文稿
中国采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制定的行业标准。两个 标准方法在检测程序上略有不同。
国家标准
国家标准采用三步法，即乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。 乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发 酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，
菌量、其他方法不能检测的食品，如水、乳制品及其其他食品中大 肠菌群的计数。
当前8页，总共14页。
材料
• 3.1食品样品：乳、肉、果汁、糕点、发酵调味品及其他食品。 • 3.2 菌种 阳性对照菌
– 大肠杆菌 3.3除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
– 恒温培养箱、恒温水浴箱、 均质器、振荡器、无菌吸管或微量移液器及吸头、无 菌锥形瓶、无菌培养皿、菌落计数器等。
当前11页，总共14页。
当前12页，总共14页。
当前13页，总共14页。
第二法大肠菌群平板计数
8、 操作步骤 8.1、 样品的稀释 按6.1 进行。 8.2、 平板计数 、 选取2 个～3 个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1ml。同时分别取1ml生 理盐水加人两个无菌平皿作空白对照。 、 及时将15 mL-20ml冷至46℃ 的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ）约倾注于每个平皿中。小心旋 转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL-4mlVRBA 覆盖平板表层。翻转平板 ，置于36℃±l℃ 培养18h-24h 。
、 固体和半固体样品：称取25g 样品，放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8
00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，或放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中， 用拍击式均质器拍打1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。 、 液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内 预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分棍匀，制成1:10 的样品匀液。
国家标准
国家标准采用三步法，即乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。 乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发 酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，
菌量、其他方法不能检测的食品，如水、乳制品及其其他食品中大 肠菌群的计数。
当前8页，总共14页。
材料
• 3.1食品样品：乳、肉、果汁、糕点、发酵调味品及其他食品。 • 3.2 菌种 阳性对照菌
– 大肠杆菌 3.3除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
– 恒温培养箱、恒温水浴箱、 均质器、振荡器、无菌吸管或微量移液器及吸头、无 菌锥形瓶、无菌培养皿、菌落计数器等。
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当前13页，总共14页。
第二法大肠菌群平板计数
8、 操作步骤 8.1、 样品的稀释 按6.1 进行。 8.2、 平板计数 、 选取2 个～3 个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1ml。同时分别取1ml生 理盐水加人两个无菌平皿作空白对照。 、 及时将15 mL-20ml冷至46℃ 的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ）约倾注于每个平皿中。小心旋 转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL-4mlVRBA 覆盖平板表层。翻转平板 ，置于36℃±l℃ 培养18h-24h 。
、 固体和半固体样品：称取25g 样品，放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8
00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，或放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中， 用拍击式均质器拍打1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。 、 液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内 预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分棍匀，制成1:10 的样品匀液。
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NaCl 8.5g 水 1000mL 分装：
3个三角瓶（含玻珠）中，225mL/个 9支试管，3支/组，9mL/支 灭菌： 121~126℃灭菌20min
2、月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）培养基：300mL
分装到27个已装有杜氏小管试管中，10mL/个
包扎（3支一捆），112~115℃灭菌30min
最近似数测定法（MPN）是指对未知样品做连 续的10倍稀释，选择3个连续的10倍稀释液，每 种稀释液接种3管装有培养基的试管中培养，根 据LST初发酵试验以及BGLB发酵证实实验，证 实大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告 每g（mL）样品中大肠菌群的最可能数。
食品中大肠菌群数以每g（mL）样品中大肠菌群 的最可能数来表示，即为大肠菌群MPN值。
三、实验器材
（一）培养基 月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）培养基 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）培养基
（二）实验材料 市售饮料
（三）其他 三角瓶，试管，培养皿，移液管
（四）仪器 超净工作台，电子天平，高压蒸汽灭菌锅
四、实验准备
（一）配制培养基和试剂（以中央台为单位） 1、配制生理盐水：1000mL
六、思考题
1、MPN是什么意思？MPN法的定义是什么？ 2、大肠菌群的概念是什么?它与E.coli是什么关系？ 3、大肠菌群的食品卫生学意义是什么？ 4、我国食品微生物检验指标有哪些？
胰蛋白胨 6g
NaCl
1.5g
乳糖 KH2PO4
水
1.5g 0.825g
K2HPO4
0.825g
十二烷基硫酸钠 0.03g
300mL pH 6.8
3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）培养基：150mL
分装到12个已装有杜氏小管试管中，10mL/个
包扎，112~115℃灭菌30min
蛋白胨 1.5g
（二）其它器具（每个组准备）
移液管 10mL 1支/组 1mL 10支/组
五、实验步骤
1、样品处理： 以无菌操作，先用酒精棉球擦拭样品表面， 用无菌剪刀将包装剪破，量取检样25mL放 入225mL灭菌生理盐水当中，充分振荡，混 合均匀，制成10-1稀释度样品
2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4
3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液， 用无菌移液管分别吸取1mL到LST发酵液试管 中，每个稀释度做3个平行（共9管）。
4、37℃培养48h 5、观察LST管中小倒管里是否有气泡。如有气
泡，则继续按照下述要求实验；如无气泡，则 是大肠阴性管（-）
6、如LST小倒管中有气泡，则按照无菌操作要 求，用接种环将产气LST发酵液接种到BGLB 试管中，一只产气LST发酵液对应一只BGLB 试管。
7、37℃培养48h 8、观察BGLB小倒管中是否有气泡，如有气泡，
则记为大肠阳性管（+）；如无气泡，则记为 大肠阴性管（-）。
大肠菌群计数检验流程
LST不产气（-） 小导管里无气泡
LST产气（+）
0
将产气的试管内 样品接种到 BGLB肉汤
9、根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表，报 告样品中大肠菌群MPN值。
五、实验结果与分析
经查MPN表，样品中大肠菌群数为 MPN/g（mL） 分析
食品中大肠菌群 的测定
一、实验目的
掌握大肠菌群的原理及其检验方法，以判 别食品的卫生质量
了解MPN测定法在食品卫生检验中的意义
二、实验原理
大肠菌群是指一群在一定培养条件下可发酵 乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴 性无芽孢杆菌。
该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指 标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致 病菌污染的可能。
乳糖
1.5g
牛胆粉溶液 30mL 0.1%煌绿水溶液 2mL
水
150mL
pH 7.2
牛胆粉溶液制法：将3g牛胆粉溶于30mL水中，调pH至7.0~7.5
BGLB制法：先将蛋白胨、乳糖溶于约100ml水中，加入牛胆 粉溶液30mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液，最后用水补 足到150ml，用纱布过滤后，再分装到试管中。
3个三角瓶（含玻珠）中，225mL/个 9支试管，3支/组，9mL/支 灭菌： 121~126℃灭菌20min
2、月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）培养基：300mL
分装到27个已装有杜氏小管试管中，10mL/个
包扎（3支一捆），112~115℃灭菌30min
最近似数测定法（MPN）是指对未知样品做连 续的10倍稀释，选择3个连续的10倍稀释液，每 种稀释液接种3管装有培养基的试管中培养，根 据LST初发酵试验以及BGLB发酵证实实验，证 实大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告 每g（mL）样品中大肠菌群的最可能数。
食品中大肠菌群数以每g（mL）样品中大肠菌群 的最可能数来表示，即为大肠菌群MPN值。
三、实验器材
（一）培养基 月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）培养基 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）培养基
（二）实验材料 市售饮料
（三）其他 三角瓶，试管，培养皿，移液管
（四）仪器 超净工作台，电子天平，高压蒸汽灭菌锅
四、实验准备
（一）配制培养基和试剂（以中央台为单位） 1、配制生理盐水：1000mL
六、思考题
1、MPN是什么意思？MPN法的定义是什么？ 2、大肠菌群的概念是什么?它与E.coli是什么关系？ 3、大肠菌群的食品卫生学意义是什么？ 4、我国食品微生物检验指标有哪些？
胰蛋白胨 6g
NaCl
1.5g
乳糖 KH2PO4
水
1.5g 0.825g
K2HPO4
0.825g
十二烷基硫酸钠 0.03g
300mL pH 6.8
3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）培养基：150mL
分装到12个已装有杜氏小管试管中，10mL/个
包扎，112~115℃灭菌30min
蛋白胨 1.5g
（二）其它器具（每个组准备）
移液管 10mL 1支/组 1mL 10支/组
五、实验步骤
1、样品处理： 以无菌操作，先用酒精棉球擦拭样品表面， 用无菌剪刀将包装剪破，量取检样25mL放 入225mL灭菌生理盐水当中，充分振荡，混 合均匀，制成10-1稀释度样品
2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4
3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液， 用无菌移液管分别吸取1mL到LST发酵液试管 中，每个稀释度做3个平行（共9管）。
4、37℃培养48h 5、观察LST管中小倒管里是否有气泡。如有气
泡，则继续按照下述要求实验；如无气泡，则 是大肠阴性管（-）
6、如LST小倒管中有气泡，则按照无菌操作要 求，用接种环将产气LST发酵液接种到BGLB 试管中，一只产气LST发酵液对应一只BGLB 试管。
7、37℃培养48h 8、观察BGLB小倒管中是否有气泡，如有气泡，
则记为大肠阳性管（+）；如无气泡，则记为 大肠阴性管（-）。
大肠菌群计数检验流程
LST不产气（-） 小导管里无气泡
LST产气（+）
0
将产气的试管内 样品接种到 BGLB肉汤
9、根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表，报 告样品中大肠菌群MPN值。
五、实验结果与分析
经查MPN表，样品中大肠菌群数为 MPN/g（mL） 分析
食品中大肠菌群 的测定
一、实验目的
掌握大肠菌群的原理及其检验方法，以判 别食品的卫生质量
了解MPN测定法在食品卫生检验中的意义
二、实验原理
大肠菌群是指一群在一定培养条件下可发酵 乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴 性无芽孢杆菌。
该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指 标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致 病菌污染的可能。
乳糖
1.5g
牛胆粉溶液 30mL 0.1%煌绿水溶液 2mL
水
150mL
pH 7.2
牛胆粉溶液制法：将3g牛胆粉溶于30mL水中，调pH至7.0~7.5
BGLB制法：先将蛋白胨、乳糖溶于约100ml水中，加入牛胆 粉溶液30mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液，最后用水补 足到150ml，用纱布过滤后，再分装到试管中。