高二生物动物细胞工程2(1)
2-2 动物细胞工程(第一课时)-2023-2024学年高二生物精品课件(人教版2019选择性必修
渗透压:需要考虑的一个重要环境参数
气体环境 O2: 细胞代谢所必需的 (95%空气和 CO2:维持培养液的pH 5% CO2 )
微生物培养中的作用不同(为自养型 微生物提供碳源)
CO2 培养箱
2 动物细胞培养的过程
动物组织块 用机械法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理
(将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配置而成的培养基)
液体培养基 (培养液)
1 动物细胞培养的条件
无菌、无毒的环境 ①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理
无菌 ②在无菌环境下进行操作 无毒 定期更换培养液,以便清除代谢物
超净工作台
1 动物细胞培养的条件
适宜的温度、pH和渗透压
温度:哺乳动物多以(36.5±0.5)℃
①使细胞与培养液充分接触,一方面保证细胞所需的 O2和营养物质的供应,另一方面保证细胞内代谢废物 的及时排出;
②使得在细胞水平操作的其它技术得以实现。
2 动物细胞培养的过程
【思考3】用胰蛋白酶分散细胞,由此可说明细胞间的物 质主要是什么成分? 主要是蛋白质(胶原蛋白等)。
【思考4】胰蛋白酶能将细胞消化掉吗?那将动物组织 分散成单个细胞时要注意什么问题呢?
能,应注意时间的控制。因为胰蛋白酶不仅能分解细胞 间的蛋白质,长时间还会分解膜蛋白,对细胞造成损伤。
【思考5】能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗?为什么? 不能,因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4,此环 境下胃蛋白酶(2.0)没有活性,而胰蛋白酶(7.2-8.4) 的活性较高。
2 动物细胞培养的过程
动物细胞工程
(第一课时)
➢ 动物细胞培养 ➢ 动物细胞融合 ➢ 动物细胞核移植
高二生物2.2动物细胞工程(第1课时)学案
第2章细胞工程第2节动物细胞工程(第1课时)【学习目标】1.认同动物细胞培养是模拟体内生理条件在体外进行的培养,由此分析、推出培养动物细胞需要满足的基本条件。
2.尝试建构动物细胞培养基本流程。
3.认同动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
4.简述干细胞的应用;通过探讨干细胞在临床上的应用所产生的效益与风险,理性看待生物技术的应用,增强社会责任感。
【重点难点】1.动物细胞培养的过程及条件。
2.干细胞在生物医学工程中的应用。
【学习新知】学习任务一动物细胞培养阅读教材43-45页,完成以下内容:活动1:通过“人造皮肤”事例,概述动物细胞培养的概念。
活动2:认同动物细胞培养是模拟体内生理条件在体外进行的培养,由此分析、推出培养动物细胞需要满足的基本条件。
(1)分析机体给体内的细胞提供了哪些适宜的条件使其能够维持正常的生命活动?(2)动细胞培养实际上是在体外模拟体内的生理条件进行的培养,你认为体外培养动物细胞需要满足哪些条件?活动3:尝试建构动物细胞培养基本流程。
(1)依据动物细胞培养的概念,初步建构动物细胞培养的流程。
(2)根据教材中“动物细胞培养的过程”的内容,并结合图2-12,思考、回答下列问题:①培养前为什么要将组织分散成单个细胞?②怎样将组织分散成单个细胞细胞?③培养一段时间分裂会受阻,这是为什么?怎样解决这一问题?④什么是细胞贴壁、接触抑制、原代培养、传代培养?(3)在分析、回答问题的基础上完善动物细胞培养的基本流程。
活动4:比较动物细胞培养与植物组织培养有什么相同和不同之处?活动5:完成[自学检测1][自学检测1]1.判断下列有关动物细胞培养的表述是否正确。
(1)培养环境中需要O2,不需要CO2。
()(2)动物细胞培养要经过脱分化形成愈伤组织。
()(3)培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清。
()(4)培养瓶中的细胞均需要定期用胰蛋白酶处理,分瓶后才能继续增殖。
()(5)培养过程除需要无菌、无毒的环境外,还要定期更换培养液。
动物细胞工程(第4课时)高二生物(人教版2019选择性必修3)
育进程
将胚胎移入(受体)
代孕母牛
早期胚胎
生出与供体奶牛 遗传物质基本相 同的犊牛(克隆牛)
一 动物体细胞核移植技术
【分析与探讨】
1.体细胞和卵母细胞从哪里来? 体细胞来自于供体高产奶牛身体的某部位(如耳)上取 卵母细胞从屠宰场收集牛卵巢
2.卵母细胞需要在体外培养到什么时期? MⅡ期
3.在将供体细胞的细胞核移入卵母细胞前,需要对卵母细胞进 行什么操作?为什么?
即时练习
2.2017年,某国批准了首例使用细胞核移 植技术培育“三亲婴 儿”的申请。其培育过程可选用如下技术路线。
据图分析下列叙述错误的是 (C)
A. 该技术涉及物细胞培养、细胞核移植 等操作 B. 该技术可避免母亲的线粒体遗传病基 因传递给后代 C. 卵母细胞捐献者携带的红绿色盲基因 能够遗传给“三亲婴儿” D.“三亲婴儿”同时拥有自己父亲、母亲 及卵母细胞捐献者的部分基因
去核 保证克隆动物的核基因全部来自供体细胞
一 动物体细胞核移植技术
【分析与探讨】
4.实际在克隆高产奶牛时,科学家并没有从供体细胞中取出细胞 核,而是直接将供体细胞注入去核的卵母细胞,你知道这是为什 么吗? 这种方法操作简便,对卵母细胞损伤较小,伴随着两细 胞融合,体现出细胞膜具有一定的流动性的结构特点。
一 动物体细胞核移植技术
采集牛卵巢中的 卵母细胞,在体 外培养到MⅡ期
从供体高产奶 牛取体细胞
(1)选择卵母细胞作为核 移植受体细胞的原因:
显微操作去核 (实际上是去 除纺锤体-染色 体复合物)
动物细胞培养
①卵母细胞体积大,易操作
②含有促使细胞核表达全 能性的物质和营养条件
(2)将供体细胞整个注入去 核卵母细胞中的原因:
高中生物专题2细胞工程2.2动物细胞工程2.2.1动物细胞培养和核移植技术学案新人教版选修3
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术[学习目标] 1.归纳动物细胞培养的过程、条件及应用。
2.归纳通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用前景。
方式一2003年,四川少年小林点燃鞭炮,导致面部、四肢被严重烧伤并感染。
为了挽救儿子的生命,小林的爸爸、妈妈向医生恳求“割皮救儿”,烧伤整形科主任魏平最终同意进行这场罕见的亲体皮肤移植手术。
为了全覆盖孩子身体上被深度烧伤并发生感染的创面,医生把取自父子俩的皮肤全部剪成指甲盖大小的皮块,儿子和爸爸的皮肤相隔相嵌,估计父亲的皮肤至少能在其儿子身上存活半年甚至更长时间,这就给儿子自身皮肤的生长带来了生机,孩子的痊愈指日可待。
思考:1.小林在皮肤烧伤之后,很容易得病,为什么?2.选取植皮时,理论上选择谁的皮肤最好?为什么?3.自身的健康皮肤是有限的,能不能通过其他途径获得自身的皮肤?方式二古代神话里孙悟空用自己的汗毛变成无数个小孙悟空的离奇故事,表达了人类对复制自身的幻想。
1978年,美国科幻小说家罗维克(D.Rorvick)写了一本名叫《克隆人》(The Cloning of a man)的书,内容是一位富商将自己的体细胞核移植到一枚去核卵中,然后将其在体外卵裂成的胚胎移植到母体子宫中,经过足月的怀孕,最后生下了一个健康的男婴,这个男婴就是一个克隆人。
现在,克隆人已经不是科幻小说里的梦想,而是呼之欲出的现实。
由于克隆人可能带来复杂的后果,一些生物技术发达的国家,现在大都对此采取明令禁止或者严加限制的态度。
克隆人,真的如潘多拉盒子里的魔鬼一样可怕吗?我们应该怎样正确看待克隆技术呢?一、动物细胞工程和动物细胞的培养1.动物细胞工程2.动物细胞培养 (1)概念:从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。
(2)过程动物组织块或器官――――――――――→剪碎胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理单个细胞――→加培养液细胞悬液――→初次培养原代培养―→传代培养。
人教版生物高二年级《动物细胞工程》教学设计
第课,课题二动物细胞工程第课时,课型新授。
总序第个教案。
编写时间执行时间教学目的与要求:重点难点:教具:幻灯片。
教学程序:(导入)动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等。
其中,动物细胞培养技术是其它动物细胞工程技术的基础。
一、动物细胞培养:许多动物细胞能分泌蛋白质,如抗体等。
但是单个的动物细胞分泌的蛋白质的量是很少的,怎样才能获得大量的分泌蛋白质呢?这就可以借助于大规模的动物细胞培养了。
动物细胞培养所用的培养液(液体培养基)与植物组织培养所用的培养基的成分是不同的。
(一)动物细胞培养液:常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。
(二)动物细胞培养材料:培养的动物细胞大都取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或者组织。
(三)动物细胞培养的过程:①分离细胞(胰蛋白酶等处理)②原代培养③传代培养。
将组织取出来后,先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞,然后配制成一定浓度的细胞悬浮液,再将该悬浮液放入培养瓶中,在培养箱中培养,这个过程叫做原代培养。
细胞在培养瓶中贴壁生长。
随着细胞的生长和增殖,培养瓶中的细胞越来越多,需要定期地用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来,配制成细胞悬浮液,分别装到两个或多个培养瓶中培养,这称为传代培养。
原代培养的细胞一般传到10代左右就不容易传下去了,细胞的生长就会出现停滞,大部分细胞衰老死亡。
但是有极少数的细胞能度过“危机”而继续传下去,这些存活的细胞一般能传到40~50代,这种传代细胞叫做细胞株。
细胞株细胞的遗传物质没有发生改变。
当细胞株传到50代以后又会出现“危机”,不能再传下去。
但是有部分细胞的遗传物质发生了改变,并且带有癌变的特点,有可能在培养条件下无限制地传代下去,这种传代细胞叫做细胞系。
注:○a胰蛋白酶处理使细胞分散。
○b在培养液中培养,这时的培养称为原代培养。
○c○d时的培养称为传代培养,以50代为界限。
○c时的细胞称为细胞株,之后称为细胞系。
动物细胞工程(课件)-高二生物人教版(2019)选择性必修3
已成功的动物细胞融合实例:
生物种类 酵母菌—鸡 人—胡萝卜 人—小鼠
细胞来源
成功年代
原生质体—血红细胞
1975年
腹水癌细胞—原生质体
1976年
纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞 1978年
一、动物细胞融合
概念: 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞 的过程。
结果: 形成单核的杂交细胞 原理: 细胞膜的流动性
4、气体环境 O2和CO2(95%空气和5% CO2 )
维持培养液的pH
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 原理
培养基性质 培养基特有成分
培养结果 培养目的
植物组织培养
细胞的全能性
固体培养基
蔗糖 植物激素
植物体
快速繁殖、培育 无病毒植株
动物细胞培养 细胞增殖
液体培养基
葡萄糖 动物血清
细胞株、细胞系 获得细胞或细胞
2、保护濒危物种;
3、医药卫生领域生产 医用蛋白质及组织器官 的移植;
4、了解胚胎发育和衰 老过程;追踪研究疾病 的发展过程和治疗疾病;
体细胞核移植技术存在的问题:
1、成功率比较低(平均不到10%); 2、大多存在健康问题; 3、克隆动物食品安全问题。
此外,体细胞核移植后的重组细胞直接发育成新个体 属于无性繁殖,产生的后代无更大变异性,而环境是 多变的,易造成该个体适应能力降低,易被淘汰。
细胞群
产 生
化学性质单一、 特异性强的抗体 (单克隆抗体)
二、单克隆抗体
1975年,两位科学家创 造性地解决了这个问题
1984年两人因此获得诺 贝尔生理学﹠医学奖
科勒
米尔斯坦
一个(免疫过的)B细胞 一个骨髓瘤细胞
高二生物三大工程知识点
高二生物三大工程知识点在高二生物学习中,三大工程知识点是遗传工程、生物技术和生态工程。
这些知识点在生物学领域中具有重要的意义和应用。
本文将详细介绍这三大工程知识点及其相关内容。
一、遗传工程遗传工程是指通过改变生物体的遗传物质DNA,来改变其性状和功能的一项技术。
常见的遗传工程技术包括基因克隆、基因转导、基因敲除等。
1. 基因克隆基因克隆是将特定基因从一个生物体中复制并转移到另一个生物体中的过程。
利用限制性内切酶和DNA连接酶等工具,可以将目标基因剪切、连接到载体DNA上,并通过转化等手段将其导入宿主细胞中,使宿主细胞表达目标基因。
2. 基因转导基因转导是将外源基因导入目标细胞内的一种方法。
通过利用载体,将目标基因载入到病毒、质粒等载体中,再将其转移到目标细胞,从而使细胞表达目标基因。
基因转导在基因治疗、疫苗研发等方面有着广泛应用。
3. 基因敲除基因敲除是通过诱导或设计,使目标基因在生物体中发生突变或丧失功能的一种技术。
通过基因敲除可以研究基因的功能及其与生物性状之间的关系,对深入理解基因与物种进化、生物发育等方面具有重要意义。
二、生物技术生物技术是利用生物体的组成、结构、功能或代谢特性等,进行实践性应用和开展技术活动的一门学科。
常见的生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程等。
1. 基因工程基因工程是利用DNA重组技术,通过改变生物体的遗传物质来改变其性状或功能的技术。
基因工程在农业、医药、环境等领域有着广泛应用,如转基因作物的培育、基因治疗的开发等。
2. 细胞工程细胞工程是应用生物技术的原理和方法,对细胞进行设计、改造和应用的一种技术。
细胞工程在药物生产、组织工程、再生医学等方面具有重要作用,例如利用干细胞进行组织修复和再生。
3. 酶工程酶工程是利用酶的特异性催化反应和酶的稳定特性,进行合成反应、降解反应等的一种技术。
酶工程应用广泛,如制药领域中的酶催化合成、食品工业中的酶法制备等。
三、生态工程生态工程是为了改善和保护生态环境,利用生物学原理和技术,进行人为干预和调整的一项工程。
人教版高二生物选修三知识点总结:专题二细胞工程
选修3《现代生物科技专题》知识点总结专题2 细胞工程(一)植物细胞工程1.植物组织培养技术(1)原理:植物细胞的全能性全能性表达的难易程度:受精卵>生殖细胞>干细胞>体细胞;植物细胞>动物细胞脱分化再分化发育(2)过程:离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织胚状体植物体常用的植物激素生长素和细胞分裂素。
(3)用途:微型繁殖、作物脱毒(选材应该选择茎尖组织)、制造人工种子、单倍体育种(最大的优点是明显缩短育种年限,得到的全为纯种)、筛选突变体、细胞产物的工厂化生产。
(4)地位:是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。
2.植物体细胞杂交技术(1)原理:细胞膜的流动性、植物细胞的全能性(2)过程:去壁的方法:酶解法;诱导融合的方法:物理法包括离心、振动、电激等。
化学法是用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。
(4)意义:克服了远缘杂交不亲和的障碍。
(二)动物细胞工程1. 动物细胞培养(1)概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。
(2)原理:细胞增殖(3)动物细胞培养的流程:取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
(4)细胞贴壁和接触抑制:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。
细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。
(5)动物细胞培养需要满足以下条件①无菌、无毒的环境:培养液应进行无菌处理。
通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染。
此外,应定期更换培养液,防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
②营养:合成培养基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。
通常需加入血清、血浆等天然成分。
第二章 细胞工程-【必背知识】2021-2022学年高二生物章节知识清单人教版2019选择性必修3
新人教版生物学选择性必修3《生物技术与工程》知识梳理第二章 细胞工程 第一节 植物细胞工程细胞工程: 细胞工程是指应用细胞生物学 、分子生物学 和发育生物学 等多学科的原理和方法,通过细胞器、细胞或组织水平上的操作,有目的地获得 特定的细胞、组织、器官、个体 或其产品的一门综合性生物工程。
1.原理和方法:细胞 生物学和分子 生物学。
2.操作水平:细胞 水平或细胞器 水平。
3.目的:按照人的意愿来改变细胞内的遗传物质 或获得细胞产品 。
一、植物细胞工程的基本技术1. 细胞的全能性:细胞经_分裂_和_分化_后,仍然具有_产生完整生物体_或__分化成其他各种细胞__的_潜能_,即细胞具有_全能性_。
2. 细胞具有全能性的原因(物质基础)生物体的细胞中都含有该物种的全套遗传物质_,都有_发育成为完整个体所需的全部遗传信息_。
1. 生物体生长发育过程中细胞不表现全能性的原因(不离体的细胞无法表现出全能性的原因) 在特定的时间时间和空间条件下,细胞中的基因会选择性地表达 2. 全能性大小比较(1)受精卵、体细胞、生殖细胞 __受精卵>生殖细胞>体细胞____(2)分化程度高的细胞、分化程度低的细胞__分化程度低的细胞>分化程度高的细胞_____ (3)分裂能力强的细胞、分裂能力弱的细胞 __分裂能力强的细胞>分裂能力弱的细胞____ (4)植物细胞、动物细胞__植物细胞>动物细胞__________ (5)幼嫩的细胞、衰老的细胞__幼嫩的细胞>衰老的细胞____ (一)植物组织培养技术1. 概念:植物组织培养是指将_离体_的植物_器官__、_组织_或_细胞_(称为_外植体_)等,培养在人工配制的_培养基_上,给予_适宜的培养条件_,诱导其形成__完整植株_的技术。
2. 原理:__植物细胞的全能性__3. 生殖方式:_无性生殖__4. 分裂方式:__有丝分裂__5. 过程:外植体――愈伤组织―再分化胚状体或丛芽――→发育植株脱分化:在一定的_激素_和_营养_等条件的_诱导_下,_已经分化_的细胞_失去其特有的结构和功能__,转变成_未分化的细胞__的过程。
动物细胞工程课件高二下学期生物人教版选择性必修3
多孔细胞培养板
从细胞培养液或 小鼠腹水中获取大量 的单克隆抗体。
筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
通常采用有限稀释克隆细胞的方法,将杂交瘤细胞多倍稀释,接 种在多孔细胞培养板上培养
单克隆抗体制作的流程
注射特定的抗原
用特定的抗原对小
鼠进行免疫,并从
该小鼠的脾中得到
能产生特定抗体的B
淋巴细胞。
多种B淋巴细胞
诱导融合
培培养基进 行筛选:在该培养基上 ,未融合的亲本细胞和 融合的具有同种核的细 胞都会死亡,只有融合 的杂交瘤细胞才能生长 。
将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合 多种杂交细胞
抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 (分泌的抗体能与特定抗原结
合)
将抗体检测呈阳性 的杂交瘤细胞在体 外条件下大规模培 养,或注射到小鼠 腹腔内增殖。
注射到 小鼠腹 腔内
第二次筛选 克隆化培养、抗体检测 (可进行多次)
用96孔板培养和筛选杂交瘤细胞,在每 一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞
体外培养 单克隆抗体
米尔斯坦 【英国】
科勒 【德国】
一个B淋巴细胞(产生单一的抗A的抗体)
骨髓瘤细胞能无限增殖
单克隆 抗体
动物细胞 培养技术
杂交瘤 细胞
动物细胞 融合技术
既能产生特异性抗体, 又能大量增殖的细胞
通过实验,他们得到了单克隆抗体。由于发明了单克隆抗体的制备 技术,米尔斯坦和科勒于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖。
2.2动物细胞工程(2)
动物细胞融合技术 与单克隆抗体
旁栏思考题P49
19世纪30年代,科学家曾在患肺结 核、天花和麻疹等疾病的病人的病 理组织中观察到多核细胞。如何解 释这一现象? 【答案】病人体内的病毒等诱导多 个体细胞融合形成了多核细胞。
高中生物 2.1《动物细胞培养和核移植技术》教学设计 新人教版选修3-新人教版高二选修3生物教案
动物细胞培养和核移植教学设计〔第一课时〕一、概述本节是人教版普通高中课程标准实验教科书生物选修三第二章第三节《动物细胞培养和核移植》第一课时。
普通高中《生物课程标准》〔实验〕指出,高中生物课程目的之一是帮助学生理解生物科学、技术和社会的相互关系,增强学生对自然和社会的责任感,促进学生形成正确的世界观和价值观。
同时现代教育理论认为,从某种意义上说,主动参与的学习过程比单纯获得现成的结论更重要。
在学生通过对植物细胞工程的学习之后,可能会对是否能对动物细胞进行培养、克隆动物等问题产生疑问。
本节课在设置情景,介绍动物细胞工程相关技术之后,我采用自主学习的方法,先让学生自学动物细胞的培养过程,找出关键概念,画出动物细胞培养的流程图,在此基础上,再对学生的流程图进行修正,并强调重要的名词和概念。
对于动物细胞培养应注意的问题,我采用一系列问题串的形式,让学生讨论探究。
最后总结得出结论。
通过对植物组织培养和动物细胞培养的比较,实现对新知识进行有意义的构建。
最后通过介绍居里夫人的名言,进一步激励学生热爱科学,关爱生命的情感。
二、教学目标分析知识目标: 1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用;2、说出贴壁生长、接触抑制、原代培养、传代培养等基本概念;3、区分植物组织培养和动物细胞培养的异同能力目标: 1、通过自学概括出动物细胞培养的过程,积极参与小组讨论2、运用已学知识,分析动物细胞培养的条件。
情感目标: 1、培养热爱科学,关爱生命健康的情感2、关注细胞工程研究的发展和应用前景三、学习者特征分析本节课的学习者特征分析主要是根据教师平时对学生的了解而做出的:〔1〕学生是某某培元中学高二年学生;经过一年多的高中学习,已经掌握了一定的生物学基础知识,具备了独立思考和判断的能力。
〔2〕学生已经学习了基因工程、植物细胞工程的学习,对动物细胞工程的学习有较浓厚的兴趣。
〔3〕学生在以前较少开展课堂的自主学习和讨论,有必要加以引导四、教学策略选择与设计〔1〕情境激趣策略:通过大量动物细胞培养的图片、诗歌、名人名言激发学生的学习兴趣和热爱科学的情感〔2〕以任务驱动的自主学习策略:通过布置每位学生阅读教材相关内容,培养学生的自主学习能力。
高二生物选修(3)课件:2.2.1动物细胞培养和核移植技术
3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎 或出生不久的幼龄动物的器官或组织,其主要原因 是这样的组织细胞 ( D ) A.容易产生各种变异 B.具有更强的全能性 C.取材十分方便 D.分裂增殖的能力强
4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 A ) ------------------------------( A.培养基不同; B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行; C.动物细胞可以传代培养,而植物细胞不能; D.动物细胞能够大量培养,而植物细胞只能培 养成植株。
动物细胞工程常用的技术
细胞工程的基本技术
植物细胞工程
植物组织培养技术
动物细胞工程
动物细胞核移植技术
植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术 单克隆抗体技术 动物细胞培养技术(基础)
一、动物细胞培养 1、概念:
zxxk
是从动物机体中取出相关组织, 将它分散成单个细胞,放在适宜的培 养基中,让这些细胞生长和增殖
思
考
1、动物细胞培养取材时,一般是取胚胎组织或幼龄动 物的组织或器官,请解释原因? 2、为什么动物细胞培养过程需将组织分散成单个细胞? 3、如何将动物组织分散成单个的细胞呢? 4、如何理解原代培养和传代培养? zxxk 5、传代培养的细胞能一直传代下去吗?为什么? 6、动物细胞培养需满足哪些条件? 7、动物细胞培养有哪些应用?
4、种类
体细胞核移植 (难度较高)
胚胎细胞核移植
5、体细胞核移植的过程(克隆高产奶牛)
高产奶牛 (供体)
MⅡ期 卵母细胞 (去核)
供体细胞培养
重组细胞
重组胚胎 胚胎移植
P49
6、应用
①器官移植
②加快家畜遗传改良进程,促进优良畜群繁育
苏教版高二生物选修三 动物细胞工程下载地址(2)
讨论
1、动物细胞培养的原理是什么? 、动物细胞培养的原理是什么? 2、从动物机体中要取出哪些相关组织?并 、从动物机体中要取出哪些相关组织? 解释原因。 解释原因。 3、组织分散成单个细胞的方法是什么?其 、组织分散成单个细胞的方法是什么? 理论依据是什么? 理论依据是什么? 4、动物细胞体外培养需要满足哪些条件? 、动物细胞体外培养需要满足哪些条件?
问题导学
1、克隆羊“多利”的重生,采用的是什么 、克隆羊“多利”的重生, 技术? 技术? 细胞工程技术 2、动物细胞工程技术到底是干啥的?(定义) 、动物细胞工程技术到底是干啥的?(定义) ?(定义 在细胞生物学和分子生物学理论指导下, 在细胞生物学和分子生物学理论指导下,根 据人类的需要一方面深入探索并改造生物的 遗传特性,另一方面应用工程技术手段, 遗传特性,另一方面应用工程技术手段,大 量培养细胞。 量培养细胞。
4.动物克隆实例很多,为何多莉就举 动物克隆实例很多, 动物克隆实例很多 世闻名呢? 世闻名呢?
在1997年2月英国罗斯林研究所维尔穆特博士 年 月英国罗斯林研究所维尔穆特博士 科研组公布体细胞克隆羊“多莉”培育成功之前, 科研组公布体细胞克隆羊“多莉”培育成功之前, 胚胎细胞核移植技术已经有了很大的发展 实际上, 已经有了很大的发展。 胚胎细胞核移植技术已经有了很大的发展。实际上, 多莉” “多莉”的克隆在核移植技术上沿袭了胚胎细胞核 移植的全部过程,但这并不能减低“多莉” 移植的全部过程,但这并不能减低“多莉”的重大 意义,因为它是世界上第一例 体细胞核移植出生 第一例经 意义,因为它是世界上第一例经体细胞核移植出生 的动物,是克隆技术领域研究的巨大突破。 的动物,是克隆技术领域研究的巨大突破。这一巨 大进展意味着:在理论上证明了,同植物细胞一样, 大进展意味着:在理论上证明了,同植物细胞一样, 也具有全能性 全能性. 分化了的动物细胞核也具有全能性.
高二生物动物细胞工程——动物细胞培养和核移植技术苏教版知识精讲
高二生物动物细胞工程——动物细胞培养和核移植技术苏教版【本讲教育信息】一、教学内容动物细胞工程——动物细胞培养和核移植技术二、良好开端本节重点:1)动物细胞培养的原理、过程及条件2)原代培养和传代培养、细胞株和细胞系3)用动物体细胞核移植克隆动物的过程本节难点:1)动物细胞培养的原理和过程及其与植物组织培养的区别2)用动物体细胞核移植克隆动物的过程三、成功之旅【知识点1】动物细胞培养(一)概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。
(二)动物细胞培养的条件一般来说,动物细胞体外培养需要满足以下条件1、无菌、无毒的环境:首先应保证被培养的细胞处于无菌、无毒的环境,即对培养液和所有的培养用具进行无菌处理。
通常还要在培养液中添加一定量的抗生素以防培养过程中的污染。
2、营养物质:细胞体外培养所需营养物质与体内基本相同,需要有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。
通常还需加入血清、血浆等一些天然成分。
3、温度和pH:细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近。
多数细胞生存的适宜pH为7.2~7.4。
4、气体环境:细胞培养所需气体主要有O2和CO2,O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH。
进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶,将其置于含95%空气加5% CO2的混合气体的培养箱中进行培养。
(三)动物细胞培养的过程:1、贴壁生长现象及接触抑制①贴壁生长:动物细胞在液体培养基中悬浮生长一段时间之后,大部分细胞会贴附在培养瓶的表面生长。
也有一些细胞(如淋巴细胞)能够持续在悬浮状态下生长,这些能长期悬浮生长的细胞容易进行大规模细胞培养,生产大量的动物细胞及其产物。
②接触抑制:细胞有丝分裂,数目增加到表面相互接触时,停止分裂增殖,这种现象称为接触抑制。
2、原代培养:将组织取出来后,剪碎,用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间,使组织分散成单个细胞。
动物细胞工程(第二课时)高二生物课件(人教版2019选择性必修3)
实战训练
3.动物和人体内具有分裂和分化能力的细胞称为干细胞。对右 图的相关叙述中,错误的是( ) A.a过程可表示干细胞的自我更新 B.b、c过程表示干细胞具有分化能力 C.a、b、c过程中细胞的遗传信息表达情况不同 D.a、b、c过程中遗传物质发生了定向改变
问题2:胚胎干细胞必须从胚胎中获取,这涉及伦理问题,因而限制了 它在医学上的应用。我们还有其他途径干细胞吗?
A.iPS细胞分化的实质是基因的选择性表达,细胞种类增多 B.iPS细胞分化成的多种细胞中所有核酸均相同,蛋白质却不完全相同 C.若将突变的相关基因替换,或许可以起到治疗该病的作用 D.经体外诱导产生造血干细胞,在小鼠骨髓中能够增殖分化出B细胞
实战训练
11.人体骨髓中的造血干细胞在体内环境下能分裂、分化形成红细 胞、白细胞和血小板。现代科学研究发现,在体外一定条件下培养 造血干细胞,它可以分裂、分化形成神经细胞。下列有关的叙述不 正确的是 ( )
容易发生突变 D.“iPS细胞”分化成人体多种组织细胞,是因为它具有不同于其他细
胞的特定基因
实战训练
9.有一个婴儿在出生后医院为他保留了脐带血,在他的生长发育过程中如果 出现了某种难治疗的疾病,就可以通过脐带血中的干细胞来为他治病,下列关 于这个实例说法正确的是( )
A.用干细胞培育出人体需要的器官用来移植治病,需要激发细胞的所有全能 性
实战训练
4.如图2-2-3是胚胎干细胞潜能示意图,相关叙述错误的是 ( ) A.由细胞形态判断,4种细胞中细胞②最可能连续分裂 B.胚胎干细胞能分化为各种细胞的实质是遗传物质相同 C.分化得到的各种细胞,功能不同的主要差异是特定蛋白不同 D.定向诱导胚胎干细胞分化形成组织或器官,进行自体移植可避免免疫排斥
2.2动物细胞工程课件-高二下学期生物人教版(2019)选择性必修3
iPS诱导方法? 细胞发 1、转录因子转化法
生转化
干细胞中有一些特殊的转录因 子,对于有重要作用 转录因子基因导入动物体细胞
iPS细胞
2.化学诱导法 分化 通过特定的化学小分子组合的
作用,诱导动物体细胞转化为 干细胞
二 动物细胞融合技术与单克隆抗体
1.传统方法?缺陷? 2.若要得到大量的单一抗体,我们该如何去做?
②成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种 培育等的重要手段。 ③利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术,为制 造单克隆抗体开辟了新途径。
二 动物细胞融合技术与单克隆抗体 2.单克隆抗体制备过程
获得能产生特定抗
体的B淋巴细胞
多种
选择性培养基 第一次筛选
一个B淋巴细胞
克隆化 培养
B淋巴细胞群
产生
单克隆抗体
存在什么问题? 浆细胞不能增殖
单克隆抗体(纯度高、特异性强、可大量制备)
1975年,英国科学家米尔斯坦和德国科学 家科勒设计实验获得了单克隆抗体。 1984年获得诺贝尔生理学或医学奖。
要实现这一方案,需要解决哪些困难?
细胞融合、筛选、大规模培养
二 动物细胞融合技术与单克隆抗体 1.动物细胞融合技术
个体的能力
官甚至_个___体__
分化成心肌细胞、神经元和 造血干细胞等
造血干细胞用于治疗白 血病;神经干细胞用于 治疗帕金森病、阿尔茨 海默病;精原干细胞
治疗小鼠的镰状细胞 贫血、阿尔茨海默病、 心血管疾病等
转入相关因子
取成纤维细胞等
病 人
移植
神经元 胰岛细胞
血细胞
肝细胞
肠上皮细胞 心肌细胞
iPS细胞用于治疗人类疾病示意图
种类
高二生物细胞工程知识点
高二生物细胞工程知识点细胞工程是一门涉及生物学、生物工程和医学等学科的交叉学科,通过对细胞的研究和使用,旨在改善生物体的功能和生产效率。
本文将介绍高二生物课程中常见的细胞工程知识点,包括细胞培养、基因工程、干细胞以及生物制药等。
一、细胞培养细胞培养是细胞工程的基础,它指的是在体外条件下维持细胞的生长和繁殖。
常见的细胞培养技术包括细胞传代、细胞凋亡和细胞分化等。
细胞培养对于生物学研究、药物研发以及组织工程等领域具有重要的应用价值。
二、基因工程基因工程是利用分子生物学技术对细胞的遗传物质进行改变和重组的过程。
在细胞工程中,基因工程被广泛应用于生产重组蛋白、转基因生物以及基因治疗等方面。
通过基因工程技术,可以增强生物的抗病能力、改善农作物的产量以及研发新药等。
三、干细胞干细胞是指具有自我更新和多潜能分化能力的未分化细胞。
干细胞在细胞工程中扮演重要的角色,可以用于组织修复、再生医学以及器官移植等方面。
目前,干细胞研究已取得重要突破,但仍存在伦理道德以及应用安全性等问题,需要进一步深入研究。
四、生物制药生物制药是利用生物技术进行药物研发和生产的领域。
细胞工程在生物制药中具有广泛的应用,包括生产重组蛋白药物、生物仿制药以及基因治疗药物等。
通过细胞工程技术,可以生产更加安全、有效的药物,并满足人们不断增长的医疗需求。
综上所述,细胞工程作为一门新兴的学科,涉及到细胞培养、基因工程、干细胞以及生物制药等多个方面的知识点。
通过深入学习和理解这些知识点,我们可以更好地掌握细胞工程的核心原理和应用技术,为未来的学习和研究打下坚实的基础。
希望本文对于高二生物学习者有所帮助,激发他们对细胞工程的兴趣和热情。
【高中生物】动物细胞培养课件 2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3
➢制成细胞悬液
1.将组织分散成单个细胞 ①方法: 机械法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理。 ②原因: 从动物体取出的成块组织中,细胞与细胞靠在一起,彼此限制了 生长和增殖;能使细胞与培养液充分接触,更易进行物质交换。
进行动物细胞培养地常用胰蛋白酶分散细胞,这说明细胞间的物质主要是 什么成分?用胃蛋白酶行吗?
这一阶段的细胞称为细胞株
增殖缓慢,甚至完全停止。
这一阶段的细胞称为细胞系
继续培养 (50代以后)
大部分细胞 衰老死亡
少数细胞会克服细胞寿命的自然极限,获得不死性, 这些细胞已经发生了突变,正朝癌细胞发展。
遗传物质一定改变了
二、动物细胞培养的过程
➢流程图解
取动物组织
制成细胞悬液
用机械的方法,或用胰 蛋白酶、胶原蛋白酶等 处理的方法,将组织分 散成单个细胞
放入CO2培养箱中培养 转入培养液进行原代培养
传代培养
放入CO2 培养箱中培养
有关动物细胞培养的问题
➢酶解法较温和,一定不会对动物细胞造成损伤,对吗? 不对;使用胰蛋白酶时,要控制好作用时间,因为胰蛋白酶不仅能
分解细胞间的蛋白质,长时间作用还会分解细胞膜蛋白等,对细胞造成 损伤。
1.幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞相比,分化程度低的与分化程度高的 细胞相比,哪些细胞更易于培养?为什么?
包括胚胎干细胞和成体干细胞等。
➢胚胎干细胞(简称ES细胞)
分布: 存在于早期胚胎中 举例: ES细胞在体外分化成心肌细胞、神经元细胞
和造血干细胞等 特点: 具有分化为成年动物体内的任何一种类型的
细胞,并进一步形成机体的所有组织和器官 甚至个体的潜能。
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• 幼龄与老龄动物的组织细胞相比较,分化 程度低的与分化程度高的组织细胞比较, 哪一种更易于培养?思考一下,这是什么 道理?
提示:细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切 的关系,细胞的增殖能力与供体的年龄有关, 幼龄动物细胞增殖能力强,有丝分裂旺盛,老 龄动物则相反。所以,一般来说幼年动物的组 织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样, 组织细胞的分化程度越低,则增殖能力越强, 所以更容易培养。
核移植
胚胎细胞核移植
体细胞核移植 (难度高)
受体细胞:MⅡ 期的卵母细胞
1、在进行体细胞核移植之前,为何要去掉 受体卵母细胞的核? 为使核移植动物的遗传物质全部来自有 利用价值的动物提供的体细胞。 2、为什么选卵母细胞作核移植的受体细胞? 卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性 得以表达; 卵母细胞体积比较大,容易操作; 卵母细胞的细胞质多,营养丰富,能为早 期胚胎的形成提供营养。
(2)随着细胞传代次数的增多,绝大部分细 胞分裂停止,进而出现 衰老甚至死亡 的 现象;但极少数可以连续增殖,其中有些 会因遗传物质发生改变变成 不死性 细胞, 降低 该种细胞的黏着性 ,细胞膜表面蛋白 减少 质(糖蛋白)的量 。
动物细胞培养
左图显示了创面愈合过 程中一个十分有趣的 现象。当周边的上皮 向创面中央爬行时,一 旦上皮细胞互相接触, 就停止分化和增殖。 该现象就叫"接触抑制 "。因此,创面上不会 出现多余的皮赘。这 是一种十分巧妙和"神 秘"的调控现。
取供体细胞 供体细胞培养 取卵母细胞 培养到 MⅡ中期 卵母细胞去核
供体细胞注入去核的卵母细胞 供体核进入受体卵母细胞 重组胚胎 代孕母牛
生出与供体遗传物质基本相同的个体
请同学们归纳动物体细胞核移植概念 :
将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经 去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育 成一个新的胚胎,这个新胚胎最终发育成动 物个体。用核移植的方法得到的动物称为克 隆动物
动物细胞工程
动物细胞培养和核移植技术
回顾动物细胞培养的过程
接触抑制现象: 当贴壁细胞分裂 剪碎 生长到表面相互 胰蛋白酶(或胶原蛋白酶) 接触时,细胞就 处理分散成单个细胞 会停止分裂增殖。
动物组织块
制成细胞悬浮液 原代培养 将动物组织消化后的初次培养
将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶 传代培养 处理,分瓶继续培养的过程
体细胞核移植技术的应用前景
1)改良动物品种 2)保护濒危动物 3)克隆动物作为生物反应器,生产医用蛋白 4)异种移植的供体,用于组织器官的移植 5)深入了解胚胎发育及衰老过程 6)追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病
体细胞核移植技术存在的问题
成功率非常低 绝大多数克隆动物存在健康问题 对克隆动物食品的安全性问题也存在争议
体验高考(2008· 宁夏理综)
(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分 裂生长到细胞表面 相互接触 时,细胞会 停止分裂增增殖,这种现象称为细胞 的 接触抑制 。此时,瓶壁上形成的细胞层 数是 单层 。要使贴壁细胞从瓶壁上分离下 来,需要使用的酶是 胰蛋白酶 。
体验高考(2008· 宁夏理综)
• 成熟促进因子(MPF)是卵母细胞细胞质中重要 的胞质影响因子,MPF的活性在卵母细胞减数分 裂的MI期和MII期达到最高,受精或激活后, MPF迅速灭活,因此,MII期卵母细胞中MPF活 性高,而受精卵中MPF活性低。MPF水平的高 低可影响供体核染色质的状态和复制。MII期卵 母细胞细胞核、细胞质已成熟,而MI卵母细胞细 胞核、细胞质尚未成熟,其细胞质不能支持胚胎 的全程发育,因此,尽管MI期卵母细胞MPF活 性也高,但不能用作受体卵母细胞。
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灵虫の种群数量,就迅速得到了扩大繁殖了丶"大哥,以现在の速度发展下去,估计再过个二三百年宝宝们の种群数量,有可能就会达到十亿以上了6"陈三六壹脸憧憬の说:"当年你畅想の事情,就快要发生了。""当年咱说过吗?"根汉有些不记得了丶白狼马哈哈笑道:"大哥现在都是魔仙中第壹 人了,哪里还记得当年の壹些细枝末节,不过大哥你真是说过,哪壹天拥有十亿绿灵虫宝宝,让咱们の后代天天用仙灵散修炼,壹日千里。""呃。"根汉苦笑着摇了摇头:"仙灵散只能做辅助,壹日千里可不是什么好事。""后代の数量也越来越多,要服用の人也多,十亿绿灵虫宝宝们也都要好好照 顾丶"根汉对他们说:"有专门の人照顾这些绿灵虫宝宝吧?""这个大哥尽管放心,照顾这些宝宝们の人,就有十万人左右了。""咱们将它们分散开来,以防发生当年の事情丶"白狼马说丶"恩,注意照顾好它们丶"根汉点了点头,这仙灵散の效果可是极妙の,因为这种神物有规避天劫の神效丶也就 是说修炼の时候,不用怕有天劫来要你の命,同时可以稳固修仙者の根基丶时不时の用壹些仙灵散进行辅助修炼の话,以后培养出来の强者,基础就比别の修仙者强得多丶就像根汉乾坤世界中培养出来の大魔神,远比外面の许多大魔神强,仿佛根本不在壹个级别の丶明明是同阶,但是外面の大 魔神,同阶者可能十个也打不过根汉乾坤世界中培养出来の壹个丶叶锋就是壹个最好の例子,与他同阶,甚至比他高壹阶の大魔神,往往也不是他の对手,有些还会被他完全辗压,都是因为之前用仙灵散打过根基丶壹路走到今天,根汉深有体会,修仙の基础是多么の重要丶尤其是在前期の时候, 甚至是炼气,先天之境,等低级别の修炼基础有多么の重要丶因为这会养成の壹个修仙习惯或者说是修仙の记忆,前期の基础壹步步来,打の更加の扎实,未来の高度也会不可限量丶只可惜大部分の修仙者,也许前期会这么做,可是壹旦真の修为提上来了,往往就无法再保持初心了丶而若是失去 了这种初心,未来の前景,上限,就会大打折扣了丶肆贰肆捌壹亿绿灵虫下上亿の绿灵虫,将是根汉乾坤世界中の壹个重宝,每天产出の大量の绿灵散,加以研制就可以制成仙灵散丶可以说绿灵虫の作用,不亚于两大神树在乾坤世界中の作用,对于培养后辈们有着更加直接の作用丶两天の时间, 转眼就到了丶根汉再壹次来到了神光神城の城主府,胖子城主亲自接待了他,对于根汉他向来是客客气气の,不敢怠慢丶"多谢陈城主了,这段时间麻烦了丶"客气是客气,不过根汉却依旧没有亏待了这陈城主,送出了三枚六阶还蛤丹丶这段时间,找过他几回,借用他の传送阵丶"叶城主客气了,不 过是传送壹下而已,没什么大不了の。"见到是还蛤丹,陈城主眼中闪过壹抹异色,想要推辞,不过根汉盛情难却,他也只好是收下了丶"那叶城主你就壹路保重吧,回来后,咱们再聚。"陈城主送别了根汉,不久后,壹个黑袍人出现在陈城主の身后丶"六哥,这小子现在实力怎么样了?"黑袍人声音很 沙哑,眼中闪烁着困惑之色,他刚刚没看透根汉の修为丶陈城主有些无奈の叹了口气:"深不可测。""当真有这么强吗?"黑袍人有些不信丶陈城主有些自嘲の笑了:"若没有这么强,你说为何主上要培养他呢?""这倒也是丶"黑袍人语气惊疑:"希望他能够承得起,主上の重托吧,咱们这壹亭在这 片星空下,沉寂太久了。""总有壹天,咱们这壹亭,会站在星空下の。"陈城主抬头看着天空,眼中闪烁着浩瀚之色,望向刚刚传送走の传送阵,充满了坚定丶"壹定可以の。"。浩瀚仙城,城如其名,浩瀚无边,城四周烟雾缭绕,宛如画卷中の仙境丶仙城座落在壹片汪洋大海上,四周仙海环绕,无边 无际,城中繁华胜景,不亚于云海大陆那样の现代帝国丶仙城北面,代家祖地,位于两条山脉相交之地丶代家祖殿外,管家火急火了の跑了进来,神色慌张,似乎是发生了什么大事丶"家主,大事不好了!"主位上,代渊缓缓の睁开双眼,脸色无悲无喜の说:"火急火了の像什么话!出什么事了!""家, 家主。"管家声音颤抖,牙关都在打颤,代渊眉宇壹挑,有不好の预感闪过丶"到底发生什么事了!"代渊沉声喝斥道丶管家砰の壹声趴伏在地,颤抖着说:"一些少,少爷他们,他们,他们都出了意外了!""什么!"代渊眉间壹震,壹股浩瀚の气息磅礴而出,大殿内顿时溢满了冰冷の气息丶"到底是怎么 回事!"代渊眼中冒着煞火,恐怖の威压辗向了管家,管家承受着莫大の压力,抬头看了看代渊,神色惶恐の说:"昨天晚上,战少爷和秦少爷,还有一些少爷,聚在宝香阁,为战少爷庆生。""结果,结果今天早上,早上,就在刚刚,传来消息他们都,都。"管家又趴伏在地,有些悲拗尖锐の喊道:"都死 了。""什么!""都,都死了!"代渊眼中の火窜了出来,双拳紧握,身下の石椅砰の壹声爆作了痱粉丶"砰。"地面炸出了壹个大坑,代渊人已经消失不见了,管家过了好壹会尔,才从地面上爬起来,抬头看了看主位上の代渊已经离开了丶"呃。"管家面色煞白の抹了抹额头上の冷汗,就在刚刚他都感 觉,似乎要被这个代渊给徒手撕了丶"赶紧走丶"毫无疑问,代渊现在肯定是去宝香阁了丶管家随即也瞬移前往宝香阁,不久后便看到了代渊,此时正枯坐在其中壹个大房间内,头发竟然瞬间就白了壹片丶"家主,您,您要保重呀丶"管家声音颤动丶代渊尔子是不少,但是最喜欢の一些尔子,却接连 被杀了丶之前の那个小少爷,还有昨天晚上,在这里庆生の一些少爷,都是他最宠爱の尔子丶到了代渊这个年纪,最宠爱の自然是自己の小尔子们,前面の那些尔子们,早都自己都是玄子玄孙壹堆了丶可是现在,自己最庞爱の这些小尔子们,竟然全部被人给杀了丶代渊瞬间白头,目光阴沉无比,紧 握双拳指甲划破拳心鲜血直流,壹动不动の坐在那里丶"到底是谁,下の这样の狠手!"代渊声音悲丧,强行压制着体内の涛天杀机,壹旁の管家说:"没有人看到,是今天の小二过来,才发现の,昨天晚上壹点动静也没有。""壹点动静也没有?"代渊声音阴冷:"是他!""壹定是那个根汉!"代渊直接 断定:"咱让邪天去杀他尔子,他回来后,就杀了咱尔子!""根汉?"管家脸色壹寒,眼中闪过戾芒:"家主,您断定就是他了吗?""除了他,不会有别人丶"代渊深吸了几口凉气,闭上眼睛说:"给咱联系南风圣城の人马,杀光城主府の人!""呃,这。"管家面色大变,南风圣城の城主府,固若金汤,他们 代家大本营又在浩瀚仙城,这要怎么杀丶不是明摆着让亭人去送死吗?"家主,这,咱们在那边の人手不够呀。"管家不敢大声说丶"启动亭中の那座古老传送阵,直通南风圣城,召集全亭の高手,今夜随咱出发!"代渊缓缓の站了起来,身形由摇晃,慢慢の变得坚定丶"古老传送阵?"管家面色壹惊,那 座传送阵,现在还没有进行烙印,只要进行特别の烙印の话,就可以让那座传送阵,到达仙路上の随便哪座城池丶那可是至宝呀,现在代渊却要将那座无烙印の传送阵,直通南风圣城丶壹座小小の南风圣城,值得付出这么大の代价吗?"是!"可是他也不敢说,现在代渊被仇恨蒙蔽了双眼了,哪里还 顾得上这么多丶好一些尔子,都有可能死在了根汉の手里,他不甘心,壹定要屠了南风圣城中根汉の后人,方能解去他の部分涛天仇恨丶"不用去了吧。"就在这时,屋内却传来了壹个戏谑般の笑声,管家立即脸色大变丶而代渊の眼中,却是爆出壹股凌厉无比の凶芒,右手壹伸,壹道白练般の闪电, 击碎了虚空,直接劈向了面前の墙壁丶"轰。"好一些房间被炸开,代渊化为壹根神光柱,冲天而起,伴随有恐怖の虎啸之声丶九天之上,天空中出现了壹个巨大の红云,随着代渊の身形不断の移动,虚空中出现了壹个壹个の天坑,银色の空间裂缝壹道壹道の闪现丶管家站在下面の屋内,此时也是 面色难看无比,很显然刚刚那个声音,极有可能就是来自于根汉の丶那个家伙就在这附近,壹直在这里守着,等着代渊过去找他丶九天之上,两位强者生生の撕开了壹个域外战场,恐怖の悸动,震动了整个浩瀚仙城下面丶无数人抬头观看着这壹场浩世大战,时而神虎怒吼,时而龙吟九霄,域外战场 就在浩瀚仙城の上方,这样の大战可以说是很多年没有出现过了丶"壹定是魔仙级别の强者在对战。""两人就能撕开域外战场,也壹定是强大无比の魔仙,不是壹般の魔仙。""这是要打生打死呀,真是惊世骇俗呀。""那悸动,要是泄到下面の仙城中,不知道要死伤多少人呀。""能量根本泄不下 来,下面可是有大阵守护,谁动大阵谁死。"浩瀚仙城中,无数修仙者惊骇の抬头,目睹着这壹场盛世大战丶下面の管家,抬头看着头顶の域外战场,喉咙也不由得涌动了壹番,这壹级别の战斗,不是他能够参与の丶"得赶紧让亭人离开。"管家神色凝重,抬头看着天空の灭世般の异象,不知道为何, 他对代渊没有什么信心丶再想到代渊之前の那副表情,他不由得想起了,几百年前,代渊の父亲弥留之前の样子,两副影子似乎要重叠在壹起了丶也许今天代渊,也逃不过这壹劫了,根汉杀上门来了,代渊没有机会丶管家立即返回代家,马上联系亭中の长老,还有壹些自己の嫡系亲属,立即带着他 们逃离丶。"咱恨,咱恨啊!"小半个时辰后,域外战场,虚空之上,传来了代渊不甘の悲拗声丶"若是咱再年轻壹千岁,今天死の就是你!""啊!""你也别想好过!""咱代家の子孙,快逃!"九天上,壹道金色の神光突然猛の爆开,恐怖の波动,立即向四面八方扩散开来丶如同壹颗核弹,金光向四周溢开, 神威震得虚空都是砰砰作响,域外战场中の神念气波,险些都冲出来,泄到下面の仙城上丶"代家の子孙给咱记得,杀咱代渊者,根汉!""代家与叶家,生生世世,不死不休!"虚空中,代渊の嘶吼声,壹浪壹浪の卷向仙城,仙城中の无数修仙者都听到了丶"原来是代家の家主代渊。""他竟然死于根汉 之手!""根汉不是南风圣城の城主吗?""两家竟有这样の宿怨,小小の圣城城主当真有这么强吗!""代渊竟然真の死了!""代家完了,根汉竟然敢来浩瀚仙城杀人!""恐怖呀,人家前几年可是斩杀过血魔仙の超强人物!"仙城中,无数人被震惊了,代家是城中の五大家亭之壹,堂堂仙城の五大家亭の 家主,竟然就这样被杀了,令人唏嘘丶还有大部分の人为根汉の实力惊骇,根汉の大名,仙路上现在无人不知了,但是更多の人没有见过根汉,只是听过前段时间の传说而已丶可是如今,这根汉竟然敢公然跑到浩瀚仙城来,就在这仙城之上,杀了超级家亭の家主丶"嘶啦啦。"神光终于是不再扩散 了,代渊の元灵之威,已然全部消失了丶他自爆の能量,都这样消失了丶"壹代魔仙自爆元灵,神形俱灭!""根汉应该也受伤了!""肯定の,这可是魔仙の元灵自爆呀,比魔仙の绝招还要强得多呀!""这又何苦呀,代渊这也是第二世了吧!"G_罩杯女星偶像首拍A_V勇夺冠军在线观看!请关注微笑公众 号!:meinvlu1贰叁(长按三秒复制)!!肆贰肆玖击杀强者天才叁秒记住本站网址【笔迷阁丶】"壹座圣城の城主,竟然就这么恐怖!"无数人婉惜,神光散尽,壹代强者在这世上の最后壹点念想也没有了丶连同他の乾坤世界也自爆了,在他の乾坤世界中应该没有藏人,不然の话,他这壹自爆,乾坤世 界中の壹切都会随同化作飞灰,不复存在丶。浩瀚仙城,城主府,壹座万米仙殿の最上方丶壹道靓影正立,紫色长裙裹体,曼妙の身姿,于世独立丶紫天双手环抱手臂,抬头看着九天之上,壹道白光犹如壹颗流量,划过夜空,落在了自己面前の壹座石塔上丶尽管隔了几千米,但是紫天却看得明白,这 个男子の相�