番荔枝内酯单体squamocin诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

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壳寡糖诱导肺癌细胞A549凋亡及其机制初探

下降且趋正常组水平，从而减轻肾脏负担。其中医机理可能与黄［４］ＥｌｉｓａｂｅｔｈＭ．Ｚｅｉｓｂｅｒｇ，ＳｃｏｔｔＥ．Ｐｏｔｅｎｔａ，ＨｉｋａｒｕＳｕｇｉｍｏｔｏ，ｅｔａ１．Ｆｉ — 芪丹参药对具有益气活血功能，针对肾纤维化气虚血瘀的中医机ｂｒｏｂｌａｓｔｓｉｎＫｉｄｎｅｙＦｉｂｒｏｓｉｓＥｍｅｒｇｅｖｉａＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ— — ｔｏ— — Ｍｅｓｅｎｅｈｙｍａｌ理等有关。ＴｒａｎｓｉｔｉｏｎＪ．ＪＡｍＳｏｃＮｅｐｈｒｏｌ，２００８，１９：２２８２．有研究表明，Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ表达的下调将可能破坏肾小管上［５］张新志，何立群．肾小管问质纤维化动物模型的研究进展［Ｊ］．时皮细胞的完整性，细胞因失去极性从而发生迁移。因此Ｅ—ｃａｄ — ６］ｈｅｒｉｎ可能是组成。肾小管上皮细胞间紧密连接的重要成分，在保［持细胞完整性和极性中起重要作用Ｊ，Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ的表达变化７］可能在肾小管上皮细胞转分化以及肾间质纤维化中起到了关键［的作用。研究发现ＵＵＯ所致大鼠肾间质ｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００８，４５３：６１７．究方面已经取得了较好的研究成果，而中药成分配伍研究，因其［２］李均，曹轶璇，王冬，等．黄芪丹参药对干预梗阻大鼠’ 肾小管种类较明确，有利于阐明机制，有利于促进中药方剂研究的现代上皮细胞转分化的研究［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１１，１０化和国际化 ’ 。本实验经黄芪丹参药对干预，发现其可降低血（１９）：１２９．清肌酐和尿素氮保护肾功能；肾脏病理变化减轻，且随用药量剂［３］董飞侠，何立群，黄迪，等．单侧输尿管结扎再通大鼠模型的建量增加，效果愈明显；各治疗组随用药浓度增加２４ｈ尿蛋白逐渐

番荔枝总提取物防治肝癌作用和机理研究

番荔枝总提取物防治肝癌作用和机理研究随着医药科技的进步，人类疾病谱已发生了很大的变化，心脑血管病和恶性肿瘤已成为人类死亡的最主要原因，因此肿瘤研究已逐渐成为医学科学发展的重点和焦点。

肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，防治工作现在还远不如人意。

番荔枝科植物及其化学成分具有很好的抗肿瘤作用，体外实验研究显示强大抑瘤效果，而体内实验不多，为此以番荔枝总提取物进行了防治肝癌的整体动物实验。

全文第一部分阐述了目前肝癌防治研究现状、中药抗肿瘤治疗作用及番荔枝科植物抗肿瘤作用的研究概况，揭示了番荔枝科植物在防治肝癌方面的可喜前景。

全文第二部分为实验研究。

首先，通过建立移植性肝癌的实体瘤模型，研究了圆滑番荔枝叶乙醇提取物(LAG)对小鼠肝癌HepS瘤体生长的抑制作用。

观察了抑瘤率、脾指数、胸腺指数、实体瘤的病理变化，及其对荷瘤鼠外周血细胞、肝肾功能和bcl-2／bax基因蛋白表达水平的影响。

结果显示圆滑番荔枝叶之醇提取物高、中、低剂量组抑瘤率分别达48.48％、47.72％、40.91％；光镜和电镜检测均发现给药组有较多的肿瘤细胞凋亡，发生特征性形态学改变，其bcl-2基因蛋白表达水平降低而bax基因蛋白表达水平提高。

其次，研究了圆滑番荔枝种子醇提取物之二氯甲烷部位(SAG)对小鼠肝癌HepS瘤体生长的抑制作用，结果显示圆滑番荔枝醇提取物之二氯甲烷部位高、中、低剂量组抑瘤作用分别达67.42％、65.15％、63.63％。

光镜和电镜检测均发现给药组有较多的肿瘤细胞凋亡，发生特征性形态学改变，其bcl-2基因蛋白表达水平降低而bax基因蛋白表达水平提高。

结论提示圆滑番荔枝种子醇提取物之二氯甲烷部位(SAG)具有较显著的抗肿瘤作用。

抑制作用机理之一在于对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。

最后，制作了大鼠肝癌前病变模型，研究了番荔枝总提取物((AGE)对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌的防治作用。

利用肝组织病理学、免疫组化、血清和组织生化等检测方法，观察了番荔枝总提取物对DEN所诱发肝癌形成的影响。

番荔枝内酯类化合物基于耐阿霉素肝癌细胞SMMC—7721／ADR的构效关系研究

番荔枝内酯类化合物基于耐阿霉素肝癌细胞SMMC—7721／ADR的构效关系研究研究12种番荔枝内酯类化合物对耐阿霉素肝癌细胞SMMC-7721/ADR的作用，并初步探究其构效关系。

实验利用实时荧光定量PCR法检测12种番荔枝内酯类化合物：annosquamin A（1），annosquamin B（2），annotemoyin-1（3），uvariamicin Ⅱ（4），annosquacin D（5），annosquacin B（6），isodesacetyluvaricin （7），uvarigrandin A（8），squamostatin D（9），squamostatin E（10），squamostatin A（11），12，15-cis-squamostatin A（12）对SMMC-7721/ADR细胞中相关基因NDUFV2的表达量。

该研究发现所有受试化合物均使SMMC-7721/ADR中NDUFV2表達量有所下调，邻双四氢呋喃环型番荔枝内酯活性最强，而间双四氢呋喃环型番荔枝内酯活性最弱。

内酯环与邻近的四氢呋喃环间碳数越少，作用越强；对于邻双四氢呋喃型番荔枝内酯化合物，链上含有的羟基个数越多，化合物作用可能越强；对于间双四氢呋喃型番荔枝内酯化合物，链上含有的羟基个数越少，化合物作用可能越强；且受试化合物中均是含有3个羟基取代的化合物作用较强；相对构型为苏式的番荔枝内酯的作用比赤式的强，四氢呋喃环为顺式构型的番荔枝内酯的作用比反式的强；在其他基团完全相同的情况下，长链烷基端部与邻近的四氢呋喃环之间的碳数越少，作用越强。

标签：番荔枝内酯；多药耐药；SMMC-7721/ADR；构效关系[Abstract] The present research was launched to investigate the effects of 12 annonaceous acetogenins （ACGs）on human hepatic carcinoma cell line SMMC-7721/ADR，and to find out their structure-activity relationship. SMMC-7721/ADR cells were treated with 12 ACGs including annosquamin A（1），annosquamin B（2），annotemoyin-1（3），uvariamicin Ⅱ（4），annosquacin D（5），annosquacin B（6），isodesacetyluvaricin（7），uvarigrandin A（8），squamostatin D （9），squamostatin E（10），squamostatin A（11），and 12，15-cis-squamostatin A （12）for 24 h，and the different expression of the target gene NDUFV2 were detected by quantitative real-time PCR. All the tested compounds made the expression of the target gene NDUFV2 decreased on human hepatic carcinoma cell line SMMC-7721/ADR，of which the bistetrahydrofuran ACGs showed the best activity，which the non-adjacent bistetrahydrofuran ACGs displayed the worst activity.The ACGs with the reducing number of carbons between γ-unsaturated lactone and the close tetrahydrofuran （THF）ring are more potent. For bistetrahydrofuran ACGs with the same nucleus skeleton，they would be more active as more hydroxyls on aliphatic chain，which for the non-adjacent bistetrahydrofuran ACGs with less hydroxyls on aliphatic chain that would be more active. ACGs with 3 hydroxyls on aliphatic chain would be more active. ACGs with threo configuration are more active than erythro configurotion，and the compounds with cis THF ring seem to be superior to those of trans THF ring. Furthermore，the ACGs with the reducing number of carbons between terminal methyl and the close tetrahydrofuran （THF）ring are more potent.[Key words] annonaceous acetogenins；multidrug resistance；SMMC-7721/ADR；structure-activity relationship番荔枝Annona squamosal L.为番荔枝科Annonaceae番荔枝属Annona植物，广泛分布于热带及亚热带地区，我国的广东、广西、云南及海南等南方多数城市均有栽培[1]，据《中华本草》[2]记载：番荔枝科番荔枝属植物番荔枝的干燥成熟种子，性味苦、寒，归心、肺、肝、肾、脾经，其功效為消积杀虫、清热解毒、解郁、止血。

国外近8年番荔枝内酯类化学成分研究进展_李洁兰

201第11卷第12期 2009 年 12 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 11 No. 12 Dec . ，2009番荔枝内酯(annonaceous acetogenins)是1982年发现的一类强抗肿瘤活性的长碳链脂肪酸内酯，主要分布于该科Annona(番荔枝属)、Uvaria(紫玉盘属)、Asimina（泡泡树属）、Goniothalamus(哥纳香)、Rollinia（卷团属）、Polyalthia（暗罗属）、Xylopia（木瓣树属）等12属中，至今已发现350多种同系物。

番荔枝内酯就其化学结构主要分为：邻双-四氢呋喃环化合物、非邻双-四氢呋喃环化合物、单-四氢呋喃环化合物、三-四氢呋喃环化合物、非四氢呋喃环化合物。

对2000—2008年国内外发表的有关番荔枝内酯化学成分研究进行综述。

1　Rollinia属Lúcia P Santos Piment [1]从Rollinia laurifolia 叶子中分离得到一个新的结构（经鉴定是具有35个碳原子的单-四氢呋喃类番荔枝内酯），命名为laurifolin。

2　Asimina属Mi-Hee Woo [2]从Asimina triloba 种子中分离出2个具有γ内酯结构的单四氢呋喃类番荔枝内酯：asitrilobins C-D。

3　Annona属3.1　Annona glabra 种X. Liu [3]从叶子的醇提部分中分离并鉴定出2个新的邻位双四氢呋喃型番荔枝内酯：6-OH- desacetyluvaricin 和6-OH-4-deoxysquamotacin。

3.2　Annona montana 种L. Wang [4]从叶子（中国海南产）的乙醇提取部分先后分离得到：单-四氢呋喃结构的番荔枝内酯montanacins B-E （montanacins D 及montanacins E 是非邻四氢吡喃-单四氢呋喃结构）；异-番荔枝内酯、montanacin G（具有末端2，4-反式-酮内酯环结构的异-番荔枝内酯）、montanacin H-J、34-epi-montanacin H-J （montanacin H-J 具有γ-甲氧基-γ-甲基-γ-内酯结构）以及4种已知结构的番荔枝内酯（gigantetrocins A 和B, annonacin 和cis-annonacin）；番荔枝内酯montanacin F（具有内酯结构的番荔枝内酯结构）。

番荔枝内酯对人淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响

番荔枝内酯对人淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的研究番荔枝内酯对体外人淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响及其可能机制。

方法将体外培养的Raji细胞分为番荔枝内酯组、阿霉素对照组及未干预组,番荔枝内酯药物浓度按6.25、12.5、25、50 μg/mL分级作用于细胞。

采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化染色检测各组细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达情况。

结果番荔枝内酯组细胞增殖率均低于未干预组,25、50 μg/mL药物浓度组细胞增殖率低于阿霉素组,增殖率与浓度及培育时间负相关；番荔枝内酯组细胞凋亡率高于未干预组,25、50 μg/mL药物浓度组凋亡率高于阿霉素组,和浓度、时间正相关；与未干预组相比,番荔枝内酯组caspase-9表达量逐步增加,与阿霉素组比较,6.25 μg/mL组caspase-9表达低于阿霉素组(P＜0.05),50 μg/mL浓度组表达高于阿霉素组(P＜0.05)。

结论番荔枝内酯对体外人淋巴瘤Raji细胞的增殖有抑制作用,并可能通过线粒体途径促进其凋亡。

【关键词】番荔枝内酯；抗肿瘤；凋亡；增殖；caspase-9；Raji 细胞Abstract：Objective To investigate the effects of annonaceous acetogenin on proliferation and apoptosis in Raji cells and its mechanism. Methods Raji cells cultured in vitro were divided into control group, annonaceous acetogenin group and adriamycin group. Raji cells were effected by 6.25, 12.5, 25, 50 μg/mL annonaceous acetogenin. Proliferation of Raji cells were evaluated by MTT assays, apoptosis percentage was assessed by flow cytometry. Caspase-9 protein was detected by immunohistochemistry. Results The Raji cell proliferation rate of annonaceous acetogenin decreased compared with the control, that of 25, 50 μg/mL group were lower than adriamycin group, and it was related to the concentration, relying on the incubating time. The apoptosis rate was higher than control, that of 25, 50 μg/mL group were higher than adriamycin group, and it was related to the concentration and the incubating time. The expression of caspase-9 protein of annonaceous acetogenin group was higher than control, and it had a positively relationship with the concentration and incubating time. Conclusions Annonaceous acetogenin could inhibit cell proliferation in a dose-dependent and time-dependent manner in Raji cells, and it may induce Raji cellsapoptosis by up-regulating caspase-9 expression.Key words：annonaceous acetogenin；antitumor；apoptosis；proliferation；caspase-9；Raji cell番荔枝(Annona squamosa Linn.)为番荔枝科番荔枝属植物,我国广东、广西、海南、福建、云南等省及台湾地区均有栽培,东南亚、南美国家及地区也有广泛分布。

番荔枝内酯单体Desacetyluvaricin对肝癌细胞株生长和凋亡的影响

Ｄｅｓａｃｅｔｙｌｕｖａｒｉｃｉｎ抑制肝癌细胞增殖的机制可能为阻滞肝癌ＨｅｐＧ２．２．１５细胞从Ｇ。期进入Ｓ期，从而抑制了肿
瘤细胞的增殖．同时通过促进Ｆｓ表达，ａ诱导ＨｅｐＧ２．２．１５细胞凋亡。其诱导Ｆｓ表达的效果还优于顺铂。【ａ结论】Ｄｅｓａｃｅｔｙｌｕｖａｒｉｃｉｎ可能通过延缓细胞Ｇ。期及诱导细胞凋亡等机制，对肝癌细胞的增殖有一定的抑制作用。
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｉｔｖｅ】Ｔｏｉｎｖｅｓｉｔｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｄｅｓａｃｅｔｙｌｕｖａｒｉｃｉｎｏｎｈｅｔｇｒｏｗｔｈｎｄａａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｔｒａｉｎａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎｖｉｔｒｏ．【Ｍｅｈｏｔｄ】ＨｕｍｎａｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓＨｅｐＧ２．２．１５ｉｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｉｔｖｅ
ＣＨＥＮＸｉａｏ－ｙｉｎ，ＺＨＯＵＧｕａｎｇ－ｘｉｏｎｇ２，ＺＨＡＯＣｈａｎｇ－ｌｉｎ，ＸＩＡＦａｎｇ，ＭＡＯＨｕｉ－ｊｕｎ，

白藜芦醇诱导肺癌A549细胞凋亡_刘盛楠

研究报告Research Report白藜芦醇诱导肺癌A549细胞凋亡刘盛楠邵淑丽*隋文静张伟伟赵彬陈微微齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,齐齐哈尔,161006*通讯作者,shshl32@摘要本实验以人肺腺癌A549细胞为实验对象，白藜芦醇(Res)诱导细胞凋亡的效应及其机制进行了研究。

用不同浓度Res 处理A549细胞48h 后，癌细胞的形态和生物学反应发生了明显的变化。

为了确证这些变化是特征性的细胞凋亡现象，采用MTT 法检验了细胞存活率；光学和荧光显微镜观察了细胞形态结构；流式细胞术分别检测了细胞凋亡率、细胞周期和线粒体膜电位(ΔΨm)；Real Time RT-PCR 和Western blot 测定了Bcl -2/Bax 表达水平。

结果显示，白藜芦醇能够抑制A549细胞生长，并呈剂量依赖性关系，经Res 处理后的A549细胞48h 的最佳药物浓度是30μmol/L ，增殖抑制率为(60.85±0.84)%，显微镜下观察细胞呈明显凋亡现象，细胞凋亡率为(17.44±0.28)%，ΔΨm 显著下降(p <0.01)，使细胞阻滞于G 2期和S 期；下调Bcl -2，使Bax 的表达明显增加，从而导致Bcl -2/Bax 比值显著降低(p <0.01)。

这些结果表明白藜芦醇可能通过调节Bcl -2/Bax 基因的途径，诱导人肺腺癌A549细胞凋亡，并抑制癌细胞的进一步增殖。

关键词凋亡,白藜芦醇,A549细胞,Bcl -2/BaxResveratrol Induces the Apoptosis of Human Lung Cancer A549CellsLiu Shengnan Shao Shuli *Sui Wenjing Zhang Weiwei Zhao Bin Chen WeiweiCollege of Life Sciences and Agriculture and Forestry,Qiqihar University,Qiqihar,161006*Corresponding author,shshl32@ DOI:10.13417/j.gab.034.000685Abstract In order to explore the molecular mechanism for the apoptosis trigged by resveratrol on human lung cancer A549cells,the effects of resveratrol were studied by MTT,light microscope,fluorescence microscope,flow cytometry,Real Time RT-PCR and Western blot.After the A549cells treated with various cencentrations of Res for 48hours,the the mophology of the cells changed clearly.To characterize the changes related to apoptosis,the survive rate of the cell was determined by MTT;the cell structures were observed by light microscope and fluorescence microscope;the apoptotic rate,the cell cycle and the potential (ΔΨm)of mitochondrial membrane were investigated by flow cytometry;the expression levels of Bcl -2/Bax gene were explored by real-time qPCR and western blot.The results showed that the growth of the A549cells was inhibited by Res,and correlated with the dossage.The concentration for the treatment was optimized to 30μmol/L in this study.The inhibition rate was up to (60.85±0.84)%for the proliferation.The apoptotic rate was reached to (17.44±0.28)%under the microscope.The potential of mitochondrial membrane (ΔΨm)decreased heavely,a significant S arrest ocurred with the cell loss of G 1and G 2-M phase.Importantly,the expression levels of Bcl -2decreased and the expression level Bax gene increased,so that the ratio of Bcl -2/Bax declined significantly.These results suggest that resveratrol could induce the apoptosis of cancer cells and inhibit their proliferation on A549cell line by regulating the gene expression of Bcl -2and Bax .Keywords Apoptosis,Resveratrol,A549cells,Bcl -2/Bax基金项目：本研究由黑龙江省教育厅科学技术项目(批准号:11511447、12511611)和黑龙江省自然科学基金(批准号:C200624、C201241)共同资助基因组学与应用生物学，2015年，第34卷，第4期，第685-691页Genomics and Applied Biology,2015,Vol.34,No.4,685-691白藜芦醇(resveratrol,RES)是一种非黄酮类多酚化合物，广泛存在于葡萄属植物中，目前已在70多种植物中被发现。

紫草素衍生物诱导肺癌细胞A549细胞周期阻滞及细胞凋亡

山　东　化　工收稿日期：２０２０－０５－１９基金项目：黑龙江省大学生创新训练项目（２０１９１０２２３０２７）；黑龙江省农垦总局推广项目（２０１９ＨＫＱＮＪＴＧ００２５）；黑龙江省普通本科高等学校青年创新人才培养计划（ＣＸＲＣ２０１７０１６）作者简介：郝莹莹（１９９９—），女，本科生，研究方向为萘醌类研生物的合成；通信作者：申贵男（１９８０—），讲师，博士，研究方向为萘醌类衍生物的合成设计。

紫草素衍生物诱导肺癌细胞Ａ５４９细胞周期阻滞及细胞凋亡郝莹莹１，于佳斌１，练旭冬２，谢丹萍１，毛莹莹１，刘晓冬１，贺鑫梅１，金成浩１，申贵男１（１．黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，黑龙江大庆　１６３３１９；２．黑龙江八一农垦大学食品学院，黑龙江大庆　１６３３１９）摘要：以１，４－二甲氧基苯和马来酸酐为原料，合成５，８－二甲氧基萘－１，４－二酮，通过加成反应分别制备亚砜和氨基的２－取代萘醌类衍生物ａ和ｂ，采用ＭＴＴ实验检测两种化合物诱导肺癌细胞Ａ５４９细胞周期阻滞及细胞活性，探讨二者的结构与活性关系，并阐述其导致细胞周期阻滞及细胞凋亡的具体作用机制。

结果证明，化合物ａ通过激活抑癌基因Ｐ５３及丝裂原活化蛋白激酶信号通路对Ａ５４９细胞增殖有显著抑制作用，同时可以显著促进细胞凋亡；而化合物ｂ并无显著作用。

关键词：紫草衍生物；Ａ５４９；细胞周期阻滞；细胞凋亡中图分类号：Ｑ２９１；Ｒ２８５文献标识码：Ａ文章编号：１００８－０２１Ｘ（２０２０）１４－００１０－１５ＳｈｉｋｏｎｉｎＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｓＩｎｄｕｃｅＣｅｌｌＣｙｃｌｅＡｒｒｅｓｔａｎｄＡｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＬｕｎｇＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＬｉｎｅＡ５４９ＨａｏＹｉｎｇｙｉｎｇ１，ＹｕＪｉａｂｉｎ１，ＬｉａｎＸｕｄｏｎｇ２，ＸｉｅＤａｎｐｉｎｇ１，ＭａｏＹｉｎｇｙｉｎｇ１，ＬｉｕＸｉａｏｄｏｎｇ１，ＨｅＸｉｎｍｅｉ１，ＪｉｎＣｈｅｎｇｈａｏ１，ＳｈｅｎＧｕｉｎａｎ１（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＢａｙｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｑｉｎｇ　１６３３１９，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＢａｙｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｑｉｎｇ　１６３３１９，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎｅｗｓｕｌｆｉｎｙｌａｎｄａｍｉｎｏｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｏｆ５，８－ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ－ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ－１，４－ｄｉｏｎｅｗｈｉｃｈｉｓｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｂｙｒｅａｃｔｉｏｎｏｆ１，４－ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｅｎｅａｎｄｍａｌｅｉｃａｎｈｙｄｒｉｄｅ．Ｔｈｅｓｅｔｗｏｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓａ，ｂｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙｔｏｔｅｓｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＡ５４９ｃｅｌｌｓ，ａｎｄｔｏｃｌａｒｉｆｙｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ａｃｔｉｖｉｔｙｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐａｎｄｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅｉｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｃｏｍｐｏｕｎｄａｃｏｕｌｄｉｎｈｉｂｉｔｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｂｙａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐ５３ａｎｄｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｓ（ＭＡＰＫｓ）ｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙ，ｗｈｉｌｅｃｏｍｐｏｕｎｄｂｈａｄｎｏｅｆｆｅｃｔｏｎＡ５４９ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｈｉｋｏｎｉｎｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ；Ａ５４９；ｃｅｌｌｃｙｃｌｅ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ紫草为多年生传统中药材，可治疗丹毒、烧伤等疾病［１］，其中以紫草素（Ｓｈｉｋｏｎｉｎ）为主要代表的萘醌类化合物是紫草中含量较多的化学活性成分［２］。

鬼臼毒衍生物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

鬼臼毒衍生物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡【关键词】鬼臼毒素；肺肿瘤；腺癌；,细胞凋亡；抗原,CD95；基因,BclApoptosis in human lung adenocarcinoma cell line A549 by derivative of podophyllotoxin【Abstract】AIM: To study the apoptosis of human lung adenocarcinoma A549 cells induced by CN2, a derivative of podophyllotoxin, and to obtain insights into its molecular mechanism of action. METHODS: MTT assay, electron microscopy, DNA agarose gel electrophoresis and cell cycle ananlysis were used to examine apoptosis in A549 cells. Expressions of Bcl2, caspase 3 and Fas proteins were measured with flow cytometry. RESULTS: CN2 was demonstrated to exert antiproliferative activity in a dose and timedependent manner. IC50 of A549 after 24, 48, 72 h exposure to CN2 was 108.20, 41.28, 20.67 mg/L, respectively. Typical apoptotic morphological changes were observed by electron microscope; agarose gel electrophoresis showed an evident DNA fragmentation; cell cycle analysis indicated an increased S phase proportion,as well as an apparent S/G2 phase arrest. CN2 decreased Bcl2 protein expression (P<0.05) dramatically . Fas protein expression showed no obvious changes. CONCLUSION: CN2 could inhibit the growthof A549 cells via the induction of S/G2phase arrest, which is probably associated with the decreased Bcl2 expression and cell cycle arrest.【Keywords】podophyllotoxin; lung neoplasms; adenocarcinoma; apoptosis; antigens, CD95; genes, Bcl2【摘要】目的：研究鬼臼素衍生物CN2对人肺腺癌细胞A549的凋亡诱导作用，并对其分子机制进行初步探讨. 方法：采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和细胞周期分析法检测A549细胞凋亡；采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl2, Fas及caspase3蛋白表达水平. 结果：CN2对A549细胞增殖具有明显的剂量和时间依赖的抑制作用，24, 48, 72 h IC50分别为108.20, 41.28, 20.67 mg/L，电镜观察呈现典型的凋亡形态改变；DNA电泳可见明显的梯状条带；细胞周期分析显示S期细胞数明显增多，出现S/G2期阻滞；CN2能显著降低Bcl2蛋白表达(P<0.05)；Fas蛋白表达水平未见明显变化. 结论：CN2通过诱导A549细胞发生S/G2期阻滞而抑制其增殖，其机制可能与下调Bcl2表达及阻滞细胞周期有关.【关键词】鬼臼毒素；肺肿瘤；腺癌；细胞凋亡；抗原，CD95；基因，Bcl20引言鬼臼毒类化合物用于民间药物治疗已有较长的历史，目前临床上比较成熟的药物依托泊甙（etoposide, vp16）和替尼泊甙（teniposide, VM26）对小细胞肺癌有良好的疗效. 但由于此类化合物水溶性差、抗瘤谱窄及具有较严重的骨髓抑制作用等不足使其应用受到限制［1］. 自旋标记化合物CN2是一种引入了氮氧自由基的去甲表鬼臼毒（4β［2”, 2, 6”, 6四甲基1”, 2”, 5”, 6”四氢吡啶氮氧自由基4”西佛碱丁基］4脱氢4去甲表鬼臼毒,英文名为4β［2”, 2, 6”, 6tetramethyl1”, 2”, 5”, 6”tetrahydro pyridine nitroxyl4”shiffs base］4deoxy4demethyl epipodophyllotoxin），其同类化合物可显著抑制小鼠移植性肿瘤白血病P388和实体瘤S180，可以诱导Raji细胞、NB4细胞凋亡［2-3］. 我们观察了CN2对人肺腺癌A549细胞的凋亡诱导效应，并对其作用机制进行了初步探讨.1材料和方法1.1材料鬼臼毒素由兰州大学化工学院合成，用DMSO配成8 g/L的贮备液，-20℃冻存备用. MTT购自Sigama公司. 流式细胞术（FCM）用单抗（FITC标记的鼠抗人Fas mAb和鼠IgG1同型对照，FITC标记的美国仑鼠抗人Bcl2 mAb和美国仑鼠抗人单克隆IgG同型对照），为美国Caltag产品. A549细胞株购自中科院上海细胞生物学研究所. 细胞贴壁生长于含100 g/L小牛血清（杭州四季青生物工程公司产品）的RPMI1640（Gibcol BRL公司）完全培养基中，用含2.5 g/L 胰酶的消化液进行传代,置37℃, 50 mL/L CO2孵箱中培养. 实验时选用对数生长期细胞.1.2方法细胞增殖活性检测采用MTT比色法，将细胞密度调整为1×108/L，接种于96孔培养板（Costar），每孔100 μL,实验组分别加入不同浓度（10, 20, 40, 80 mg/L）CN2,对照组加入等体积PBS,另设只加完全培养液的调零组,每组4个复孔,饱和湿度条件下,37℃, 50 mL/L培养箱中培养,分别于24, 48, 72 h加入MTT 10 μL/孔. 继续培养4 h，每孔加入100 g/L的SDS 100 μL终止培养，37℃过夜，用酶联免疫检测仪测定570 nm波长处A值，计算细胞生长抑制率和半数抑制浓度（IC50）. 细胞经80 mg/L CN2作用48 h后用2.5 g/L胰酶消化，收集细胞悬液离心（900 r/min）5 min, 30 g/L戊二醛固定48 h, 10 g/L 四氧化锇染色，经梯度脱水，Epon812包埋，超薄切片，铀铅双染子显微镜（JEM1230，日本电子公司）观察细胞超微结构，美国Gatan 公司CCD采集系统照相［4］. 收集80 mg/L CN2作用48 h后的细胞，常规提取DNA, 15 g/L琼脂糖凝胶，75 V, 50 mA电泳1.5 h，应用凝胶图像分析系统（北京鼎永科技有限公司产品）观察. 细胞周期分析，CN2作用24, 48 h后，收集A549细胞，PBS洗涤，700 mg/L冷乙醇固定，PI染色，FCM（Coulter EPICS XL）检测细胞周期时相的分布. A549细胞经CN2作用12, 24 h，收集1×106个细胞，PBS洗涤. 加入FITC标记的鼠抗人Bcl2 mAb，鼠抗人Fas mAb及鼠IgG1同型对照后，FCM分别检测Bcl2, Fas及caspase3蛋白的阳性表达率和平均荧光强度［5］.2结果2.1CN2抑制A549细胞增殖A549细胞经CN2作用24, 48, 72 h后,代谢MTT的能力明显降低,显示较强的细胞毒性反应,呈剂量效应、时间效应依赖关系,CN2浓度为X轴，抑制率为Y轴，用Excel 作图，分别得到不同时间段的直线回归方程:Y24h=-0.53+0.467X，Y48h=14.872+0.851X, Y72h=33.549+0.796X,由此可得24, 48, 72 h的IC50估计值分别为108.20, 41.28, 20.67 mg/L (图1). 所用统计学软件为SPSS12.0.2.2CN2诱导A549细胞凋亡经不同浓度CN2处理A549细胞48 h后，电镜下依次出现染色质凝集并边集、核碎裂及凋亡小体形成等凋亡的典型形态学改变，其次线粒体肿胀也可见（图2）.2.3对细胞周期的影响经20, 40 mg/L CN2作用24, 48 h后,S 期细胞所占比例与对照组比较均增加（P<0.01）,且随浓度增高而增多, 以40 mg/L CN2作用48 h时增加幅度较大,为同期生长的对照细胞的2倍,G2/M期细胞减少显著，提示细胞发生S/G2期阻滞(表1).图1CN2对A549细胞生长的抑制（略）A：正常肿瘤细胞；B：20 mg/L CN2作用后，部分线粒体肿胀；C：40 mg/L作用后，出现染色质边集现象；D：80 mg/L作用后，有凋亡小体形成.图2A549细胞铅铀双染的电镜照片×8000（略）表1CN2作用后A549细胞的周期分布（略） 2.4DNA琼脂糖凝胶电泳CN2作用48 h后出现典型梯状条带（图3）.M: 200 bp marker; 1: 80 mg/L; 2: 40 mg/L; 3: 20 mg/L; 4: 对照组.图3CN2对A549细胞凋亡的影响（略）2.5CN2对A549细胞Bcl2, Fas蛋白表达的影响CN2处理后的A549细胞，Bcl2蛋白表达在CN2处理组较对照组显著降低（P<0.05）,高剂量CN2组降低Bcl2蛋白的作用大于低剂量CN2组, Bcl2蛋白下调以40 mg/L CN2作用12 h时最明显,为对照组的3.2倍. CN2作用前后Fas的表达水平变化不明显（表2）.表2CN2对A549细胞Bcl2, Fas蛋白表达的影响（略）PR：阳性率，MFI：平均荧光强度.3讨论鬼臼毒类衍生物属细胞周期依赖性和特异性抗肿瘤药物，其抗癌机制可能与拓扑异构酶Ⅱ有关［6］，对S末期细胞具有较强的杀伤作用. 关于这方面已有较成熟的理论. 本实验使用的鬼臼毒的衍生物CN2对A549细胞表现出了明显的增殖抑制作用和凋亡诱导作用，导致A549细胞出现典型的形态和生化改变. CN2可使A549细胞发生S期阻滞，提示它可以阻止A549细胞由S期向G2期转变，抑制肿瘤细胞分裂和增殖，这进一步证实了加入氮氧基后的鬼臼毒仍保持了其母体的抗瘤活性.药物诱导肿瘤细胞凋亡的调控机制非常复杂，两种直接途径是死亡受体途径和线粒体途径［7］. Bcl2家族是参与细胞生存或凋亡的重要调节蛋白，与线粒体途径密切相关. Bcl2蛋白分布于线粒体外膜、内质网表面及核膜,具有稳定线粒体膜功能、阻止线粒体释放Caspase及凋亡诱导因子（AIF），细胞色素C等作用. 研究发现，位于线粒体膜的Bcl2抗凋亡能力明显高于其他部位［8］. Bcl2蛋白可作用于线粒体通透性转换孔（PTP）相关蛋白，阻止PTP开放，维持ΔΨｍ,从而阻止细胞凋亡早期阶段PTP释放及由此引起染色质浓缩和DNA断裂的蛋白质. 另研究显示Bcl2基因过度表达能够维持正常ΔΨｍ,而阻止细胞凋亡［9］. Bcl2抗细胞凋亡的另一个机制是抗氧化力,抑制其诱导细胞凋亡. Bcl2能够抑制Ros诱导细胞凋亡,并认为其可能与线粒体SOD反应而起作用. 我们研究发现CN2可以下调Bcl2蛋白的表达水平，且呈时间、浓度依赖性，推测通过降低Bcl2蛋白的水平引起线粒体内膜通透性的改变及随后的线粒体的释放反应（细胞色素C由线粒体膜间隙进入胞质）是CN2诱导A549细胞凋亡的机制之一. Fas抗原（APO1或CD95）是细胞表面的一种凋亡信号受体，属于死亡受体途径中的死亡信号蛋白，Fas蛋白表达越高的细胞通过与自身Fas配体相互作用引起细胞自杀性死亡即凋亡的作用越强. 我们的实验研究发现，CN2作用前与作用后Fas蛋白表达水平相对都较低，其原因可能有①Fas可能不参与CN2诱导的A549细胞的凋亡；②实验重复性差. 关于CN2的研究还在进一步深入中.【参考文献】［1］张艰,戚好文,吴昌归. 姜黄素对A549人肺腺癌细胞增殖抑制作用及其机制的研究［J］. 第四军医大学学报,2004,12（27）:923-926.［2］Dinsdale D, Lee JC, Dewson G, et al. Intermediate filaments control the intracellular distribution of caspases during apoptosis［J］. Am J Pathol, 2004,(164):395-407.［3］扬桦,田暄,张辅民. 4β卢代芳香酸4去甲表鬼臼酯类的合成及抗肿瘤活性［J］. 兰州大学学报(自然科学版),2004,38(2):101-105.［4］武忠弼. 超微病理诊断学［M］. 上海：上海科学技术出版社,2003,27-29.［5］Baffa LC, Scarfi S, Mariani MR, et al. Dihydrotestoterone as a selective cellular/nuclear location vector antigene peptide nucleic acid in prostatic carcinoma cells［J］. Cancer Res, 2002,60(8):2258-2262.［6］Tian X, Zhang FM, Li WG. Antitumor and antioxidant activity of spin labeled derivatives of podophyllotoxin(GP1)and congeners ［J］. Life Sci,2002,70(20):2433-2443.［7］阎玲. 砷剂诱导肿瘤细胞凋亡机制研究进展［J］. 国外医学肿瘤学分册，2005,32（2）:176-178.［8］Chen J, Ramos J, Sirisawad M, et al. Motexafin gadolinium induces mitochondriallymediated caspasedependent apoptosis［J］. Apoptosis, 2005,10(5):1131-1142.［9］Ly JD, Grubb DR, Lawen A. The mitochondrial membrane potential (ΔΨｍ)in apoptosis: An update［J］. Apoptosis, 2003,8(2):115-128.. ..。

NOX1 siRNA 对 TNF-α诱导的 A549细胞凋亡的影响

NOX1 siRNA 对 TNF-α诱导的 A549细胞凋亡的影响夏艳秋;王娜;阙菡雅;徐小艳;薛腾;燕贞;姚武;刘莹;周舫【摘要】目的：探讨NOX1对TNF-α诱导的A549细胞凋亡的影响。

方法：将A549细胞分为3组，空白组、TNF-α组和TNF-α＋NOX1 siRNA组。

TNF-α＋NOX1 siRNA组细胞采用瞬时转染技术转染特异性NOX1 siRNA，转染12 h后用含TNF-α（10μg／L）的培养基继续培养；空白组和TNF-α组细胞分别用培养基和含TNF-α的培养基培养。

48 h后，采用Annexin V-FITC和PI双染法检测细胞凋亡率，DCFH荧光标记法检测细胞中ROS的表达量，Western blot法检测NOX1及p-JNK蛋白的表达水平。

结果：与空白组相比， TNF-α组细胞凋亡率和ROS表达量升高（ P＜0．05），NOX1和p-JNK蛋白表达水平升高（ P＜0．05）；与TNF-α组比较，TNF-α＋NOX1 siRNA组细胞凋亡率和ROS表达量降低（P＜0．05），细胞中NOX1和p-JNK蛋白表达水平也降低（P＜0．05）。

结论：NOX1可能通过增加ROS的表达，进而激活JNK／MAPK信号通路，引起A549细胞的凋亡。

%Aim:To investigate the effect of NOX1 on apoptosis of A549 cells induced by TNF-α.Methods: A549 cells were allocated into 3 groups:blank control group,TNF-αgroup and TNF-α+NOX1 siRNA group.Cells in TNF-α+NOX1 siRNA group wer e transfected with NOX1 siRNA through the transient transfection technology for 12 h,then cultured with TNF-α(10 μg/L) for 48 h.Cells in blank control group and TNF-αgroup were only cultured with medium and TNF-α(10 μg/L) for 48 h,respectively.After culture, the apoptosis rate was detected by Annexin V-FITC and PI staining,the ROS level in cells was detected by DCFH fluorescent probe method, and the expressions of NOX1 and p-JNKprotein were detected through Western blot.Results:Compared with blank control group,the apoptosis rate,ROS level and the expres-sions of NOX1 and p-JNK were increased in TNF-αgroup( P<0.05); while compared with TNF-αgroup, the apoptosis rate,ROS level and the expressions of NOX1 and p-JNK were decreased in TNF-α+NOX1 siRNA group(P<0.05).Con-clusion:NOX1 could increase ROS level, then active JNK/MAPK signal pathway, and induce A549 cell apoptosis.【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2016(051)005【总页数】4页(P591-594)【关键词】A549细胞;NOX1;TNF-α;凋亡【作者】夏艳秋;王娜;阙菡雅;徐小艳;薛腾;燕贞;姚武;刘莹;周舫【作者单位】郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室郑州450001;郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室郑州450001;郑州市疾病预防控制中心公共卫生科郑州450000;郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室郑州450001;郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室郑州450001;郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室郑州450001;郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室郑州450001;郑州大学第一附属医院呼吸内科郑州450052;郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室郑州450001【正文语种】中文【中图分类】R734.2肺癌是目前中国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤[1]。

二氯乙酸钠诱导肺腺癌细胞株A549凋亡的实验研究

二氯乙酸钠诱导肺腺癌细胞株A549凋亡的实验研究朱明珍;茅国新;蒋华;王勇军【期刊名称】《现代医药卫生》【年(卷),期】2014(30)3【摘要】目的研究小分子药物二氯乙酸钠(DCA-Na)对人肺腺癌细胞株A549体外抗肿瘤及其诱导肿瘤细胞凋亡的作用,探讨其抗肿瘤作用的可能机制.方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察A549细胞在不同浓度DCA-Na处理24、48、72 h 后生长受抑制情况;使用流式细胞仪、透射电镜和Caspase 3试剂盒检测观察DCA-Na对A549细胞凋亡的影响.结果 DCA-Na能明显抑制A549细胞生长,呈浓度-时间依赖性;DCA-Na作用后电镜观察到典型的细胞凋亡形态学特征;Caspase 3试剂盒检测结果显示,DCA-Na可诱导A549细胞表达Caspase 3,其活性随DCA-Na剂量的增加而递增;与对照组比较,线粒体跨膜电位均明显下降,且去极化百分率随DCA-Na剂量及时间的增加而增加.结论 DCA-Na可诱导A549细胞株凋亡,线粒体跨膜电位下降可能是其诱导细胞凋亡的重要机制.【总页数】4页(P321-323,326)【作者】朱明珍;茅国新;蒋华;王勇军【作者单位】连云港市第二人民医院肿瘤科,江苏,连云港,222023;南通大学附属医院肿瘤中心,江苏,南通,226001;连云港市第二人民医院肿瘤科,江苏,连云港,222023;南通大学附属医院肿瘤中心,江苏,南通,226001【正文语种】中文【相关文献】1.盐霉素抑制人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP增殖及诱导凋亡的机制 [J], 曾葭;刘成成;祝爱珍;陈小宇;谭广销;刘革修2.CIK细胞对人肺腺癌A549／DD P耐药细胞株的抗增殖及诱导凋亡形态学研究[J], 吴金枝;谢曜爵;李宁3.康莱特注射液对吉非替尼诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡影响的实验研究∗ [J], 赵娜;魏素菊;洪雷;王俊艳;沈飞琼;张帆4.应用基因芯片技术筛选曲古菌素A诱导肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP差异表达的凋亡基因 [J], 汪亚君;张海涛;熊禹真;刘彬;伍俊5.二氯乙酸钠联合顺铂诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡的实验研究 [J], 单辉国;茅国新;潘骥群;周雪峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

臭壳虫含药血清诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的研究

臭壳虫含药血清诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的研究马科;孙媛;周丽萍;林莹;伏柏浓;李巧玲【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2018(40)7【摘要】目的探索臭壳虫(CKC)含药血清对人肺鳞癌A549细胞凋亡的影响.方法选取40只雄性SD大鼠,按体重随机分为4组:生理盐水对照组(NS)、臭壳虫低剂量(CKCL)组、臭壳虫中剂量(CKCM)组、臭壳虫高剂量(CKCH)组,分别给予大鼠相应的CKCL、CKCM、CLCH浓缩水煎剂进行灌胃,NS组给予等量生理盐水灌胃,连续5d.采用血清药理学方法制备含药血清;体外培养人肺腺癌A549细胞.使用流式细胞(FCM)Annen V-FITC/PI标记法检测A549细胞的凋亡率.结果臭壳虫含药血清能够诱导A549细胞的凋亡,且凋亡率随着剂量升高而上升,并和时间呈正相关性.臭壳虫高剂量组的作用最强,作用72h后,细胞凋亡率可达21.9％.结论臭壳虫含药血清能够诱导人肺腺癌A549细胞发生凋亡.【总页数】5页(P766-769,785)【作者】马科;孙媛;周丽萍;林莹;伏柏浓;李巧玲【作者单位】宁夏医科大学,银川 750004;宁夏医科大学附属回医中医院,吴忠751100;宁夏医科大学,银川 750004;宁夏医科大学总医院,银川 750004;宁夏医科大学,银川 750004;宁夏医科大学,银川 750004;宁夏医科大学,银川 750004【正文语种】中文【中图分类】R734.2【相关文献】1.人参单体Rh2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的体外研究 [J], 周东波;胡成平;苏晓丽;杨红忠2.大黄(廑)虫丸含药血清对人肺腺癌细胞A549增殖的影响 [J], 赵喜艳;姚博;黄瑞;李俊莲3.信号转导及转录激活因子3在紫铆因诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用的研究[J], 陈少阳;岳宏林;刘旭4.G-RH2诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究 [J], 张悦萌;张大力;安昌善5.S型与R型人参皂苷Rh2诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的体外研究 [J], 齐晓丹;张春晶;于海涛;师岩;孙艳;卢长方;陈刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

齐墩果酸诱导人肺腺癌细胞A549凋亡及其与细胞内钙离子的关系

齐墩果酸诱导人肺腺癌细胞A549凋亡及其与细胞内钙离子的关系卫小红;邵杰;王军辉;Asmitanand Thakur【期刊名称】《同济大学学报（医学版）》【年(卷),期】2009(030)005【摘要】目的通过检测齐墩果酸(oleanolic acid,OA)干预后的A549细胞的凋亡和其内钙离子浓度,探索OA对A549细胞的作用及其可能的机制.方法体外培养人肺腺癌细胞系A549.设0、10、20、40 μg/ml的OA浓度干预组.选择对数生长期的细胞,在不同浓度OA干预24 h,采用Annexin V/PI流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测各实验组细胞的凋亡情况,测定细胞的荧光强度值并计算出细胞内钙离子浓度;以曲线拟合描述细胞凋亡率与钙离子荧光强度之间的相关性.结果FCM检测显示10、20、40 μg/ml OA可诱导A549细胞凋亡,凋亡率呈现浓度-效应关系;20、40 μg/ml OA干预24 h,A549细胞凋亡率明显增加,与0 μg/ml组比较,差异有显著性(P<0.01);10、20、40 μg/mlOA组干预24 h,各药物干预组A549细胞内钙离子荧光强度均明显高于0 μg/ml组,荧光强度随OA浓度的提高呈现增加趋势,差异有显著统计学意义(P<0.01);曲线拟合显示细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度之间有明显相关性(R=0.981,P<0.01).结论 OA具有浓度依赖地诱导人肺腺癌细胞凋亡的作用;OA诱导细胞凋亡可能与其导致细胞内钙超载有关.【总页数】5页(P19-23)【作者】卫小红;邵杰;王军辉;Asmitanand Thakur【作者单位】西安交通大学医学院第一附属医院呼吸内科,陕西,西安,710061;西安521医院内科,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院呼吸内科,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院呼吸内科,陕西,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R734.2【相关文献】1.多西紫杉醇诱导人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549/CDDP凋亡的研究[J], 郭芮伶;吴国明;钱桂生;戢福云2.齐墩果酸诱导人乳腺癌细胞凋亡及与细胞内Ca2+水平关系的研究 [J], 黄敏珊;黄炜;吴其年;罗惠玲;张志凌;张东方;杨凤仪3.抗菌肽merecidin诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡 [J], 战仕胜;李军;杨婷婷;王雅蓉;王秀青4.重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白(rhTRAIL)逆转人肺腺癌细胞A549/CDDP耐顺铂效应的初步研究 [J], 张梅春;胡成平;陈琼;杨红忠;刘洪波5.人参配伍五灵脂对A549人肺腺癌细胞增殖抑制及诱导凋亡的实验研究 [J], 王瑾;任艳玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

榄香烯诱导肺癌A549细胞凋亡作用的剂量和时间依赖性研究

榄香烯诱导肺癌A549细胞凋亡作用的剂量和时间依赖性研究许浪刘丹晏丹李玉红成肇智=摘要> 目的探讨榄香烯对肺癌A549细胞的增殖抑制作用及其对细胞凋亡的影响。

方法每批细胞按空白对照组和药物处理组随机分组,检测榄香烯对癌细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞光度分析术(FCM )检测细胞凋亡率及细胞周期时相分布,同时进行细胞的形态学观察。

结果榄香烯存在剂量依赖性和时间依赖性,榄香烯在48h 、72h 对A549细胞周期有明显影响;榄香烯可阻滞A549细胞于S 期并诱导细胞凋亡,但细胞凋亡率并不完全与药物浓度成正相关。

结论榄香烯对肿瘤细胞具有较强的增殖抑制作用,在一定药物浓度范围内,随药物浓度的增加榄香烯可使细胞凋亡率升高,但超过一定作用浓度,药物的细胞毒作用增强,细胞凋亡率则呈下降趋势。

=关键词> 榄香烯;肺癌A549细胞;细胞凋亡基金项目:本项目受武汉科技大学校基金资助(编号:2005X Y36)作者单位:430065武汉科技大学医学院(许浪刘丹晏丹李玉红);湖北中医学院(成肇智)榄香烯是近年来我国首先从活血化瘀中药温莪术挥中提取的一种抗癌有效成分。

药理学试验表明,其抗癌疗效确切、毒副作用小、抗瘤谱广,具有广阔的应用前景[1]。

现已证实诱导肿瘤细胞凋亡是其抗癌作用机制的重要方面之一[2]。

本实验在以往研究的基础上探讨了榄香烯在不同药浓度时对肺癌A 549细胞凋亡的影响,以期为榄香烯临床上能更合理有效地用于肺癌治疗提供一些实验依据。

1 材料与方法111 材料和主要试剂榄香烯乳注射液由大连金港制药有限公司提供:肺腺癌细胞株A 549由重庆医科大学检验系临床生化教研室惠赠;A 54培养在加10%胎牛血清(杭州四季青公司)的R P M I1640培养液(H ydone 产品),内含青、链霉素10万/L,细胞在37e 5%CO 2培养箱培养;M TT 为S i gma 产品,二甲亚砜为分析纯,重庆东方试剂厂产品。